孙琳，高美华，张智昆

（1 青岛大学医学院免疫学教研室，山东 青岛 266021； 2 烟台山医院检验科； 3 青岛市妇女儿童医院妇科）

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）是将人体外周血单个核细胞在体外经过多种细胞因子诱导培养一段时间后获得的一群异质细胞［1］。该群细胞杀瘤活性强、杀瘤谱广等，在临床肿瘤治疗中发挥着日渐重要的作用［2］。国际肿瘤生物治疗协会的多名专家制定了免疫相关反应评价标准，即irRC［3］，该标准认为可以通过测定免疫反应指标来评价免疫治疗的效果。本研究通过比较晚期肿瘤病人在行CIK细胞治疗前后的外周血T细胞亚群、自然杀伤细胞（NK细胞）和调节T细胞（Treg细胞）百分率以及白细胞介素2（IL－2）、干扰素γ（IFN－γ）的变化，旨在评价CIK细胞治疗前后病人免疫状态的改变。

1 对象与方法

1.1 研究对象

取烟台山医院收治晚期肿瘤病人20例（肿瘤组），男12例，女8例；年龄43～67岁，平均56岁。病人TNM分期Ⅲ期及以上，肺癌8例，原发性肝癌5例，胃癌5例，食管癌1例，乳癌1例。以查体中心体检正常的健康成年人20例作为对照（对照组），男12例，女8例；年龄45～65岁，平均53岁。

1.2 仪器与试剂

Epics XL流式细胞仪为美国贝克曼库尔特公司产品，RT－6000全自动酶标分析仪为深圳雷杜公司产品，流式细胞仪试剂均购自美国贝克曼库尔特公司，细胞因子试剂盒购自深圳晶美生物科技有限公司，CIK制品由本院生物细胞治疗室规范制备。

1.3 治疗方法及检测指标

每例病人接受CIK细胞治疗至少2个疗程，每个疗程间隔1个月。采用流式细胞仪检测两组T细胞亚群、Treg细胞及NK细胞百分率；采用酶联免疫实验测定两组血清中细胞因子IL－2、IFN－γ的表达水平。

1.4 统计学处理

采用PPMS 1.5［4］软件进行统计分析，计量资料数据以表示，组间比较采用t检验。

2 结 果

晚期肿瘤病人CIK治疗前的CD3、CD4、CD8、CD4／CD8、Treg细胞、NK 细胞和IL－2、IFN－γ水平与对照组比较差异均有显著意义（t＝2.12～3.98，P＜0.05）。CIK治疗后10d，IL－2和IFN－γ水平升高，与治疗前相比较差异均有显著意义（t＝2.06～2.43，P＜0.05）；CIK治疗后30d，肿瘤病人的CD4／CD8、NK细胞和IL－2和IFN－γ水平升高，Treg细胞下降，与治疗前相比较，差异均有统计学意义（t＝2.11～10.37，P＜0.05）。见表1、2。

表1 两组治疗前后外周血T细胞亚群、NK、Treg水平比较（n＝20，χ／%，）

表1 两组治疗前后外周血T细胞亚群、NK、Treg水平比较（n＝20，χ／%，）

组别 时间 T细胞亚群CD3 CD4 CD8 CD4／CD8NK细胞 Treg细胞对 照 组 66.32± 9.75 35.42±7.05 25.28±5.75 1.46±0.39 14.37±4.37 9.56±3.62肿瘤组 治疗前 59.50±10.56 29.89±6.95 29.30±4.16 1.08±0.32 10.02±4.70 13.56±5.72治 疗 10d 59.69±10.89 30.32±7.38 28.82±6.33 1.12±0.37 11.30±5.05 13.32±5.21治 疗 30d 61.47± 9.73 31.95±8.22 26.34±5.72 1.33±0.42 19.17±6.22 8.71±5.05

表2 两组治疗前后细胞因子含量比较（n＝20，ρ／ng·L－1，）

表2 两组治疗前后细胞因子含量比较（n＝20，ρ／ng·L－1，）

组别 时间 IL－2 IFN－γ对照组 72.35±12.52 14.11± 3.43肿瘤组 治疗前 60.23±14.10 10.34± 2.48治疗10d 70.18±16.44 13.02± 4.27治 疗 30d 101.26±30.17 53.66±18.42

