熊 瑞，胡昌江，张 美，陈志敏，崔园园

(成都中医药大学 药学院，四川 成都 611137)



生、炙淫羊藿对肾阳虚小鼠耐寒能力和交配能力研究

熊 瑞，胡昌江*，张 美，陈志敏，崔园园

(成都中医药大学 药学院，四川 成都 611137)

目的：比较淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对氢化可的松所致肾阳虚模型小鼠耐寒能力和交配能力的影响。方法：采用氢化可的松造成小鼠肾阳虚模型，淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后的水提浓缩物灌胃，交配实验考察指标为红外摄像记录 30min 内小鼠的跨骑潜伏期和跨骑次数，耐寒实验考察指标为40min后缺氧、-18℃寒冷条件下的存活时间。结果：与正常组比较，淫羊藿炙品高剂量组能明显提高交配能力(P<0.05)，二仙汤炙品组皆能明显提高交配能力(P<0.05或P<0.01), 淫羊藿生品中剂量组能明显缩短潜伏期(P<0.05)；淫羊藿炙品中、高剂量组能明显提高耐寒能力(P<0.05或P<0.01)，二仙汤炙品组中、高剂量皆能明显提高耐寒能力(P<0.01)。结论：淫羊藿油炙后能改善肾阳虚小鼠的交配能力和耐寒能力。

淫羊藿；炙品；肾阳虚；交配能力；耐寒能力

淫羊藿，始载于《神农本草经》[1]，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用，列为中品。生熟异用是中药炮制的特色，淫羊藿在中医临床上有祛风湿生用、温肾助阳炙用的传统用药经验。淫羊藿用羊脂油炮制入药历史悠久，最早见于《雷公炮炙论》：“凡使(时呼仙灵脾)，需用夹刀去叶、四畔花(枝)尽后，用羊脂相对拌炒过，待羊脂四两为度也[2]。”羊脂油炙法，从南北朝至现代一直沿用，且为1963-2010版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)淫羊藿项下唯一收载的炮制品种。本实验通过对淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤对肾阳虚小鼠耐寒能力和交配能力进行对比研究，以期为中医临床合理用药提供依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

昆明种小鼠，体重18～22g，清洁级，由成都达硕实验动物有限公司提供(实验动物生产合格证号：SCXK(川)2008-24)。动物于成都中医药大学中药药理三级科研实验室饲养(许可证号：川实动管第015号)，国家中医药管理局三级实验室观察(NO.TCM-2009-324)。

1.2 药物与试剂

淫羊藿、黄柏、知母、仙茅、巴戟、当归均购自荷花池中药材市场，经成都中医药大学生药教研室卢先明教授鉴定为2010版《中国药典》收载品种。实验室前期分别对已购得的淫羊藿(EpimediumbrevicornuMaxim)和箭叶淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)进行入药标准的考察，结果表明淫羊藿在总黄酮含量、淫羊藿苷含量、醇浸出物等指标上均高于箭叶淫羊藿，且已有文献[3]报道淫羊藿化学成分较稳定，箭叶淫羊藿种内质量差异较大，故本实验选择淫羊藿作为实验药物。

氢化可的松(规格100mg/2mL，天津药业集团新郑股份有限公司，批号1103052)；氯化钠注射液(0.9%，四川科伦药业股份有限公司，批号M12011117)；乙烯雌酚(合肥久联制药有限公司，批号20100920)；金匮肾气丸(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号1030582)。

1.3 仪器

LT502 型电子天平(常熟市天量仪器有限责任公司)； AR862A型红外测温仪(希玛SMART SENSOR)；计时秒表(中国卡西欧有限责任公司)；红外线摄像头(台湾多安科技有限公司)。

2 方法与结果

2.1 药物制备

炙淫羊藿按实验室前期研究筛选出的最佳工艺条件制得[4]。由于淫羊藿、二仙汤临床上多以汤剂入药，故本实验采用水提液的浓缩物灌胃。淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后，加12倍量水浸泡0.5h，煎煮1h，过滤，滤渣再加12倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并药液，浓缩至相应浓度。金匮肾气丸悬液制备：剂量参考实验室前期研究配制(5g·mL-1)，粉碎后过100目筛，制备成浓度为0.25g·mL-1的混悬液。乙烯雌酚混悬液制备:乙烯雌酚片0.5mg碾碎成粉末，用25mL水配制成混悬液[5-7]。

