田腾跃，包永睿，孟宪生*，王 帅，老骄阳

(1.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600；2.辽宁省组分中药工程技术研究中心，



基于生化指标的小鼠高尿酸血症模型考察

田腾跃1,2,3，包永睿1,2,3，孟宪生1,2,3*，王 帅1,2,3，老骄阳1,2,3

(1.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600；2.辽宁省组分中药工程技术研究中心，

辽宁 大连 116600；3.辽宁省现代中药研究工程实验室，辽宁 大连 116600)

目的：建立小鼠高尿酸血症模型。方法：采用氧嗪酸钾灌胃给药的方式，分别考察给药剂量为150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d)，给药时间为1、3、5、7、9、11、13天时对小鼠高尿酸血症模型的影响。运用半自动生化分析仪检测小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量，通过统计分析，确定小鼠高尿酸血症模型的最佳给药剂量及给药时间。结果：给药剂量为750mg/(kg·d) 、给药时间为7天时，小鼠体内尿酸、尿素、肌酐含量与空白组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明小鼠高尿酸血症模型造模成功。结论：小鼠高尿酸血症模型的最佳给药剂量为750mg/(kg·d)，最佳给药时间为7天。

高尿酸血症模型；生化指标；给药剂量；给药时间

高尿酸血症是机体长期嘌呤代谢异常或尿酸排泄减少所引起的一类代谢性疾病[1]。近年来，随着人们生活水平的提高，高尿酸血症的发病率也逐年上升[2-3]，且与冠心病、糖尿病、高血压等疾病的发生关系密切[4-6]。因此，建立高尿酸血症动物模型对于该类疾病的研究具有重要意义。目前关于高尿酸血症模型的研究逐渐增多[7-11]，但仍不够深入。本实验采用氧嗪酸钾建立小鼠高尿酸血症模型，以生化指标为考察依据，研究小鼠高尿酸血症模型的最优建立方法。氧嗪酸钾属于三氮杂苯类化合物，可竞争性地与尿酸酶结合，抑制尿酸酶活性，从而使体内尿酸含量增加，以达到建立高尿酸血症动物模型的目的[12]。本实验对氧嗪酸钾所致小鼠高尿酸血症模型的给药剂量及时间进行考察，为高尿酸血症的研究提供理想模型。

1 材料与试剂

1.1 仪器

GRT-3000系列半制动生化分析仪(济南格利特科技有限公司)；HSS型电子恒温水浴锅(上海市博讯实业有限公司医疗设备厂)。

1.2 试药

氧嗪酸钾(Damas-beta公司，批号：P1050992)；尿酸(UA)测定试剂盒(长春汇力生物技术有限公司，批号：2014028)；尿素(BUN)测定试剂盒(长春汇力生物技术有限公司，批号：2014007)；肌酐(Cr)测定试剂盒(长春汇力生物技术有限公司，批号：2014050)。

1.3 动物

昆明种雄性小鼠128只，SPF级，体重(20±2)g，购自辽宁长生生物技术有限公司，动物许可证号：SCXK(辽)2010-0001。

2 方法

2.1 分组方法与给药剂量

取昆明种雄性小鼠64只，在实验室中适应性喂养5天，称重，随机分为8组，每组8只，分别为空白组、150mg/(kg·d)剂量组、300mg/(kg·d)剂量组、450mg/(kg·d)剂量组、600mg/(kg·d)剂量组、750mg/(kg·d)剂量组、900mg/(kg·d)剂量组、1 050mg/(kg·d)剂量组。每天按剂量灌胃1次，连续灌胃7天，空白组小鼠灌胃同等剂量的溶剂。于末次给药1h后眼球取血，3 000r/min离心15min，分离血清，按照尿酸、尿素、肌酐试剂盒规定的操作方法检测血清中尿酸、尿素、肌酐含量。

2.2 给药方法与时间

取昆明种雄性小鼠64只，在实验室中适应性喂养5天，称重，随机分为8组，每组8只，分别为空白组、灌胃给药1天组、灌胃给药3天组、灌胃给药5天组、灌胃给药7天组、灌胃给药9天组、灌胃给药11天组、灌胃给药13天组。每天按照750mg/(kg·d)的剂量灌胃，空白组小鼠灌胃同等剂量的溶剂，分别于1、3、5、7、9、11、13天给药1h后眼球取血，空白组小鼠于第13天眼球取血，3 000r/min离心15min，分离血清。按照尿酸、尿素、肌酐试剂盒规定的操作方法检测血清中尿酸、尿素、肌酐含量。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 给药剂量对小鼠高尿酸血症模型的影响

150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d)剂量组小鼠与空白组小鼠血清尿酸、尿素、肌酐含量如表1所示，变化趋势如图1、图2、图3所示。由实验结果可知，当给药剂量达到750mg/(kg·d)时，与空白组相比，各给药组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均明显升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。故可确定小鼠高尿酸血症模型的最佳给药剂量为750mg/(kg·d)。

