于 丽，何永正

(故城县医院内一科1、检验二科2，河北 故城 253800)

下呼吸道细菌定植和稳定期COPD患者免疫状况的关系

于 丽1，何永正2

(故城县医院内一科1、检验二科2，河北 故城 253800)

目的 探讨下呼吸道细菌定植和稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者免疫状况的关系。方法选取2010年3月至2013年3月我院收治的稳定期COPD患者50例(病例组)和在我院接受健康体检并确认健康的志愿者50例(健康组)，比较两组受试者的一般资料和免疫细胞水平。根据细菌定植情况将病例组分为定植组和未定植组，比较两组患者的炎性细胞因子水平。结果两组受试者的年龄、性别和体质量指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，而吸烟量、FEV1和FEV1/FVC比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。定植组与无定植组痰IL-8、痰IL-6、TNF-α、血IL-8和血hs-CRP水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。健康组和无定植组的辅助T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。定植组和无定植组、健康组的辅助T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞水平比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论下呼吸道细菌定植可导致稳定期COPD患者免疫功能下降，病情恶化。

细菌定植；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；稳定期；炎性因子；免疫细胞；免疫状况

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种具有气流阻塞特征的常见慢性疾病，表现为不完全可逆的气流受限[1]。其中，老年人是其主要的发病群体[2]。COPD受遗传因素的影响，除此之外，吸烟、粉尘、呼吸道感染等都可能导致COPD[3]。下呼吸道细菌定植是指大量的菌群牢固地粘附在下呼吸道的黏膜上皮细胞上，在适宜的环境条件下，依靠人体提供的营养物质生长繁殖，进而引起人体感染。稳定期的COPD患者免疫力低下，更容易引起下呼吸道细菌定植，产生炎性反应。本文通过对我院收治的稳定期COPD患者细菌定植和炎性因子的测定，探讨下呼吸道细菌定植和稳定期COPD患者免疫状况的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年3月至2013年3月我院收治的稳定期COPD患者50例(病例组)和在我院接受健康体检并确认健康的志愿者50例(健康组)。病例组中男性44例，女性6例，平均年龄(70.2±8.7)岁。健康组中男性43例，女性7例，平均年龄(72.3±7.6)岁。纳入标准：病例组的COPD诊断符合欧美学会联合发布的2011修订版COPD全球创议(GOLD)标准。健康组受试者两个月内未服用抗生素、抑制剂及免疫类药物。

1.2 指标测定

1.2.1 细菌种类和数量的测定 受试者在医生指导下漱口，使用无菌瓶收集深咳的第一口痰，对无痰者采用3%NaCl溶液雾化10 min导痰。将留取的痰液送检，在低倍镜视野下选取鳞状细胞小于10个，多核白细胞大于25个的合格痰液。将痰前处理液与合格痰液以1:1的比例混合制成原液，备用。向预先备好的4个无菌试管(编号Ⅰ～Ⅳ)中加入4.5 ml的NaCl溶液，吸取0.5 ml原液加入试管Ⅰ中，再从试管Ⅰ中吸取0.5 ml的混合悬液加入试管Ⅱ中，依次稀释，制成痰液稀释液。将痰液接种于合格培养皿中，进行细菌培养。按照常规方法鉴定细菌菌株并对菌落进行计数，确定痰液中的细菌种类和数量。痰检细菌数量≥107cfu/ml视为下呼吸道细菌定植(Low airway bacterial colonization，LABC)。

1.2.2 炎性因子水平检测 配置4倍体积的0.1%二硫苏糖醇，对留取的剩余痰液进行去黏液处理。反复震荡摇匀制成混悬液，离心后取4 ml在-80℃无菌环境下保存，备用。抽取受试者4 ml血液，离心后分装，-80℃无菌环境下保存，备用。采用ELISA药盒(英国Endogen公司生产)测定备用痰液IL-8、IL-6、TNF-α和备用血液IL-8因子水平。采用Array Protein System测定仪和试剂(美国Beckman公司生产)测定血液hs-CRP因子水平。

