孙俊红 李雷花

戊型肝炎病毒检测方法学评价

孙俊红 李雷花

目的 为戊型肝炎病毒检测选择适当的方法。方法 使用抗-戊型肝炎病毒-IgG(HEV IgG)和抗-戊型肝炎病毒-IgM(HEV IgM)检测方法对200份急性非甲非乙非丙型肝炎患者血清和200份健康人血清及50例散发性戊型肝炎患者血清进行检测。结果 在急性非甲非乙型肝炎患者血清中,抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV RNA阳性率分别25.50%、18.50%和16.50%。在戊肝系列血清检测中,抗-HEV IgG阳性率发病1个月内为74.0%, 发病3个月94.0%, 6个月38.0%, 12个月35.4%, 24个月8.6%。抗-HEV IgM阳性率发病1个月内为92.0%, 发病3个月34.0%, 6个月4.0%, 12个月1.0%。抗-HEV IgM在发病初期产生, 多数在3个月阴转, 即抗HEV IgM阳性是近期HEV感染的标志。而HEV IgG持续时间相对较长, 多数于发病后6～12个月转阴, 但亦有持续几年者。尽管大部分抗-HEV IgM阳性血清抗-HEV IgG也呈阳性, 但也确有少数抗-HEV IgG为阴性的。结论 抗-HEV IgM检测是诊断戊肝近期感染最重要的方法, 抗-HEV IgG检测对戊肝感染长期鉴别诊断最为重要。

戊型肝炎病毒；戊肝病毒-IgG；戊肝病毒-IgM

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)引起, 是一种单股正链RNA病毒, 既往认为戊肝主要经消化道传播, 由饮用被戊肝污染的水源或食用被污染的食物所致［1］。近年来, 随着对戊肝传播途径的研究不断深入, 经血液传播的直接和间接证据不断积累, 为戊型肝炎病毒不同时期检测寻找合适的方法也至关重要。作者利用酶联免疫试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测了急性散发性戊肝血清中抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 血清标本 患者血清来自濮阳市各医院住院患者, 健康人血清来自濮阳正常人群。

1.2 抗-HEV IgG及IgM检测方法［2］用抗-人IgGu链、抗人IgMu链包被反应板, 每个样本待测孔加入样品稀释液100 μl, 再加入待测样本10 μl。置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入酶结合物100 μl, 封板, 置37℃水浴30 min；洗板5次,每孔加入显色剂A、B液各50 μl, 封板, 置37℃显色10 min,每孔加终止液50 μl, 终止反应。在450 nm波长处测吸光度A值, ≥Cut off值为阳性, 反之为阴性。根据对200份健康人群血清检测, 将Cut off 值定为0.25+阴性对照平均值。

2 结果

2.1 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEVRNA检测结果 急性非甲非乙非丙型肝炎血清抗-HEV IgG、IgM和HEV RNA检测共检测急性非甲非乙非丙型肝炎血清200份, 健康人血清200份, 结果见表1。在抗-HEV IgM和HEV RNA均为阳性的血清中, 有4份抗-HEV IgG为阴性, 其余均为抗-HEV IgG也阳性。而在51份抗-HEV IgG阳性的血清中, 抗-HEV IgM阳性者占70.6%(36/51), HEV RNA阳性者仅占62.7%(32/51)。结果表明用抗-HEV IgG检测戊肝高危人群, 阳性率明显高于抗-HEV IgM及HEV RNA。

2.2 戊型肝炎患者抗-HEV IgG和IgM抗体检测的比较分析55例HEV抗体阳性的患者血清, 抗-HEV IgG和IgM同时阳性的33份, 两者一致率为60.0%；单独IgG抗体阳性的22份, 占40.0%；单独IgM抗体阳性的4份, 占7.3%。

2.3 戊型肝炎患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA动态检测结果 对50例散发性戊型肝炎患者的系列血清检测结果, 见表2。在发病1个月内, 46例抗-HEV IgM阳性者中, 37例抗-HEV IgG同时阳性, 9例抗-HEV IgG阴性；而37例抗-HEV IgG阳性中, 有35例抗-HEV IgM同时阳性, 2例抗-HEV IgM及HEV RNA阴性。50例戊肝患者血清中,抗-HEV IgG阳性和抗-HEV IgM阳性累计为97.5%。

结果表明, 抗-HEV IgM抗体出现时间早, 发病后1个月内阳性率为92.0%(46/50), 2～4个月内逐渐转阴, 个别患者可持续1年。抗-HEV IgG检出率在1个月后逐渐升高, 2～6个月阳性检出率达到高峰, 且持续时间较长, 6～12个月逐渐转阴, 个别持续时间较长, 达2～3年。而HEV RNA检出率和存在时间均比抗-HEV IgM和抗-HEV IgG低, 但HEV RNA检测结果阳性, 即可判定为HEV感染, 为HEV感染的确证试验。

表1 急性非甲非乙非丙肝炎血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA检测［n(%)］

表2 戊肝患者血清抗-HEV IgG、IgM及HEV RNA动态检测结果［n(%)］

3 讨论

抗-HEV IgG、抗-HEV IgM、HEV RNA这三项指标在戊肝诊断中, 抗-HEV IgG检测价值较大, 因其检出率高, 所以较适用于戊肝筛查, 而抗-HEV IgM和HEV RNA较适用于HEV早期诊断。但抗-HEV IgG不足之处在于:多数患者抗-HEV IgG持续时间较长, 因此抗-HEV IgG阳性无法区别是急性HEV感染还是既往感染。对于抗-HEV IgG阳性病例还应辅以抗-HEV IgM或HEV RNA检测, 有助于区分急性和既往感染。抗-HEV IgM或HEV RNA阳性可诊断为急性感染, 但阴性不能排除戊型肝炎病毒感染, 对于戊型肝炎诊断, 国内外虽有不少研究报导, 但本研究可以看出, 三种检测方法均有其优点和局限, 尚需继续深入研究。抗-HEV的检测, 应发展检出率高、抗体出现早、抗体持续时间更短的试剂。HEV RNA在血中存在时间短, 其结果受抽血时间限制很大, 操作相对复杂, 费用也高, 对于戊肝常规诊断价值不大。就目前的研究结果, 作者认为对于戊肝诊断早期应以抗-HEV IgM检测为主, 以抗-HEV IgG检测为辅, 对于发展期则应抗-HEV IgG为主, 抗-HEV IgM为辅。

［1］ 阮冰, 马亦林, 庄辉, 等.戊型肝炎患者病毒血症的研究.中华预防杂志, 1997, 31(6):352-354.

［2］ 郑英杰, 姜庆五, 张军, 等.三种戊型肝炎诊断试剂可靠性的研究.中国肝脏病杂志, 2004, 12(1):16-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.052

2015-02-09］

457000 濮阳市人民医院检验科