3.2 给药时间对小鼠高尿酸血症模型的影响

按照750mg/(kg·d)剂量给药，给药1、3、5、7、9、11、13天组小鼠与空白组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量如表2所示，变化趋势如图4、图5、图6所示。由实验结果可知，当给药时间达到7天时，与空白组比较，各给药组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。故可确定小鼠高尿酸血症模型的最佳给药时间为7天。

表1 空白组与不同给药剂量组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量比较 (±s)

注：*表示与空白组比较，各给药组P<0.05；**表示与空白组比较，各给药组P<0. 01。

图1不同给药剂量组小鼠尿酸值变化趋势

图2不同给药剂量组小鼠尿素值变化趋势

图3不同给药剂量组小鼠肌酐值变化趋势

表2 空白组与不同给药时间组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量比较 (±s)

注：*表示与空白组比较，各给药组P<0.05；**表示与空白组比较，各给药组P<0. 01。

图4 不同给药天数组小鼠尿酸值变化趋势

图5 不同给药天数组小鼠尿素值变化趋势

图6 不同给药天数组小鼠肌酐变化趋势

4 讨论

高尿酸血症的发病机制主要包括两大类，即尿酸生成增多和尿酸排泄减少，进而导致体内尿酸含量增多。嘌呤代谢过程中相关酶缺乏是尿酸生成增多的主要原因，而肾脏中参与尿酸排泄的相关转运体，如人尿酸盐阴离子转运体、人尿酸盐转运体、人有机阴离子转运体等表达异常则是造成机体内尿酸排泄减少的主要原因。根据发病机制，现代临床治疗高尿酸血症的药物也主要分为以下两类：减少尿酸生成类药物，如嘌呤和嘧啶类似物；促进尿酸排泄类药物，如丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴马隆等[13]。

临床上高尿酸血症的判断标准为男性血尿酸含量>416.5μmol/L(7.0mg/d)、女性>356.9μmol/ L(6.0mg/d)。高尿酸血症的主要检测指标为血尿酸、血肌酐、血尿素含量，因此本实验选择小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量作为高尿酸血症的考察指标。

科学、合理、持久、稳定的动物模型能为疾病的发病机制、药物作用机制及药效的研究等提供有利的保障。本实验采用氧嗪酸钾制作小鼠高尿酸血症模型，由于氧嗪酸钾的结构与尿酸的嘌呤环类似，可竞争性地与尿酸酶结合，从而部分抑制尿酸酶活性，使体内尿酸含量增加。本实验考察了氧嗪酸钾所致小鼠高尿酸血症模型的给药剂量及时间

的影响，由实验结果可知，随着造模时间的增加以及给药剂量的增大，小鼠血中尿酸、尿素、肌酐含量也随之升高。但当给药时间与剂量到达一定程度时，小鼠血中尿酸、尿素、肌酐含量反而出现下降趋势，这可能是由于机体内环境有一定的平衡调节作用。根据以上三个指标综合考虑，在给药剂量为750mg/(kg·d)、给药时间为7天时，模型组小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均明显升高，可造出理想的高尿酸血症小鼠模型。给药时间过短或过长、给药剂量过高或过低都会对模型产生不利影响，且给药时间超过7天、给药剂量超过750mg/(kg·d)时，可能会导致假阳性结果。

氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠模型体内尿酸、尿素、肌酐含量明显升高，与高尿酸血症临床表现相似，且小鼠健康状态良好。该模型的建立为高尿酸血症发病机制、病理基础、治疗药物等研究奠定了基础。

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(责任编辑：尹晨茹)

Study on the Establishment of Hyperuricemia Model in Mouse Based on Biochemical Indicators

Tian Tengyue1,2,3,Bao Yongrui1,2,3,Meng Xiansheng1,2,3,Wang Shuai1,2,3,Lao Jiaoyang1,2,3

(1.College of Pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China;2.Liaoning Province Component of Traditional Chinese Medicine and Engineering Research Center,Dalian 116600,China;3.Liaoning Province Modern Traditional Chinese Medicine Research and Engineering Laboratory,Dalian 116600,China)

Objective:To establish a hyperuricemia model in mouse.Methods:The oxonic acid were administrated to the mouse,and studying the impact of different administration metering 150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d) and different administration time 1、3、5、7、9、11、13d. The uric,urea and creatinine of mouse were detected by semi brake biochemical analyzer.Throught statistical analysis,to determine the best administration metering and administration time of the mice model of hyperuricemia.Results:Compared with the control group,when the administration metering was 750mg/(kg·d) and the administration time is 7d, the uric,urea and creatinine of mouse were significant differences.And the mice model of hyperuricemia was succeeed.Conclusion:The best administration metering of the model of hyperuricemia was 750mg/(kg·d) and the best administration time of the model of hyperuricemia was 7d.

Model of Hyperuricemia;Administration Metering;Administration Time;Biochemical Indicators

2015-04-22

田腾跃(1988-)，男，辽宁中医药大学硕士研究生，研究方向中药药物分析。

孟宪生(1964-)，男，辽宁中医药大学教授，研究方向为中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析。E-mail:mxsvvv@126.com

R-332;R589.7

A

1673-2197(2015)18-0003-03

10.11954/ytctyy.201518002