1.2.3 免疫细胞测定 取剩余的离心痰液，晾干染色，对巨噬细胞和中性粒细胞进行计数。采用流式细胞仪测定辅助T细胞(CD4)和抑制T细胞(CD8)。

1.2.4 肺功能检测 依据一秒用力呼气容积(FEV1)及气道阻塞的肺量测量(FEV1/FVC)测定数据确定肺功能分级。Ⅰ级(轻度)：FEV1≥80%，(FEV1/FVC)＜70%；Ⅱ级(中度)：50%≤FEV1＜80%，(FEV1/FVC)＜70%；Ⅲ级(重度)：30%≤FEV1＜50%，(FEV1/FVC)＜70%；Ⅳ(极重度)：FEV1＜30%，(FEV1/FVC)＜70%。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 病例组和健康组的一般资料比较 两组受试者年龄、性别和体质量指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，但在吸烟量、FEV1和(FEV1/FVC)方面两组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组受试者的一般资料比较(±s)

表1 两组受试者的一般资料比较(±s)

病例组(n=50)健康组(n=50) χ2/t值P值70.2±8.7 72.3±7.6 1.079 0.371 44 43 67 0.386 0.742 22.6±3.4 23.1±3.2 2.547 0.133 34.3±7.2 15.2±3.7 4.879 0.023 50.1±12.9 79.3±14.2 4.367 0.038 62.3±25.7 85.6±13.7 6.435 0.013

2.2 病例组细菌培养结果 病例组痰标本检测出6种主要致病菌：流感嗜血杆菌(1.3×107cfu/ml)、卡他莫拉菌(1.4×107cfu/ml)、肺炎链球菌(3.2×107cfu/ml)、副流感嗜血杆菌(3.7×107cfu/ml)、铜绿假单胞菌(1.8×107cfu/ml)和金黄色葡萄球菌(2.6×107cfu/ml)。健康组痰标本中未检测出致病菌，排除正常出现的口腔菌株。

2.3 定植组与无定植组炎性细胞因子水平 定植组与无定植组痰IL-8、痰IL-6、TNF-α、血IL-8和血hs-CRP水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 定植组与无定植组炎性细胞因子水平比较(±s)

表2 定植组与无定植组炎性细胞因子水平比较(±s)

定植组无定植组t值P值432.7±266.2 227.1±96.8 6.635 0.010 192.3131.4 103.2±134.7 6.217 0.019 173.6121.3 99.7±110.3 6.702 0.009 59.4±45.3 32.7±14.3 4.375 0.036 11.8±9.3 5.9±4.1 4.621 0.029

2.4 病例组和健康组痰免疫细胞水平 健康组和无定植组的辅助T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞水平经比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。定植组和无定植组、健康组的T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞水平比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 病例组和健康组痰免疫细胞水平比较(%，±s)

表3 病例组和健康组痰免疫细胞水平比较(%，±s)

组别定植组无定植组健康组t值P值辅助T细胞23.1±5.7 35.9±7.2 36.5±5.1 7.426 0.003抑制T细胞38.2±9.1 27.4±7.1 25.9±8.3 4.107 0.041巨噬细胞9.9±2.3 10.4±1.9 10.3±2.1 0.396 0.561中性粒细胞84.8±3.1 72.3±5.9 75.6±4.3 3.928 0.047

3 讨论

COPD是一种发病率高的肺疾病，由多种因素诱发，发病严重时甚至会死亡[4]。COPD患者和健康者的肺功能差距很大，因此临床上将肺功能检查即作为判断COPD的重要指标。COPD按病程情况分为稳定期和加重期，下呼吸道细菌感染是导致COPD从稳定期向加重期转化的重要原因[5]。稳定期的COPD患者免疫功能较弱，极易发生下呼吸道细菌感染，形成炎症，此时炎性因子水平急剧升高，促进免疫反应的发生[6]。本研究着重检测病例组的细菌定植情况，并与健康组一般资料和免疫细胞水平进行比较。