3 讨 论

T淋巴细胞主要分为辅助性T细胞（CD4）和细胞毒性T细胞（CD8），两者的动态平衡是维持机体正常免疫应答反应的保障［5］。本文研究结果显示，肿瘤病人治疗前CD4下降，CD8升高，CD4／CD8明显下降，说明肿瘤病人机体的免疫功能低下，这与文献报道的结果一致［6］。免疫功能持续低下使得肿瘤易于复发、转移而难以治愈。NK细胞是一种杀伤肿瘤的效应细胞，是人体自然免疫系统的重要组成部分［7］。本实验结果显示，晚期肿瘤组治疗前NK细胞明显低于健康对照组，这可能由于肿瘤的浸润使得NK细胞的数量反应性下降，机体对肿瘤的清除能力下降，从而导致了肿瘤的发生［8］。经过CIK治疗后30d，病人NK细胞增殖迅速，机体的抗肿瘤能力增强。

Treg细胞具有免疫抑制和免疫无能两大特征，在维持机体免疫内环境稳定、防止自身免疫性疾病的发生等方面都起到重要作用［9－10］。本文研究结果表明，晚期肿瘤病人治疗前Treg细胞比例明显高于对照组，说明病人处于免疫抑制状态；CIK治疗后30d，Treg细胞比例明显降低，说明机体的免疫抑制状态得到明显改善。

本文研究结果显示，治疗后10d病人的IL－2、IFN－γ水平明显增高，其增高早于其他免疫指标，可以推断CIK细胞改善免疫功能是通过分泌大量的细胞因子来完成，IL－2、IFN－γ等不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可以促进T细胞及NK细胞活化增殖，T细胞和NK细胞活化后又会分泌大量细胞因子，上述两者协同作用，进一步改善病人的免疫功能，提高抗肿瘤能力。

综上所述，CIK细胞不仅能够直接杀伤肿瘤细胞，还能通过分泌大量细胞因子，诱导机体T细胞和NK细胞增殖活化，使机体处于免疫活跃状态，明显改善晚期肿瘤病人的免疫功能，其改善作用在治疗30d左右即可达到较高水平；同时可降低肿瘤病人外周血Treg细胞水平，改善机体免疫抑制状态，这也是CIK细胞发挥治疗作用的重要途径。

［1］SCHMIDT－WOLF I G，NEGRIN R S，KIEM H P，et al.Use of a SCID mouse／human lymphoma model to evaluate cytokine－induced killer cells with potent antitumor cell activity［J］.J Exp Med，1991，174（1）：139－149.

［2］梁雪峰，丁震宇，解晓东.细胞因子诱导的杀伤细胞在肿瘤治疗方面的最新进展［J］.国际肿瘤学杂志，2012，39（5）：344－347.

［3］WOLCHOK J D，HOOS A，O’DAY S，et al.Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors：immune－related response criteria［J］.Clin Cancer Res，2009，15（23）：7412－7420.

［4］周晓彬，纪新强，徐莉.PPMS 1.5统计软件的功能及其应用［J］.青岛大学医学院学报，2009，45（1）：91－93.

［5］MEDINA－ECHEVERZ J，FIORAVANTI J，ZABALA M，et al.Successful colon cancer eradication after chemoimmunotherapy is associated with profound phenotypic change of intratumoral myeloid cells［J］.J Immunol，2011，186（2）：807－815.

［6］齐红，石虹，刘玉侠，等.253例恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群的检测及其临床意义分析［J］.中国实验诊断学，2009，13（11）：1589－1590.

［7］王欢，林辉，蓝娇，等.原发性非小细胞肺癌患者手术前后外周血T细胞亚群和NK细胞检测的临床意义［J］.中国临床新医学，2010，3（4）：312－315.

［8］杨秀华，张羽，韩波，等.肝细胞癌患者外周血中调节性T细胞、NK细胞及NKT细胞的表达及意义［J］.哈尔滨医科大学学报，2010，44（3）：227－229.

［9］LIU Z，KIM J H，FALO L D，et al.Tumor regulatory T cells potently abrogate antitumor immunity［J］.J Immunol，2009，182（10）：6160－6167.

［10］徐晟伟，沈若武，张蓓.COPD病人外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞检测及意义［J］.齐鲁医学杂志，2011，26（6）：489－490，493.