吴 波，罗厚强，段龙川，杨飞萍

(1.温州市动物疫病预防控制中心，浙江温州325000;2.温州科技职业学院动科系;3.温州市农产品检测中心)

磺胺间甲氧嘧啶(SMM)是高效人工合成类抗菌药，抗菌作用和预防细菌感染效果属磺胺类中最强［1、2］，常用于防治畜禽菌源性感染和球虫病［3］，也可用作饲料添加剂，以提高畜禽抗病力和生产性能。磺胺类药物残留期较长，容易在畜禽产品中残留。药物残留可破坏人体造血系统，引起溶血性贫血症、粒细胞缺乏症、血小板减少症等，容易导致细菌耐药性的产生［4、5］。

药物的原型及代谢产物在机体内的残留消解是一个复杂的过程，不同畜种的残留消解规律有所不同［6］，国内外的科研人员曾研究了SMM 在猪［1］、山羊［7］、家兔［8］、马［9］等动物体内的药代动力学过程。但是，黄羽肉鸡可食组织中的药物残留消解规律研究至今未见报道。为了保证黄羽肉鸡产品安全可靠，维护消费者利益，笔者通过磺胺间甲氧嘧啶药物在黄羽肉鸡组织内的休药期验证试验，以掌握该药物在不同组织内的残留消解规律，同时为合理给药以达到最佳疗效提供参考，特进行本试验。

1 材料与方法

1.1 药品及仪器 磺胺间甲氧嘧啶钠:商品名制菌磺，SMM 含量45%，生产批号:20140121，购自广东某动物保健品有限公司。SMM 对照品:含量99.23%，购自Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司，纯度不低于98.0%。ACQUITY UPLC-Xevo TQ 超高效液相色谱-串联质谱联用仪，配有电喷雾离子(ESI)源;高速冷冻离心机，超声清洗仪，旋转蒸发仪，漩涡混匀器。

1.2 试验动物及分组 40日龄黄羽肉鸡160 羽，体重1.5 ±0.2 kg，公母各半，试验前确保无磺胺类药物使用记录。

供试鸡随机分为对照组和低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)三个磺胺类药物梯度剂量试验组，每组40 羽。

1.3 饲养管理及给药方法 供试肉鸡全部笼养，自由采食和饮水。40日龄开始，对照组仅饲喂基础日粮，试验组饲料中分别以50 mg/kg、100 mg/kg 和200 mg/kg 水平添加磺胺间甲氧嘧啶钠，连喂7 d 后停药，停药后不同时间点测定供试黄羽肉鸡可食组织中SMM 残留量。

1.4 采样及样品处理 停药后0 d，3 d，10 d，15 d，20 d，25 d，28 d，30 d，32 d，35 d 时间点每组随机选取4 羽，称重后立即屠宰、取样。每鸡各取胸肌和腿肌约25 g、全肝、全肾，样品编号后置－20℃冷冻保存，待测。

取5.0 g 经切碎匀浆的可食组织样品，置50 mL离心管中，加入无水硫酸钠5 g 和乙腈20 mL，涡旋混匀2 min，超声5 min，以8 000 r/min 冷冻离心5 min。将上层提取液转移至100 mL 棕色鸡心瓶中，残渣加入乙腈20 mL 重复操作1 次。合并提取液，向鸡心瓶中加入异丙醇10 mL。置40℃以下水浴减压浓缩至近干，用氮气吹干。准确加入1.0 mL 初始流动相，涡旋混匀溶解残留物，转移至10 mL 具塞聚丙乙烯离心管中，加入正己烷1 mL，混匀，以10 000 r/min 冷冻离心5 min，取下层液过0.2 μm 微孔滤膜，滤液待测定。

1.5 测定方法

色谱条件:色谱柱:ACQUITYUPLCTMBEHC18色谱柱(100 mm×21 mm，1.7 μm;Waters 公司);柱温35℃;样品温度10℃;进样体积5 μL;流动相A为乙腈，B 为0.1%(体积分数)甲酸水溶液;流速:0.25 mL/min。

质谱条件:电离方式ESI +;电离电压:3.50 kV;离子源温度:150℃;锥孔反吹气流量:50 L/h;脱溶剂气温度:350℃;脱溶剂气流量:800 L/h;采集模式:多反应监测(MRM);碰撞室气流量:0.2 mL/min。

