车爱文，陈淑苹，谭旭东，李家梁，马红梅

（1.深圳市龙岗区妇幼保健院病理科，广东 深圳 518172；2.深圳市福田区人民医院病理科，广东 深圳 518033）

·临床病理·

CIP2A在宫颈癌中的表达及其临床意义

车爱文1，陈淑苹1，谭旭东1，李家梁1，马红梅2

（1.深圳市龙岗区妇幼保健院病理科，广东 深圳 518172；2.深圳市福田区人民医院病理科，广东 深圳 518033）

目的探讨CIP2A在宫颈癌(Cervical cancer)、宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial，CIN)及正常宫颈组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测50例宫颈鳞状细胞癌、34例CINⅠ、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宫颈组织中CIP2A蛋白的表达。结果CIP2A蛋白在宫颈癌中的表达明显高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织，且与宫颈癌淋巴结转移及临床分期有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论CIP2A在宫颈鳞状细胞癌中过表达，且与宫颈癌的恶性临床病理特征密切相关，为将来发展以CIP2A为靶分子的宫颈癌临床诊断和新的治疗策略提供了新的思路。

CIP2A；宫颈肿瘤；免疫组化

宫颈癌是第二常见的妇科恶性肿瘤，最多见的发病年龄为15～44岁[1]，其发生发展是一个多步骤、多基因参与的复杂过程，发病率具有明显增高趋势，随着诊断技术和治疗方式的改善，宫颈癌患者的生活质量有所改善，但其5年生存率仍未得到明显提高，因此需要通过寻找宫颈癌的有效治疗靶向标志物来改善患者的预后。

蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A，PP2A)的癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被识别的一种癌蛋白。其通过抑制对c-myc蛋白的去磷酸化作用使c-myc蛋白表达升高，从而导致细胞的恶性转化，促进细胞的增殖及锚着非依赖性生长，参与肿瘤的形成。已有研究表明，CIP2A在一些实体瘤如头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、胃癌和乳腺癌中过表达，但CIP2A在宫颈癌中的表达情况及作用机制尚不明确。本实验利用免疫组化的方法来检测CIP2A蛋白在宫颈癌中的表达情况，并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集深圳市龙岗区妇幼保健院及深圳市福田区人民医院2008年1月至2013年12月经活检、LEEP及手术切除50例浸润性宫颈鳞状细胞癌、34例宫颈上皮内瘤变Ⅰ(CINI)、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宫颈组织存档的蜡块标本。所有组织切片经HE染色后均经病理学检查确诊，根据国际妇产科联盟(FIGO，2000年)标准分期，Ⅰ期29例、Ⅱ期17例、Ⅲ期4例；组织分化程度G1、G2、G3分别为27、14、9例；术前均未接受放疗、化疗；年龄36～71岁，中位年龄53.5岁。标本用40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，兔抗人CIP2A单克隆抗体冻干粉购自Santa Cruz公司(工作浓度按1:100稀释)。

1.2 免疫组织化学染色 免疫组化染色采用S-P法，实验步骤按说明书进行。以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。CIP2A的表达主要位于细胞质，以细胞质染为棕黄色物质为阳性。所有染色的片子都要经过两位病理科专家的分别观察和打分。打分方法如下：根据免疫组化检测阳性瘤细胞的百分比打分，分为0分(没有阳性的肿瘤细胞)、1分(阳性肿瘤细胞为≤25%)、2分(阳性肿瘤细胞为25%～50%)、3分(阳性肿瘤细胞为50%～75%)和4分(阳性肿瘤细胞为75%～100%)；根据免疫组化染色强度打分，分为阴性、弱染色、中度染色和强染色。每张切片最后的得分为两次评分的乘积，最终记为四种结果：乘积为0，阴性，记为“-”；乘积≤4，低表达，记为“+”；乘积为5～8，中度表达，记为“++”；乘积≥大于9，强表达，记为“+++”。如果两位病理医师的打分结果不一致，则弃去此数据。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件对相关的数据资料进行统计学处理。各组间样本率的比较采用χ2检验，以P＜0.05确定为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CIP2A蛋白在宫颈组织各种病变中的表达情况 CIP2A免疫组化的阳性表达主要为棕黄色颗粒，在细胞质和细胞核均有表达，但在胞质中的信号更强。50例宫颈鳞状细胞癌中CIP2A阴性表达16例(32%)，弱阳性9例(18%)，阳性17例(34%)，强阳性8例(16%)，CIP2A在12例正常宫颈组织、34例CINⅠ及40例CINⅡ组织阳性表达率均为0，与宫颈癌之间(χ2=16.71，χ2=14.67，χ2=14.96，P＜0.05)差异均有统计学意义；在45例CINⅢ中有6例表达，阳性表达率为13.3%(如图1～图4)，与宫颈癌之间(χ2=11.61，P＜0.05)差异有统计学意义(见表1)。

2.2 CIP2A蛋白表达水平与宫颈癌临床病理特征分析 CIP2A蛋白表达与年龄无关，与肿瘤分期、肿瘤大小、组织学分级及转移均有关，见表2。

图1 CIP2A在CINⅠ中的表达(×100)；图2 CIP2A在CINⅡ中的表达(×100)；图3 CIP2A在CINⅢ中的表达(×200)；图4 CIP2A在宫颈癌中的表达(×200)

表1 CIP2A蛋白在宫颈组织各种病变中的表达情况（例）

表2 CIP2A蛋白的表达与宫颈癌临床病理特征的关系[例（%）]

