谢雷 石欣蕾 任安石 高华春 陈全成

·实验研究·

茶油常见临床用药的药理药效基础研究

谢雷 石欣蕾 任安石 高华春 陈全成

目的 探讨茶油多种临床用药可能的药理药效基础。方法 将油茶籽经两次95%的乙醇回流提取后浓缩至不含乙醇和水的提取物, 取其中的茶油部分作为试验药物；用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞建立细胞炎症模型, 进一步用蛋白质印迹技术观察药物处理对细胞炎症因子IκB-α表达的影响进而评价茶油是否具有抗炎活性。结果 从油茶籽提取得到的茶油显著地抑制细胞中TNF-α诱导的IκB-α的降解从而抑制炎症发生。结论 茶油对细胞显示良好的抗炎作用, 这种特性可能是其临床应用于治疗皮肤过敏、暗疮、疥癣、小儿红屁股、以及皮肤烧烫伤等多种与炎症相关疾病的药理基础之一。

茶油；药理药效；抗炎

茶油系山茶科植物油茶(Camellia oleifera Abel)或小叶油茶(C.meiocarpa Hu, ms.)的成熟种子经压榨法得到的脂肪油［1］,茶油的成份以不饱和脂肪酸为主, 包括油酸、亚油酸和亚麻酸, 不饱和脂肪酸含量达90%左右, 其中又以油酸含量最大,占到80%以上。此外, 据报道茶油中还含有山茶苷、山茶皂苷、茶多酚、角鲨烯等多种次生代谢产物［2］。茶油除了食用外,在《中国药典》中被作为药用油脂收录, 《纲目拾遗》、《农政全书》、《中华本草》等中医药典籍中曾记录其具有清热解毒、润燥、杀虫、息风等作用, 临床用药中多以单方或配方用于治疗皮肤过敏、暗疮、疥癣、小儿红屁股、以及皮肤烧烫伤等多种与炎症有关联的疾病［3-6］。为了更好地说明茶油在临床使用中所起的药效作用, 作者采用体外细胞模型对其存在的抗炎活性进行实验观察与评价, 旨在为茶油的临床用药提供基础实验依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 仪器、试剂和材料 仪器：电子天平BS224S(赛多利斯科学仪器北京有限公司), 凝胶电泳仪(北京六一)。试剂和材料：试剂主要包括95%市售食用乙醇、含10% FBS与streptomycin/penicillin的DMEM细胞培养液 (Hyclone), TNF-α(PeproTech), Iκ B-α (Abcam)及β-actin (Sigma-Aldrich)蛋白抗体等, MCF-7细胞购自美国ATCC, 油茶籽(福建山宝油茶有限公司提供)来源于福建省龙岩上杭县。

1.2 方法

1.2.1 茶油的提取 取油茶籽4.5 kg, 粉碎后加入2.5 L 95%的乙醇于回流提取装置中加热回流提取2.5 h, 过滤；再加入2.5 L乙醇重复提取一次, 过滤并合并滤液；用旋转蒸发仪减压浓缩到不含乙醇和水, 最终得到油膏状乙醇提取物750 g。将提取物放入4℃冰箱中24 h使提取物中的固形物与茶油分层, 用吸管吸出茶油过滤后备用。

1.2.2 细胞培养 将冻存的MCF-7细胞解冻后移至加有DMEM培养基的10 cm培养皿并放于空气中含5% CO2的细胞培养箱中复苏及传代培养, 最终取处于对数生长期的细胞进行活性实验研究。

1.2.3 药物处理 取处于对数生长期的MCF-7细胞接种于六孔板, 密度30%～40%, 培养24 h后细胞贴壁, 吸掉培养基,用1×PBS洗2次, 吸掉PBS后无血清加入2 μl/ml上述提取的茶油样品处理3 h, 然后再加入10 ng/ml的TNF-α分别处理10、20和30 min后收集细胞。

1.2.4 蛋白质印迹检测 将收集的细胞用NP-40裂解液(含蛋白酶抑制剂混合物和磷酸化酶抑制剂)冰上裂解15 min,裂解液转入1.5 ml离心管, 12000 RPM低温离心15 min, 吸取上清液加入5×loading, 煮5 min, 10%的SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离, 100 V转膜1 h, 5%牛奶封闭1 h, 一抗孵育过夜, 二抗孵育1 h, 胶片曝光检测Iκ B-α蛋白, 以β-actin作为内参。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件处理数据。实验中统计方法采用T-test分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 样品制备 油茶籽通过提取得到金黄色透明的茶油样品, 有浓重粗榨茶油香气。

