茯苓皮总三萜的降血脂活性研究

0 引言

我国茯苓资源丰富，主产于安徽、云南、湖北等地.茯苓(PoriaCocos)又称茯菟、茯灵、伏苓、伏菟、松腴、云苓、茯兔、松薯、松木薯、松苓等，是我国的传统中药，也是300多种复方药及中成药的原料之一[1].茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核外皮.中医学认为，茯苓味甘、淡、性平，具有利水渗湿、益脾和胃、宁心安神之功效[2].茯苓皮化学成分复杂，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等，其中多糖和三萜类物质为主要的活性成分[3].

目前已有研究表明,茯苓皮具有免疫调节、抗肿瘤、抗惊厥和抗炎等作用[4,5].仲兆金等[6]从茯苓皮中提取到三萜类物质，发现其对人慢性髓样白血病细胞K562有明显的抑制作用，可影响小鼠T淋巴细胞增殖；Nukaya H等[7]从茯苓皮的甲醇提取液中分离得到的三萜物质具有抗炎作用，同时具有抑制肿瘤生长的作用；昝俊峰等[8]在研究由茯苓菌核提取茯苓素的过程中发现茯苓素(三萜混合物)具有抗肿瘤作用；程水明等[9]研究表明茯苓皮提取物对细胞免疫及体液免疫有较强的抑制作用.另有研究表明，茯苓皮三萜对大肠杆菌等致病菌有较好的抑菌作用[10,11].

高脂血症(hyperlipidemia,HLP) 是指血中胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低，现代医学常称之为血脂异常[12].随着人类疾病结构的改变，由高脂血症引发的动脉硬化、冠心病、脑梗塞等内科慢性疾病对人类健康造成很大威胁[13].因此，寻求新的药源已经成为医学界的研究热点之一[14,15]，虽然近年来三萜类物质的降血脂作用已被初步阐明[16]，但目前尚无茯苓皮三萜类物质降血脂的相关研究报道.

本研究探讨了茯苓皮中总三萜物质对高脂血症小鼠模型的降血脂作用和抗氧化作用，旨在为茯苓皮药材作为降脂药物研究开发，特别是预防和治疗高脂血症引发的动脉硬化、冠心病、脑梗塞等心血管病提供了科学依据.

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

茯苓皮购自西安市药材市场，粉碎过60目筛备用.冰乙酸、氯仿、乙醇、高氯酸、乙酸乙酯、石油醚等均选用分析纯试剂.

实验动物(SPF级25～30 g昆明小鼠30只，雄性)与高脂饲料由西安交通大学医学院实验动物中心提供.总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等生化指标由日立7170A全自动生化分析仪检测.

1.2 仪器与设备

FA1004N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；UV-2550日本岛津紫外可见分光光度计(上海旦鼎国际贸易有限公司)；日立7170A全自动生化分析仪(日立公司)；SZFJ中草药粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)；JL型电热器(建湖县芦沟电热器厂)；DK-S26电热恒温水浴锅(上海启前电子科技有限公司)；R210旋转蒸发仪(杭州大卫公司)；SHB-5A型循环水多用真空泵(杭州大卫科技仪器有限公司)；DHG-91234电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司).

1.3 实验方法

1.3.1 茯苓皮总三萜的提取

称取适量茯苓皮药材，用粉碎机粉碎，加入20倍量95%乙醇，在80 ℃下回流提取3次，每次3小时，分别抽滤，合并三次滤液，减压浓缩至浸膏状，减压干燥，加适量乙醇少量多次洗涤甁壁至无色，静置，以2 500 r/min的转速离心5 min，弃去上清液，将沉淀减压干燥.加入3倍量氯仿超声提取，过滤，滤液经减压浓缩蒸出氯仿，即得茯苓皮总三萜提取物，样品及其溶液储存于具塞锥形瓶中备用[11,17,18].

1.3.2 茯苓皮总三萜的定性分析

称取适量经乙醇回流提取得到的茯苓皮总三萜提取物，分别通过三氯乙酸反应、冰乙酸-乙酰氯反应和三氯甲烷-浓硫酸反应对三萜类物质进行定性鉴定.

