李颖 舒若

新辅助化疗对老年患者结直肠癌细胞增殖的影响研究

李颖1舒若2

目的 探讨新辅助化疗对老年人结直肠癌细胞增殖的影响，评价其临床疗效及指导临床应用。方法选择年龄60岁以上的结直肠癌患者60例进行术前新辅助化疗。用免疫组化法检测新辅助化疗前后老年结直肠癌患者癌细胞中增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA)的阳性指数变化。结果54例患者新辅助化疗后癌细胞中PCNA阳性指数较化疗前有不同程度的降低，6例患者PCNA阳性指数较化疗前增高。结论新辅助化疗可使老年人结直肠癌细胞的增殖降低。

新辅助化疗 老年患者 结直肠癌 细胞 增殖

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是一种常见恶性肿瘤，2007年全球新发病116.7万例，死亡60.3万例，均居恶性肿瘤的第三位［1］。我国每年新发病例约15万，死亡率17.4/10万人［2］，发病率居恶性肿瘤第四位［3］，死亡率居第五位［4，5］。随着我国工业化进展及居民饮食结构、生活方式的不断改变，我国结、直肠癌发病率呈明显的上升趋势，1991年至2000年在城市及农村的发病率分别上升了31.18%和17.51%［6］。目前我国人口结构呈整体老龄化趋势，临床工作中老年人结直肠癌患者愈发多见。

新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy，NC)是指对结直肠癌患者在手术之前给予全身化疗。NC可以不同程度地减轻肿瘤负荷，使肿瘤缩小，临床分期降低;可以使肿瘤细胞的凋亡率增加［7］，已成为结直肠癌的主要治疗手段之一。因此，近年来NC在结直肠癌中的应用已受到越来越多的重视。

1．材料与方法

1.1 材料 收集2010年2月至2012年3月在昆明医科大学第一附属医院干疗外科、胃肠外科收治的结直肠癌患者60例。患者年龄在60～74岁之间，平均年龄为65.7岁，其中男性32例，女性28例;高分化腺癌30例，中分化腺癌21例，低分化腺癌9例。经术前常规检查肿瘤全部为单发，其中位于升结肠8例、横结肠2例、降结肠10例、乙状结肠4例、直肠36例。所有病例均接受术前新辅助化学治疗及手术治疗，方案为FOLFOX-6方案。对其化疗前后的癌组织细胞PCNA阳性指数进行免疫组化检测。

1.2 方法 用免疫组化方法检测新辅助化疗前后老年结直肠癌患者癌细胞中PCNA的表达情况。以PCNA计数测定进行结果判定，在高倍显微镜下随机选取5个视野，计数1000个肿瘤细胞中PCNA表达阳性细胞数，以百分数表示，即为PCNA阳性指数，每例化疗前后PCNA阳性指数之差为增殖细胞降幅。

1.3 统计学方法 对试验数据采用t检验及方差分析进行显著性检验，两样本均数间的比较先进行方差齐性检验，方差相等时采用t检验;样本率之间的比较采用χ2检验或确切概率法(Fisher＇s exact probability)。用SPSS 16.0版本统计软件处理分析数据，以P＜0.05表示差异有显著性。

2．结果

本组60例结直肠癌患者接受新辅助化疗后有54例PCNA阳性指数较化疗前有不同程度地降低，降幅在1.5%～30%之间(具体见图A、图B、图C、图D)，但还有6例患者PCNA阳性指数较化疗前增高，增幅在0.5%～5%之间(具体见图E、图F)。

新辅助化疗前后PCNA表达阳性指数的比较:新辅助化疗前PCNA表达阳性指数最高为91.5%，最低为31.6%，平均为55.52%±17.24%，化疗后PCNA表达阳性指数最高为78.0%，最低为10.5%，平均为43.46%±18.69%，前后两组配对t检验，t=1.1417，P=0.000＜0.05，说明新辅助化疗前后结直肠癌的肿瘤细胞增殖率之间存在显著性差异(表1)。