1.6 回收率和精密度测定 采用未检测出磺胺间甲氧嘧啶钠的肌肉、肝及肾样品作为空白样品，分别进行加标回收及精密度试验，每个浓度设4 个平行样品，结果详见表1。

表1 方法回收率及精密度实验数据

由表1可见，加标回收率范围100% ～120%，相对标准偏差均小于9.0%，表明SMM 0.1 mg/kg残留浓度附近具有较高的准确度。

3 结果与分析

3.1 停药后各时间点黄羽肉鸡可食组织中SMM 残留量测定 详见表2。

表2 磺胺间甲氧嘧啶在黄羽肉鸡组织中的消解规律

由表2可见，对照组肉鸡的肌肉、肝、肾组织中均未检测到SMM。试验组肉鸡各停药时间点可食组织中SMM 残留浓度，停药0 d 时，中剂量组肌肉、肝和肾组织中残留量分别为5.231 mg/kg、10.240 mg/kg 和15.439 mg/kg，SMM 在组织中浓度分布差异较大，三个梯度试验组组织残留量高低顺序依次为肾＞肝＞肌肉。

SMM 在停药0－3 d 区间内残留消解速度较快，如图1所示。其中，肾组织在0 d 时残留浓度最高，残留量下降速度最为迅速，中剂量试验组10 d后，残留量低于我国最高残留限量标准(0.1 mg/kg)［10］，残留浓度为0.090 mg/kg，停药30 d 后，未检出残留物;中剂量试验组肝组织在停药15 d 后SMM 残留量已低于最高残留限量标准，残留浓度为0.088 mg/kg，停药35 d 后，未检出残留物;肌肉组织SMM 残留代谢消解相对缓慢，停药30 d 后，药物残留量为0.084 mg/kg。

图1 磺胺间甲氧嘧啶在黄羽肉鸡组织中的消解规律

3 小结与讨论

三个剂量试验组在黄羽肉鸡肾组织中代谢消解较快，其次是肝组织，肌肉组织中SMM 代谢消解速度较缓慢。在0 d，三个梯度剂量试验组SMM 残留浓度差异明显，15 d 后残留浓度及消解速度趋于一致。中剂量试验组肌肉、肝、肾组织分别停药30 d、15 d、10 d 后，残留量均低于我国规定的最高残留限量标准。

2005年版《中国兽药典》规定磺胺间甲氧嘧啶在肉鸡中的休药期为28 d。黄羽肉鸡品种生长周期相对较长，药物代谢速度可能低于其他肉鸡品种，肌肉组织中的SMM 残留量在28 d 时则尚未达到安全标准。

根据本次试验，笔者认为针对黄羽肉鸡品种，在临床使用SMM 时，28 d 的休药期可能尚不安全，应按照30 d 或者以上的休药期执行，才能确保黄羽肉鸡可食组织中的SMM 残留低于国家规定的最高限量标准。

［1］岳永波，杨国辉，魏占勇，等.磺胺间甲氧嘧啶在猪体内的药代动力学及生物利用度［J］.畜牧与兽医，2005，37(10):34－36.

［2］华南农学院.兽医药理学［M］.北京:中国农业出版社，1980:228.

［3］宋艳红，王冉，刘铁铮，等.高效液相色谱法测定蛋清和蛋黄中五种磺胺类药物残留［J］.浙江农业学报，2007，19(1):42－45.

［4］袁玉花，武力，陈宝妮，等.长效复方磺胺间甲氧嘧啶注射液在猪体内的药物代谢动力学研究［J］.中国兽医科技，2004，34(6):9－12.

［5］宁军，韦田，邹桂林，等.磺胺二甲嘧啶在麻黄鸡组织中残留消除规律研究［J］.中国兽药杂志，2010，44(9):19－21.

［6］操继跃.兽医药物动力学［M］.北京:中国农业出版社，2005:35－39.

［7］扈文杰，王建元，李富娥，等.磺胺－6－甲氧嘧啶在奶山羊体内代谢动力学的研究［J］.西北农学院学报1982，(4):45－50.

［8］李引乾，弓广智，赵明英，等.磺胺间甲氧嘧啶在家兔体内的药代动力学研究［J］.杨凌职业技术学院学报，2003，2 (2):1－3.

［9］解启英，李涛，王振隆，等.磺胺－6－甲氧嘧啶(DS－36)在马体内代谢动力学的研究［J］.东北农学院学报，1981，4:51－54.

［10］中华人民共和国农业部公告第235 号.动物性食品中兽药最高残留限量［S］.