1.3.3 茯苓皮总三萜的降血脂活性测定

将30只昆明种雄性小鼠按实验要求分为正常对照组、高脂模型组和茯苓皮三萜组(n=10)，除正常对照组外均按照高脂饲料喂养建模，每日下午给予正常对照组和高脂模型组0.02 mL/g的0.9%生理盐水灌胃，茯苓皮三萜组给予150 mg/kg[16]剂量的茯苓皮总三萜提取物进行灌胃，具体给药量如表1所示，共给药14天.末次给药后，各组小鼠均禁食12小时，心脏取血，离心分离血清，测定其血脂指标水平，包括血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，计算动脉粥样硬化指数(AI)[19]，并测定其血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)指标.

表1 动物分组与给药(n=10)

1.4 血脂指标的测定方法

采用日立7170A全自动生化分析仪测定各血脂指标，严格按试剂说明书设定试验反应参数，测定各模型小鼠血清的TC、TG、LDL-C、HDL-C、SOD、MDA浓度.

1.5 统计学方法

2 结果与讨论

2.1 茯苓皮总三萜的定性鉴定

茯苓皮乙醇提取物的定型鉴定结果分别为：

三氯乙酸反应：取少量上述样品溶液滴在滤纸上，喷25%三氯乙酸乙醇溶液，加热至100 ℃，呈红色，逐渐变为紫色.

冰乙酸-乙酰氯反应：取上述样品溶于冰乙酸，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，呈现紫红色.

三氯甲烷-浓硫酸反应：将上述样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在硫酸层呈现红色，氯仿层有绿色荧光出现.

综上，茯苓皮乙醇提取物的三氯乙酸反应、冰乙酸-乙酰氯反应和三氯甲烷-浓硫酸反应结果均为阳性，表明从茯苓皮乙醇提取物中含有三萜类物质.

2.2 茯苓皮总三萜的降血脂活性分析

茯苓皮总三萜物质对高脂血症小鼠血脂的影响结果如表2所示，结果显示，与正常对照组相比较，高脂模型中小鼠的血脂代谢紊乱，TC、LDL-C和TG水平均显著升高(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，HDL-C没有显著性差异，但是有所下降(P<0.05)，说明高脂血症小鼠可引起血清中的TC、LDL-C和TG水平升高，造成血脂代谢紊乱.茯苓皮三萜组小鼠血清中的TC、LDL-C和TG水平与高脂模型组相比较均显著下降(P<0.01)，HDL-C显著升高(P<0.05)，表明茯苓皮三萜对高脂血症引起的血脂代谢异常有显著的改善作用.

表2 茯苓皮三萜对高脂血症小鼠血脂的影响

注：与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与高脂模型组比较aP<0.05,bP<0.01.

2.3 茯苓皮总三萜的动脉粥样硬化指数分析

资料显示[20]，当人的AI>4时，常提示有发生冠心病的高度危险性，考虑到小鼠的种类以及生理机能，结合本文资料，初步认为当AI>3时，发生冠心病的危险性较大.如果能控制AI<2时，对预防冠心病有重要意义.由表2可知，高脂模型组小鼠的AI>3，引发冠心病的危险性较高.与正常对照组相比，高脂模型组动脉粥样硬化指数(AI)显著升高(P<0.01)，引发心脑血管病的危险性增加；而茯苓皮三萜组的动脉粥样硬化指数(AI)与高脂模型组比较明显降低(P<0.01)，且低于正常对照组，可控制在AI<2的范围内，表明茯苓皮三萜可降低引发心脑血管病的风险，对预防冠心病有重要的意义.

三组小鼠的血脂指标(TC、TG、LDL-C、HDL-C)及动脉粥样硬化指数(AI)比较如图1、图2所示.图1、图2中符号含义是：与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与高脂模型组比较aP<0.05,bP<0.01.

图1 茯苓皮三萜对高脂血症小鼠血脂的影响

图2 茯苓皮三萜对高脂血症小鼠AI的影响

2.4 茯苓皮总三萜的抗氧化能力分析

茯苓皮总三萜对高脂血症小鼠抗氧化能力的影响结果如表3所示.

表3 茯苓皮三萜对高脂血症小鼠抗氧化能力的影响

注：与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与高脂模型组比较aP<0.05,bP<0.01.

由表3数据可知，与正常对照组相比，高脂模型组小鼠的血清中MDA含量显著升高(P<0.05)，SOD活力有所升高，但没有显著性差异.与高脂模型组相比，茯苓皮三萜组小鼠血清中的SOD活力极显著升高(P<0.01)，MDA含量极显著下降(P<0.001).表明茯苓皮三萜可能是通过升高SOD水平、降低MDA水平的途径来增强高脂血症小鼠的抗氧化体系.