化疗后PCNA阳性指数增高的6例患者，化疗前后两组配对t检验，t=-0.944，P=0.388＞0.05，前后两组PCNA阳性指数差异无统计学意义。

表1 新辅助化疗前后老年患者结直肠癌细胞PCNA计数的比较

3．讨论

3.1 新辅助化疗药物及方案的选择 欧洲多中心随机对照试验(multicenter interna-tional study of oxalip latin/5FULV in the adjuvant treatment of colon cancer，MOSAIC)临床研究是一项评价在Ⅱ期、Ⅲ期结肠癌患者中应用FOLFOX 4方案(5-FU，LV与OXA联合化疗第4套方案)辅助化疗疗效的临床试验［8］，该研究在2002年美国临床肿瘤协会年会首次报道了安全性数据。2003年至2007年，ASCO年会上研究者报道了应用FOLFOX4组的结直肠癌患者3年、5年无病生存率均优于5-FU/LV组，6年Ⅲ期患者中总生存率亦优于5-FU/ LV组，研究该项证实了结肠癌患者术后应用FOLFOX方案辅助化疗的优势。此方案在国内已广泛应用，临床疗效也得到证实。由于老年患者随着年龄的增加，身体各组织器官自然老化，器官功能逐渐衰退，新陈代谢过程变慢，免疫系统的功能也显著降低，为减少化疗药物所带来的副反应，利于下一步的手术治疗，本研究的60例老年结直肠癌患者的新辅助化疗采用了治疗周期更短的FOLFOX6方案。

3.2 新辅助化疗对癌组织细胞增殖的影响 赵海霞等［9］研究结果显示:PCNA在结直肠癌组织表达明显增加，在高分化癌组织中阳性率为33.3%，而在低分化结直肠癌中表达阳性率为85.7%，差异非常显著，提示PCNA与结直肠癌的组织分化程度相关，能够反映结直肠癌的恶性程度。

本组研究结果显示:新辅助化疗前老年患者结直肠癌组织细胞中PCNA的表达计数最高为91.5%，最低为31.6%，平均为55.52%±17.24%;化疗后PCNA的表达计数最高为78.0%，最低为10.5%，平均为43.46%±18.69%，前后两组配对t检验，t=1.1417，P=0.000＜0.05。差异有显著性。表明新辅助化疗可以使老年结直肠癌患者的肿瘤细胞增殖降低，从而抑制肿瘤生长。

另外，在本研究中，60例结直肠癌患者肿瘤细胞中PCNA的表达有6例较化疗前有所增高，其原因可能与结直肠癌细胞多药耐药性(Multidrug Resistance，MDR)有关。MDR基因主要有MDR1和MDR2两种基因，与MDR密切相关的是MDR1基因。MDR1基因编码一个分子量为170KD的膜糖蛋白(P-glycoprotein，Pgp)，Pgp可以使细胞毒药物在细胞内蓄积减少、浓度降低，从而降低了化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，同时对不同的亲脂药物产生交叉耐药性［10］。但Yin等［11］认为肿瘤细胞的增殖和MDR1的表达受环型腺苷酸(cAMP)依赖性蛋白激酶的调控，由于蛋白激酶的活性增强，促进了细胞DNA的合成，细胞的增殖能力增强，同时，MDR1的表达亦增强，两者无明显关系。另有研究［12］表明:大肠癌细胞PCNA与Pgp的表达无明显相关，肿瘤细胞增殖能力的增强与MDR无明显关系。因此，我们的研究中6例结直肠癌肿瘤细胞PCNA的表达较化疗前有所增高的原因需要进一步研究。

对于老年进展期结直肠癌患者，根治性手术加术后化疗的治疗方案效果不是很理想，患者总体预后较差，可能与肿瘤早期易于扩散，特别是远处微转移灶和淋巴结及癌灶根治性切除率低有关［13］。新辅助化疗可以使肿瘤组织缺血、缺氧，进而使细胞发生坏死，同时可以诱导肿瘤细胞发生程序性细胞死亡即细胞凋亡［14］来弥补“手术+术后化疗”的不足，增加疗效以改善预后，可使老年进展期结直肠癌患者有更多的获益。当然，影响结直肠癌患者预后的因素较多，要确定哪些因素是独立影响因素，哪些是最重要的影响因素，还需要多中心、大样本的临床研究。进一步明确新辅助化疗对老年结直肠癌患者长期生存状况的影响及该方法的优势，仍需长时间的临床观察及随访。

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Effect of Neoadjuvant chemotherapy on cell proliferation of elderly patients colorectal cancer

(LI Ying1，SHU Ruo2.1. Dept.of VIP Surgery Ward;2.Dept.of Gastroenterology and Hernia Surgery，The 1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650031，China.)

Objectives To study the influence of neoadjuvant chemotherapy on human colorectal cancer cell proliferation in elderly patients.MethodsImmunohistochemical assay before and after neoadjuvant chemotherapy in colorectal cancer cells PCNA-positive index changes.Results54 cases of colorectal cancer patients before neoadjuvant cancer chemotherapy PCNA-positive index was significantly lower after chemotherapy，6 patients before chemotherapy PCNA-positive index was increased.ConclusionsThe new adjuvant chemotherapy in colorectal cancer cell proliferation decreas.

Neoadjuvant chemotherapy，Elderly Patients，colorectal cancer，cell proliferation

10.3969/j.issn.1672-4860.2015.05.015

2015-7-22

昆明医科大学第一附属医院 1.干疗外科 2.胃肠与甲状腺外科 650031