病例组和健康组两组受试者的年龄、性别和体质量指数等一般影响因素差异无统计学意义，而在吸烟量、FEV1和FEV1/FVC方面差异有统计学意义。研究数据显示，COPD患者的肺功能相较于健康者更弱，患者吸烟有较显著影响。而且，吸烟一定程度上导致COPD[7]。病例组痰标本检测出流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、肺炎链球菌、副流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌[8]6种主要致病菌，而健康组痰标本中未检测出致病菌。笔者认为，这是因为稳定期COPD患者的部分防御系统已经被破坏，导致下呼吸道细菌感染。定植组的痰IL-8、痰IL-6、TNF-α、血IL-8和血hs-CRP等炎性因子比无定植组的高出很多[9]。健康组和无定植组的辅助T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞水平差异无统计学意义。相反，定植组和无定植组、健康组的T细胞、抑制T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞水平差异有统计学意义。这就说明，首先，细菌未定植的稳定期COPD患者免疫系统比较完善，与健康者相差无几。其次，细菌定植患者的免疫系统遭到破坏，未能有效拦截，导致致病菌侵入体内，在下呼吸道定植。炎性细胞因子主要由巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞合成，能够介入炎症和免疫反应。如TNF-α通过激活淋巴细胞和中性粒细胞介入炎症和免疫反应，IL-8则通过刺激T淋巴细胞和中性粒细胞介入。巨噬细胞能够对病原体进行吞噬。中性粒细胞在炎症发生时趋向炎症部位，分解细菌和组织碎片。淋巴细胞由淋巴器官产生，是机体免疫应答功能的重要成分，如辅助T细胞和抑制T细胞。综合炎性因子和免疫细胞的统计数据，依据免疫系统的相关知识可以做出合理的解释。下呼吸道细菌感染后机体产生大量的炎性因子，刺激和激活免疫细胞，促进免疫反应的发生，从而对抗入侵细菌。

综上所述，下呼吸道细菌定植引起的炎症反应极有可能加重COPD程度[10]，进而降低肺功能，而肺功能的降低可能导致细菌更易侵入[11]。因此针对伴有下呼吸道细菌定植的稳定期COPD患者可以适当给予抗生素，提高患者肺功能。目前，COPD的确切病因尚不明确，在治疗上难免不够彻底，对COPD患者治疗时，我们应当积极应对，面对稳定期的COPD患者也要谨慎对待，密切观察，利用完善的医疗手段和全面的术后护理尽可能地降低细菌感染的发生率，避免COPD的加重转化。

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Lower airway bacterial colonization and immune status in patients with stable stage of chronic obstructive pulmonary disease.

YU Li1,HE Yong-zheng2.
The First Department of Internal Medicine1,the Second Department of Clinical Laboratory2,People's Hospital of Gucheng County of Hengshui,Gucheng 253800,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between lower airway bacterial colonization and the immune status of patients with stable stage of chronic obstructive pulmonary disease(COPD).MethodsFifty patients with stable stage of COPD from March 2010 to March 2013 in our hospital(the study group)and 50 healthy volunteers receiving health examination in our hospital(the healthy group)were enrolled.The general data and the level of immune cells were compared between the two groups.According to the bacterial colonization,patients were divided into colonization group and non-colonization group.The levels of inflammatory factors were compared.ResultsAge,gender and body mass index showed no statistically significant difference between the two groups(P＞0.05),while the amount of smoking,FEV1and FEV1/FVC had statistically significant difference (P＜0.05).Sputum IL-8,sputum IL-6,TNF-α,plasma IL-8 and hs-CRP levels revealed statistically significant difference between the colonization group and the non-colonization group(P＜0.05).Helper T cell,suppressor T cell,macrophages and neutrophils had no significant difference between the healthy group and the non-colonization group(P＞0.05),but showed statistically significant difference between colonization group and non-colonization group,healthy group(P＜0.05).ConclusionLower airway bacterial colonization can lead to decreased immune function in patients with stable stage of COPD,thus results in deterioration in disease.

Colonization;Chronic obstructive pulmonary disease(COPD);Stable stage;Inflammatory factors;Immune cells;Immune status

R563

A

1003—6350（2015）02—0208—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.02.0073

2014-07-03)

于 丽。E-mail：28442144@qq.com