3 结论

本文采用高脂饲料诱导建立高脂血症小鼠模型，研究了茯苓皮中总三萜物质的降血脂作用.实验结果显示茯苓皮乙醇提取液中的三萜类物质对高脂血症模型小鼠具有显著的降脂作用和抗氧化能力，能明显降低小鼠血清中的TC水平、LDL-C水平和TG水平，升高HDL-C水平，降低动脉粥样硬化指数(AI)，升高SOD水平和降低MDA水平.

本实验表明茯苓皮三萜类有效成分不仅能靠自身免疫力降低血清中的血脂水平，还能通过提高体内抗氧化能力来降低血脂，进而降低引发心脑血管病的风险.因此，茯苓皮三萜既可以开发成为天然降血脂药物，也可用于制备预防和辅助治疗高脂血症的保健品.

综上，结合现代化学研究方法与药理学研究成果，对茯苓皮有效成分三萜类物质加以开发利用，进而发掘新药，将对茯苓这一宝贵中药资源的开发应用有重要意义.

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毛跟年1， 张诗韵1， 付 超2， 梁承远1，宋慧慧1，王 兰1，张 雯1， 陈雪峰1

(1.陕西科技大学 食品与生物工程学院， 陕西 西安 710021； 2.西安市第四人民医院 检验科， 陕西 西安 710004)

茯苓皮中总三萜物质在免疫调节、抗肿瘤、抗惊厥和抗炎等方面具有明显的药理作用.从茯苓皮中分离出三萜类物质，采用高脂饲料诱导建立高脂血症小鼠模型，研究了茯苓皮中总三萜物质对高脂血症小鼠降血脂作用和抗氧化能力的影响.实验结果显示:与高脂模型组相比，茯苓皮三萜组血清中的TC、LDL-C和TG水平均显著降低，HDL-C显著升高，AI显著降低，MDA水平显著下降，SOD水平显著升高.综合以上实验指标，表明茯苓皮总三萜物质具有明显的降血脂作用和抗氧化活性.本研究为茯苓皮及茯苓皮总三萜作为降脂药物研究开发、预防和治疗高脂血症引发的动脉硬化、冠心病、脑梗塞等心脑血管病提供了科学依据.

茯苓皮； 三萜； 提取工艺； 降血脂； 抗氧化

The hypolipidemic study of total triterpenic compounds from sclerotia ofPoriaCocos

MAO Gen-nian1， ZHANG Shi-yun1， FU Chao2， LIANG Cheng-yuan1，SONG Hui-hui1， WANG Lan1， ZHANG Wen1， CHEN Xue-feng1

(1.School of Food and Biological Engineering, Shaanxi University of Science & Technology, Xi′an 710021, China; 2.Clinical Laboratory, The Fourth People′s Hospital of Xi′an, Xi′an 710004, China)

Triterpenoids from sclerotia ofPoriaCocoshave significant pharmacological effects on the cardiovascular system,immune system and so on.In the present study,we have provided a facile and feasible procedure for total triterpenic acids extraction from the traditional chinese medcine,sclerotia ofPoriaCocos,as well as appraisal of their antihyperlipidemic activity and antioxidant capacity in hyperlipidemic rats model.The hypolipidemic effect ofPoriaCocostotal triterpenic acids(PCTA) were tested in high-fat diet induced hyperlipidemic rats.Specifically,PCTA showed potent antihyperlipidemic and antioxidant activities and were found to decrease the plasma triglyceride levels (TG),total cholesterol (TC),malondialdehyde(MDA)accompanied byincrease in HDL-C/TC ratio andsuperoxide dismutase(SOD) to a greater degree than the reference control.Therefore,PCTA could be used to treat hyperlipidemic patients according to the in vivo hypolipidemic effects.In summary,the released study provide solid scientific basis for the cardiovascular drug research ofPoriaCocos,especially for the prevention and treatment of atherosclerosis,coronary heart disease, cerebral infarction caused by hyperlipidemia.

sclerotia ofPoriaCocos； triterpenes； extraction process； hypolipidemic activities； antioxidantion activity

2015-01-29

陕西省科技厅自然科学基金项目(2012JZ3002,2014JQ4154)； 陕西科技大学博士科研启动基金项目(BJ13-20)

毛跟年(1962-)，男，陕西咸阳人，教授，研究方向：中药学与中药新药开发

1000-5811(2015)03-0130-05

R932；R961.1

A