全艳玲，于洪梅，贾宏敏，陈 阳

(辽宁科技大学 化学工程学院，辽宁 鞍山 114051)

抑菌圈法比较研究两种聚胍杀菌性能

全艳玲，于洪梅，贾宏敏，陈 阳

(辽宁科技大学 化学工程学院，辽宁 鞍山 114051)

通过设计抑菌圈试验，对两种聚胍——聚六亚甲基双胍盐酸盐和聚六亚甲基单胍盐酸盐的杀菌性能进行了比较研究，考察了两种聚胍对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌效果。结果表明，两种聚胍对上述四种常见致病细菌均有很好的杀菌能力，并且两种聚胍具有协同杀菌作用。

聚六亚甲基双胍盐酸盐; 聚六亚甲基单胍盐酸盐; 杀菌效果; 协同作用

用于制菌和杀菌的化学因素很多，因此评价消毒剂药效的实验是微生物工作者经常面对的，也是教学中的重点。本课题组对胍基消毒剂已进行了多年的研究，我们结合科研促进教学的要求，将科研成果转化成教学内容，对自制的两种聚胍——聚六亚甲基双胍盐酸盐和聚六亚甲基单胍盐酸盐的杀菌性能进行比较研究，增加一个微生物实验。聚六亚甲基双胍盐酸盐[1-3](polyhexamethylene biguanidine hydrochloride，PHMB)是一种高效广谱消毒杀菌剂，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和酵母菌等均有杀灭作用，其安全性得到美国FDA和EPA认可。聚六亚甲基单胍盐酸盐(polyhexamethylene guanidine hydrochloride，PHGC)是一种新型高分子聚合物杀菌消毒剂，由于其具有良好的杀菌效果和安全性，近年来，在医药、植保、工业产品、食品及日用品等方面得到愈来愈广泛的应用[4-6]。在开发这两个产品时，通过设计抑菌圈实验，考察了两种聚胍PHMB和PHGC对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等四种常见致病细菌的抑菌效果，同时考察了两种聚胍复配后对上述四种常见致病细菌的抑菌效果。

1 实验

1.1 试剂

聚六亚甲基双胍盐酸盐(PHMB)，聚六亚甲基单胍盐酸盐(PHGC)，无水乙醇(分析纯)，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、铜绿假单胞菌，琼脂，蛋白胨，牛肉膏，盐酸(优级纯)，氯化钠(分析纯)。

1.2 主要仪器

卧式压力蒸汽灭菌器，移液枪，热鼓风干燥箱，超净工作台，电子天平，滤纸片，生化培养箱，数控超声波清洗器，电子万用炉，培养皿，试管，酸度计，游标卡尺。

1.3 抑菌圈试验[7]

1)溶液的配制。用去离子水将PHMB和PHGC配制成试验所需的不同浓度的溶液，并调pH值为中性。

2)菌种活化。用接种环将保存于4 ℃下的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌、铜绿假单胞菌分别挑取一环接种至装有液体培养基的250 mL锥形瓶中，在37 ℃水浴恒温振荡箱中培养24 h，作为实验用原菌液。

3)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基。分别取蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、NaCl 5 g、琼脂20 g和水1 000 mL加入到烧杯中，自然pH值。加热煮沸使琼脂充分溶解后制成固体培养基，用于培养细菌。

4)将实验所需的溶剂、培养基、玻璃仪器等在121 ℃下灭菌30 min。

5)用移液枪分别取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌、铜绿假单胞菌菌悬液50 μL加至已灭菌的培养皿中，将溶化后的琼脂培养基冷却至50 ℃左右，以无菌手续倾注入培养皿中。每个内径9 cm的平皿倾注15～20 mL，置水平位置迅速旋动平皿，混合均匀后，取直径5 mm的滤纸片分别沾取不同杀菌剂溶液置于培养基平板上，于37 ℃下恒温培养18 h，观察并用游标卡尺量取抑菌圈大小。

2 结果与讨论

2.1 不同浓度的PHGC抑菌效果

表1 不同浓度的PHGC抑菌效果

2.2 不同浓度的PHMB抑菌效果

实验采用抑菌圈法考察了不同浓度的PHMB对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和铜绿假单胞菌四种常见致病细菌的抑菌效果，实验结果见表2。结果表明，PHMB在不同的浓度下对四种常见致病细菌均有一定的抑菌作用，并且抑菌作用随着浓度的升高而逐渐增强。实验结果还表明， PHMB在同一浓度下，对不同细菌的抑制能力不同，抑制效果大小顺序为：大肠杆菌>铜绿假单胞菌>金黄色葡萄球菌>白色葡萄球菌。

表2 不同浓度的PHMB抑菌效果

2.3 PHMB和PHGC不同组合浓度的抑菌效果

表3 PHMB和PHGC不同组合浓度的抑菌圈大小

3 结束语

本文通过抑菌圈试验，考察了聚六亚甲基双胍盐酸盐(PHMB)和聚六亚甲基单胍盐酸盐(PHGC)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌效果，同时考察了两种聚胍复配后对上述四种常见致病菌的抑菌效果。结果表明，PHGC和PHMB在不同的浓度下对四种常见致病细菌均有一定的抑菌作用，并且抑菌作用均随着浓度的升高而逐渐增强。结果还表明，两种聚胍消毒剂具有协同杀菌作用。

[1]苏伟东, 孙贵娟, 卢桂宁, 等. 一种聚六亚甲基双胍复方消毒剂杀菌性能及毒性的实验研究[J]. 实用预防医学, 2009, 16(5): 1615-1617.

[2] 陈巧芝, 崔玉杰, 栗华, 等. 聚六亚甲基双胍复方消毒剂医院消毒应用研究[J]. 河北医药, 2009, 31(6):668-670.

[3] 刘仲霞, 陆武韬, 苏伟东. 一种复方聚六亚甲基盐酸双胍消毒液消毒相关性能研究[J]. 中国消毒学杂志, 2011, 28(4):448-450.

[4] 李光, 陈红, 江建明. 胍基聚合物的合成及抗菌性能[J].高分子材料科学与工程, 2002, 18(4):85-87.

[5] 黄新宇. 盐酸聚六亚甲基胍消毒剂研究进展[J]. 中国卫生工程学, 2005, 4(5):324-325.

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[7] 卫生部卫生法制与监督司. 消毒技术规范[S]. 北京: 中华人民共和国卫生部, 2002: 84.

Comparative Study on the Germicidal Efficacy of Two Kinds of Poly Guanidine by Inhibition Zone Method

QUAN Yanling, YU Hongmei, JIA Hongmin, CHEN Yang

(School of Chemical Engineering, University of Science and Technology Liaoning, Anshan 114051, China)

The germicidal efficacies of polyhexamethylene biguanidine hydrochloride and polyhexamethylene guanidine hydrochloride were comparatively studied to Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus and Pseudomonas aeruginosa by inhibition zone method. The results showed that two kinds of poly guanidine for the above-mentioned four kinds of common pathogenic bacteria have significantly bactericidal capacity, and both have synergistic effect on germicidal efficacy.

polyhexamethylene biguanidine hydrochloride; polyhexamethylene guanidine hydrochloride; germicidal efficacy; synergistic effect

2014-05-17

2014年鞍山市科技基金资助项目。

全艳玲(1967-)，女，硕士，副教授，研究方向：微生物菌种选育和微生物发酵。

于洪梅(1971-)，女，博士，教授，研究方向：药物中间体的合成。

R187.1

A

10.3969/j.issn.1672-4550.2015.03.009