2.2 交配实验

取健康KM小鼠雄性150只，雌性50只，体重22g～25g。将雄性小鼠按体重随机分为15组：正常对照组，模型组，金匮肾气丸组(即阳性组，5g·kg-1)，生品低、中、高剂量组(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高剂量组(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙汤生品低、中、高剂量组(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙汤炙品低、中、高剂量组(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每组10只，正常对照组和模型组灌胃纯净水0.4mL/20g，其余各组分别灌胃相应药物，每天1次，连续30天。从给药第 4 天开始，除正常对照组皮下注射生理盐水0.1mL/20g外，其余各组均注射氢化可的松0.1mL/20g，每天1次，连续7天，造模同时连续给药。于给药后第30天给药1h后将雌雄小鼠按(1∶3)比例合笼观察 30min内交配能力，雌性小鼠于交配前3天按照0.4mL/20g灌胃乙烯雌酚混悬液使之发情时间同步于交配时间。

2.3 耐寒实验

取健康KM小鼠雄性150只，雌性150只，体重22 g～25g。将雄性小鼠按体重随机分为15组：正常对照组，模型组，金匮肾气丸组(即阳性组，5g/kg)，生品低、中、高剂量组(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高剂量组(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙汤生品低、中、高剂量组(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙汤炙品低、中、高剂量组(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每组雌雄各10只。正常对照组和模型组灌胃纯水0.4mL/20g，其余各组分别灌胃相应药物，每天1次，连续16天。从给药第4天开始，除正常对照组皮下注射生理盐水0.1mL/20g外，其余各组均注射氢化可的松0.1mL/20g，每天1次，连续7天，造模同时连续给药。第16天给药(或给水)后60min，将小鼠放入-18 ℃冰箱内，于40min后每隔5min观察小鼠存活情况，记录死亡时间，直至所有小鼠全部死亡。

2.4 数据分析

2.5 结果

2.5.1 交配实验 与模型组相比，淫羊藿炙品高剂量跨骑潜伏时间明显延长(P<0.05)，跨骑次数极显著增加(P<0.01)；二仙汤炙品低、中、高剂量组跨骑潜伏期显著缩短(P<0.05)，二仙汤炙品中、高剂量组跨骑次数显著增加(P<0.05或P<0.01)。结果提示，虽然生品淫羊藿与炙品淫羊藿、生品二仙汤与炙品二仙汤，在统计学上无差异，但炙品淫羊藿和炙品二仙汤达到一定剂量时可分别在缩短跨骑潜伏时间和增加跨骑次数上表现出差异，而生品淫羊藿或生品二仙汤并未表现出显著差异，说明炙品淫羊藿在改善交配能力方面，无论单味使用或是纳入二仙汤中，皆优于生品淫羊藿。具体结果见表1。

2.5.2 耐寒实验 与模型组相比，淫羊藿炙品中剂量雄性小鼠死亡时间显著缩短(P<0.05)，炙品高剂量雌性、雄性小鼠死亡时间皆显著缩短(P<0.01)；炙品二仙汤中、高剂量雌性、雄性小鼠死亡时间均极显著缩短(P<0.01)。结果提示，虽然生品淫羊藿与炙品淫羊藿、生品二仙汤与炙品二仙汤在统计学上没有差异，但炙品淫羊藿及炙品二仙汤达到一定剂量以上时，可在延长死亡时间上表现出显著差异，生品及生品二仙汤未出现显著性差异，表明淫羊藿炙品在对耐寒能力有改善作用上，无论是单味使用还纳入二仙汤，均优于生品，结果见表2。

组别跨骑潜伏时间(min)跨骑次数(次/30min)正常对照组17.94±3.873.3±1.30模型组27.80±1.32**0.8±0.64**金匮肾气丸组22.89±2.35#3.2±1.40##生淫羊藿Min23.67±4.101.5±0.70生淫羊藿Mid23.08±4.822.2±1.04生淫羊藿Max25.31±1.972.5±1.20炙淫羊藿Min25.00±2.051.7±0.90炙淫羊藿Mid23.80±2.231.5±0.90炙淫羊藿Max22.99±1.96#3.3±1.16##生品二仙汤Min25.42±2.351.8±1.20生品二仙汤Mid24.42±2.451.8±1.20生品二仙汤Max26.20±2.472.5±0.90炙品二仙汤Min22.07±3.20#2.5±1.00炙品二仙汤Mid22.90±2.33#3.1±0.94#炙品二仙汤Max22.68±1.43#3.8±1.40##

注：30min内未出现跨骑的雄性小鼠，其跨骑潜伏期均按30min计。与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05,##P<0.01。

组别雌性小鼠死亡时间雄性小鼠死亡时间正常对照组101.0±10.288.5±9.5模型组61.0±10.2**57.0±8.0**金匮肾气丸组84.0±9.0##79.5±9.5##生品淫羊藿Min68.0±5.463.0±6.0生品淫羊藿Mid71.5±6.167.0±6.4生品淫羊藿Max68.5±6.867.5±9.0炙品淫羊藿Min69.0±6.064.5±5.6炙品淫羊藿Mid69.5±4.670.0±5.0#炙品淫羊藿Max74.0±4.2##84.0±6.4##生品二仙汤Min71.5±5.866.5±5.8生品二仙汤Mid69.5±6.565.0±5.0生品二仙汤Max72.0±5.467.5±5.5炙品二仙汤Min69.0±5.266.0±4.2炙品二仙汤Mid84.0±8.2##83.5±5.8##炙品二仙汤Max91.5±9.5##97.0±5.4##