3 讨论

CIP2A(Cancerous inhibitor of PP2A)也称为KIAA1524，定位于3号染色体上，是近年来识别的能够抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白，与多种基因蛋白如PP2A、myc等相互作用而发挥其功能，其可以通过抑制PP2A的B56α调节亚基对癌蛋白c-myc第62位丝氨酸的脱磷酸化作用，从而稳定c-myc蛋白二元磷酸化结构，抑制c-myc蛋白被泛素化水解。同时，c-myc作为核转录调节因子又能够调节CIP2A mRNA转录水平的变化，从而形成一个正反馈环路[2-3]。细胞学实验进一步证实[4]，CIP2A在维持细胞表形转化，促进细胞增殖和体内肿瘤生长方面起关键作用。CIP2A的过度表达可以阻止细胞衰老，促进细胞转化和增殖[5]。由于其在良性组织中不表达或低表达，而在实体肿瘤及骨髓增生异常综合征中均有高表达，如在人类头颈部鳞状细胞癌[4]、结肠癌[4]、胃癌[5-6]、乳腺癌[7]、肝癌[8]以及非小细胞肺癌[9]中存在高表达。最近新的研究显示CIP2A还能在慢性粒细胞白血病中高表达[10]，因此，推测CIP2A可能参与肿瘤的发生、发展，被列为一种新的癌候选基因。目前研究发现，CIP2A在不同的实体肿瘤中表达和预后均不同[11]。本研究显示，50例浸润性宫颈鳞状细胞癌中阴性表达16例(32%)，弱阳性9例(18%)，阳性17例(34%)，强阳性8例(16%)，CIP2A在12例正常宫颈、34例CINⅠ、40例CINⅡ组织中不表达，在45例CINⅢ中有6例(13.3%)表达。本研究中CIP2A在约68.0%宫颈癌标本中过表达，与其在胃癌、乳腺癌及喉癌[10]等恶性肿瘤表达相似。推测其致癌作用机制可能是：CIP2A主要通过稳定PP2A介导的c-myc结构来实现。Khanna等[12]也证实了CIP2A在胃癌细胞内的缺失可增加癌细胞的增殖和降低c-myc蛋白的稳定表达；而抑制c-myc可导致CIP2A的mRNA和蛋白表达下降，c-myc也可直接促进CIP2A的基因表达。这说明CIP2A与c-myc具有协同作用，共同促进肿瘤细胞的增殖和生长。此外，CIP2A与c-myc之间的相互作用在乳腺癌、非小细胞肺癌和结直肠癌中也有发现[13-15]。

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，发病呈年轻化趋势，其发生发展是一个复杂过程，经过上皮非典型增生、原位癌及浸润癌这一连贯的演变过程。与许多因素有关，例如吸烟、长期口服避孕药、衣原体感染、高频性行为、免疫抑制等，但最为重要的诱发因素是高危亚型人类乳头瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)的持续感染。其中，在宫颈癌患者体内以HPV16和HPV18检出率最高，两者总计在60%～80%。过去的研究证实了HPV16、18的E6、E7能诱导宫颈组织正常细胞向癌细胞转化，并在实现转化后继续促进肿瘤细胞的增殖。HPV16、18的这种恶性转化能力以及促肿瘤细胞增殖能力是通过下调关键抑癌基因(例如p53和Rb)的表达和功能的同时，增强原癌基因的表达和功能来实现的[16-18]。近年来，HPV持续感染引起的细胞内的变化仍然是宫颈癌致癌机制领域的研究热点。本实验结果显示，CIP2A其表达高低与宫颈癌的组织分级、临床分期、淋巴转移和组织分化有关，以上结果说明CIP2A参与与宫颈癌的发生发展过程，并与宫颈癌的恶性程度相关，推测其作用机制可能是：在HPV16持续感染的情况下，HPV16基因组有机会整合入宿主基因组中，可使E7蛋白的表达升高，E7的升高又促进了的CIP2A表达，表达水平提高的CIP2A通过稳定c-myc蛋白或者其他未知途径进一步促进了宫颈癌细胞的生长增殖，从而促使肿瘤发展[19]，但其作用机制及相互关系还有待于进一步研究。

综上所述，CIP2A在宫颈鳞状细胞癌中的过表达，且与宫颈癌的恶性临床病理特征密切相关，提示CIP2A基因及其蛋白的异常表达参与了宫颈癌的发生发展。因此，检测CIP2A在宫颈癌中的表达情况，为将来发展以CIP2A为靶分子的宫颈癌临床诊断和新的治疗策略提供了新的思路。近年来对CIP2A的研究报道也越来越多，但对其具体的分子结构有待解决研究。

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Expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer.

CHE Ai-wen1,CHEN Shu-ping1,TAN Xu-dong1,LI Jia-liang1,MA Hong-mei2.
1.Department of Pathology,the Materal and Child Health Care Hospital of Longgang District of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,the People's Hospital of Futian District of Shenzhen,Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer,cervical intraepithelial and normal cervical tissue.MethodsThe expressions of CIP2A in 50 cases of cervical cancer,34 cases of CINⅠ,40 cases of CINⅡ,45 cases of CINⅢand 12 cases of normal tissues were assessed by immunohistochemical S-P method.ResultsThe expression of CIP2A protein in cancer tissues was significantly higher than those in CIN tissues and normal tissues(P＜0.05)and closely correlated with TNM stage and metastasis.ConclusionCIP2A is overexpressed in cervical squamous cell cancer and closely correlated with the malignant clinicopathologic feature of cervical cancer.Therefore,CIP2A,as a target molecule,may provide a new thought for the clinical diagnosis and treatment strategy of cervical cancer.

CIP2A;Cervical cancer;Immunhistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2015）02—0266—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.02.0095

2014-07-05)

车爱文。E-mail：ruochenxiong@163.com