2.2 茶油的抗炎作用 实验中单独用TNF-α处理MCF-7细胞可以观察到随时间的增加, 细胞中的Iκ B-α的蛋白表达水平逐渐减少, 可见TNF-α处理导致细胞中的Iκ B-α降解(P＜0.05)(见图1, 第2、6和10道)。而以茶油(CY)预处理MCF-7细胞发现TNF-α 诱导的Iκ B-α降解作用被明显阻止(P＜0.05)(见图1, 第8和12道分别与第6和10道对照)。

以上实验结果显示茶油可以抑制TNF-α诱导的炎症通路, 初步表明茶油可能具有良好的抗炎作用。

图1 茶油对乳腺癌细胞MCF-7中TNFα诱导的IκB-α表达的影响

3 讨论

TNF-α是一种能与细胞膜上受体特异结合进而发挥促进细胞生长、分化、凋亡及诱发炎症等广泛生物学效应的细胞因子。Iκ B-α是核因子κB(免疫球蛋白K轻链基因增强子)抑制蛋白的α亚基, IκB从NF-κB复 合体中解离并降解是NF-κ B信号通路激活和参与炎症应答及基因调控的必要条件［7］。本实验结果初步表明油茶籽中提取的茶油可以有效地抑制TNF-α引起的IκB降解, 因此可能具有潜在的抑制炎症发生的功效, 而这种功效可能是茶油临床应用于治疗皮肤过敏、暗疮、疥癣、小儿红屁股、以及皮肤烧烫伤等多种与炎症相关疾病的药效基础之一。这些研究结果为茶油的临床用药提供了一些基础的实验依据。

［1］ 国家药典委员会.茶油.中国药典(一部).北京：中国医药科技出版社, 2010:386-387.

［2］ 谢蓝华, 周春灵, 李伟云, 等.热榨法和冷榨法制取茶油的品质差异及其在护肤美容上的应用研究.农产品加工(学刊) 2010(7):58-61,65.

［3］ 邹清容, 禤丽萍.茶油抗炎、抗菌作用的临床应用进展, 2013, 22(12):12-13.

［4］ 胡鑫.中药治疗牛疥癣.兽医科技杂志, 1982(3):29.

［5］ 李金花, 丁明丽.茶油联合氢氧化钙溶解液治疗烧伤的疗效观察.中国疗养医学, 2009, 18(5):469-470.

［6］ 陈凤珍, 苏碧霞, 梁美德, 等.茶油预防新生儿红臀的疗效观察.中国校医, 2013, 27(11):823, 825.

［7］ 徐洁, 姚红兵.TNF-α信号传导通路的研究现状.泸州医学院学报, 2007, 30(2):156-158.

Research of pharmacological effect basis of usual clinical medications with camellia oil

XIE Lei, SHI Xinlei, REN An-shi, et al.School of Pharmacy, Xiamen University, Xiamen 361102, China

Objective To explore the possible pharmacological effect basis of usual clinical medicationswith camellia oil.Methods After twice 95% ethanol reflux extraction of camellia seed, the solution was concentrated to the extractive without ethanol and water.Camellia oil in the extractive was taken as study drug.Human breast adenocarcinoma cell line (MCF-7) cell was managed by tumor necrosis factor (TNF)-α to build a cell inflammation model.Influence of drug treatment on cell inflammatory cytokines IκB-α was observed by Western blot, in order to make evaluation on whether camellia oil possesses anti-inflammatory activity.Results Camellia oil extracted from camellia seed had significantly inhibiting effect on degradation of IκB-α induced by TNF-α, so as to suppress occurrence of inflammation.Conclusion Camellia oil has precise anti-inflammation effect on cells, and this effect may be one of its pharmacological basis for treating inflammation related diseases as skin allergy, pimples, scabies, pediatric bunda vermelha, skin burn and scald.

Camellia oil; Pharmacological effect; anti-inflammation

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.210

2015-01-15］

厦门市科技计划项目(项目编号：3502Z20123015)；国家自然科学基金(项目编号：81102332)

361102 厦门大学药学院

陈全成