注：与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05,##P<0.01。

3 讨论

采用氢化可的松造模后，与正常对照组比较，小鼠的跨骑潜伏时间明显延长，跨骑次数明显减少，说明造模成功。淫羊藿生品与油炙品组比较，无论是单味使用还是纳入二仙汤,跨骑潜伏时间和跨骑次数没有显著统计学意义, 但炙品淫羊藿有优于生品淫羊藿的趋势。

动物采用氢化可的松造模后，与正常组比较，小鼠耐寒时间显著缩短，说明氢化可的松可致模型动物神经系统紊乱、应激反应下降。淫羊藿生品组与炙品组比较，无论单味使用还是纳入二仙汤，耐寒时间虽无统计学差异，但炙品有优于生品的趋势。

传统药性理论认为，羊脂油甘温，具有补虚、 润燥的功效[7]。但目前关于羊脂油的现代研究仅限于羊脂油的化学成分研究，对单独应用时羊脂油是否具有温肾助阳功效或与淫羊藿的相加增效作用，目前尚缺乏报道，还有待进一步研究。

[1] 清· 顾光重辑.神农本草经[M].北京：人民卫生出版社，1955.

[2] 刘宋时期·雷敩.雷公炮炙论[M].南京:江苏科学技术出版社,1985:97.

[3] 郭宝林,肖培根.中药淫羊藿主要种类评述[J].中国中药杂志,2003,28(4): 303-307.

[4] 周一帆,胡昌江,余凌英,等.星点设计-效应面法优选淫羊藿油炙工艺[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(16):16-18.

[5] 陈 奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,2006:1094．

[6] 张永祥.中药药理学新论[M].北京:人民卫生出版社,2004:427．

[7] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:597.

[8] 叶定江,原思通.中药炮制学辞典[M].上海:上海科学技术出版社, 2005.

[9] 伊 佳,嵇扬,王文俊.枳椇子水提物对小鼠耐寒耐热耐缺氧作用的实验研究[J].解放军药学学报,2008,24(5) :414-416．

[10] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[11] 彭蕴茹,沈明勤,罗宇慧,等.金匮肾气丸防治小鼠肾阳虚的实验研究[J].中成药,2004,26(5):395-397.

[12] 邵命海,肖 静,王毅兴,等.从“肾主生殖”角度评价腺嘌呤与氢化可的松诱导的肾阳虚模型[J].上海中医药杂志,2008,42( 2) :57-59．

(责任编辑：宋勇刚)

Study on the Effect of the Crude and Mutton-fat-processed Epimedii Folium in Er’xian Decoction on Freeze Resistance Capability and Mating Ability in Model of Kidney-yang Asthenia

Xiong Rui,Hu Changjiang*,Zhang Mei，Chen Zhimin，Cui Yuanyuan

(College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)

Objective:Objective To compare the effect of the crude Epimedii folium, mutton-fat-processed Epimedii folium and Er’xian Decoction (EXD) containing the two respectively on freeze resistance capability and mating ability in model of kidney-yang asthenia. Methods:To adopt murine model of kidney-yang asthenia caused by hydrocortisone and gavage water extraction and concentraction. Assessment criteria of mating experiment are straddle latency period and straddle frequency, and assessment criteria of freezing test is survival time in anoxia and a low temperature(-18℃) condition after 40 minutes. Results:Compared with normal control group, the mutton-fat-processed in high dose significantly improved mating ability(P<0.05), also well as mutton-fat-processed in EXD(P<0.05 orP<0.01), and the crude in middle dose significantly shortened latent period(P<0.05). The mutton-fat-processed in middle and high dose significantly improved freeze resistance capability(P<0.05 orP<0.01). It was the same as the mutton-fat-processed in EXD (P<0.01). Conclusion:The mutton-fat-processed Epimedii folium can significantly improve freeze resistance capability and mating ability.

Epimedii Folium ; Mutton-fat-processed ; Kidney-yang Asthenia ; Mating Ability ; Freeze Resistance Capability

2014-09-24

中医药行业科研专项(20110700717)

熊瑞(1991-)，女，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药炮制及制剂研究。

胡昌江(1952-)，男，成都中医药大学教授，博士生导师，研究方向为中药炮制学的教学及科研。Email：hhccjj@hotmail.com

R285.5

A

1673-2197(2015)03-0005-03

10.11954/ytctyy.201503003