李喆，张志强，祁鸣，张桂青

(1石河子大学医学院，新疆石河子832002;2石河子大学医学院第一附属医院)

创伤后应激障碍(PTSD)是指由于异乎寻常的威胁性或灾难性的心理创伤导致延迟出现和长期持续的精神障碍［1］。PTSD发病的潜伏期从几周到数月不等(很少超过6个月)［2］。目前，临床医生主要依据病史、临床表现作出诊断，还没有一个明确的实验室指标来帮助诊断PTSD。有学者认为，血液生物学标志物检测对于诊断PTSD具有潜在的价值，同时指出外周血单个核细胞p11 mRNA可作为PTSD的生物学标志物来进行研究［3］。2014年3～9月，我们观察了PTSD患者p11 mRNA表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 PTSD患者19例(PTSD组)，男4例，女15例;经历创伤事件年龄25～65(46.68±14.05)岁。纳入标准:①符合《国际精神障碍分类与诊断标准》(第10版)中的PTSD诊断标准，且经临床心理科医生诊断确诊;②年龄18岁以上，性别不限;③意识清楚、病情平稳且愿意接受各类问卷、量表调查者;④至少半年内未接受过免疫抑制剂及免疫增强剂治疗;⑤创伤事件前无明显躯体疾病异常;⑥征得受试者或其监护人知情同意。排除标准:①严重心、脑、肝、肾疾病及其他严重的躯体疾病;②内分泌系统、免疫系统、神经系统疾病，急、慢性感染者;③精神发育迟滞者;④怀孕、哺乳妇女;⑤有长期饮酒或药物依赖史。经历创伤事件类型:丧亲11例，车祸5例，被侮辱2例，目击创伤事件1例。距创伤事件时间(0.49±0.79)a。婚姻状况:已婚11例，未婚1例，离异1例，丧偶6例;受教育程度:9 a及以下5例，9 a以上14例。另选同期经历创伤事件但未发生PTSD的患者13例(非PTSD组)及健康体检者19例(对照组)。

1.2 p11 mRNA检测 ①外周血单个核细胞分离:早8:00～10:00空腹抽取肘静脉血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝，等比例稀释，以2 000 r/min离心20 min用以分离外周血单个核细胞;用PBS溶液洗涤1～2次，将得到的细胞转移至干净无核酶EP管中，存入－80℃冰箱保存备用。②总RNA提取和逆转录:采用总 RNA提取试剂盒提取总 RNA，TIANScript cDNA第一链合成试剂盒和随机引物合成cDNA。③引物设计及合成:设计p11和β-actin基因扩增引物，p11:5'-AAATTCGCTGGGGATAAAGG-3'，5'-AGCCCACTTTGCCATCTCTA-3'。β-actin:5'-ACCTGTACGCCAACACAGTG-3'，5'-ACACGGAGTACTTGCGCTCA-3'。④实时荧光定量聚合酶链式反应(QRT-PCR):采用Real Master Mix(SYBR Green)试剂盒，在64孔ABI Prism 7300序列检测系统上进行QRT-PCR扩增。以管家基因β-actin作为内对照基因来标化目的基因的表达水平。每个待测样本的基因和内对照基因均重复3次，同时分别设立3个阴性对照孔。定量QRT-PCR反应体系为20 μL，包括9 μL 2.5 × Real Master Mix/20 × SYBR solution，正、反向引物(均为 1 μmol/L)各 1 μL，cDNA 模版 2 μg。反应程序:94℃起始模板变性2 min，1个循环;94℃变性20 s;55℃退火30 s;68℃延伸1 min，40个循环。⑤采用log2R进行相对定量分析。

1.3 临床症状评估 采用创伤后应激障碍量表平民版(PCL-C)、汉密顿焦虑量表(HAMA)、汉密顿抑郁量表(HAMD)评估患者病情。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。3组间p11 mRNA表达水平的比较采用F检验，进一步的两两比较采用LSD法。PTSD组与非PTSD组HAMA、HAMD、PCL-C评分比较采用 t检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p11 mRNA表达比较 PTSD组、非PTSD组、对照组 p11 mRNA相对表达量分别为 －0.495±0.920、0.911 ±1.474、－0.000 ±0.791，PTSD 组、对照组分别为与非PTSD组比较，P均＜0.05。

2.2 HAMA、HAMD、PCL-C 评分比较 PTSD 组HAMA、HAMD、PCL-C 评分分别为(21.63 ±7.79)、(25.11 ±8.56)、(55.84 ±6.35)分，非 PTSD 组分别为(10.31 ±6.22)、(13.00 ±9.88)、(31.77 ±5.09)分，两两比较，P 均 ＜0.05。

2.3 相关性分析 p11 mRNA相对表达量与HAMD 评分呈负相关(r= －0.299，P=0.033)，与PCL-C 评分呈负相关(r= －0.385，P=0.030)，与HAMA 评分无相关性(r= －0.233，P=0.111)，与经历创伤事件的年龄无相关性(r=－0.184，P=0.315)，与距创伤事件的时间无相关性(r=－0.031，P=0.867)。

3 讨论

p11又称为 S100A10或 calpactionⅠ轻链，是S100家族中的成员［4］;人们首先在大脑中发现这个家族，并且因为可以溶解在100%的硫酸铵中而称为S100［5］。p11在不同的细胞和组织中表达量不同，在肺、肠、肾中高表达，在红细胞中不表达，在肝脏中有适当表达［6，7］。p11调节许多细胞过程，如细胞周期进程和分化;通过F-肌动蛋白的重组，参与胞吐和胞吞，还可以将5-羟色胺1B受体从细胞质运输到细胞膜［8，9］。Svenningsson 等［9］发现，大鼠大脑的额叶皮质、下丘脑腹内侧、海马p11 mRNA与5-羟色胺1B受体的分布相似，在抑郁症动物模型中，p11 mRNA水平下降，在经过三环类抗抑郁、单胺氧化酶抑制剂、电休克治疗后p11 mRNA表达水平升高。这些都说明了p11在抗抑郁药药物治疗的机制中发挥着作用。Melas等研究也证明，p11与抗抑郁药物作用密切相关。既往研究发现，p11是药物治疗的新关键，通过5-羟色胺1B受体与五羟色胺系统发生相互作用。

既往研究［10］发现，PTSD患者 p11 mRNA较对照组下调。而本研究结果显示，PTSD组与对照组p11 mRNA相对表达量比较无统计学差异。本研究中收集的患者病程较短，不同患者处于疾病的不同阶段，可能是导致与之前研究结果不同的原因。本研究还发现，非PTSD组p11 mRNA表达量较其他两组增加。根据量表结果提示，非PTSD组的患者中部分表现出焦虑与抑郁问题，但尚不足以诊断为焦虑症或抑郁症，是否会进一步发展为焦虑症或抑郁症需要进一步随访。事实上，DSM-Ⅳ并不推荐将经历丧亲之痛2个月以内的人诊断为抑郁，即使他/她有抑郁病史，这一点应引起我们的重视。此外，p11 mRNA在非PTSD组中上升，这是否提示p11 mRNA水平上升阻止了PTSD的发生发展值得进一步研究。此前研究发现，在PTSD小鼠中，大脑的前额皮质、海马和杏仁核中p11 mRNA相对表达量增加。在PTSD患者死后的尸检研究中发现，背侧前额叶皮层中p11 mRNA上升。外周血与中枢系统的不一致，可能是p11 mRNA在不同组织中表达不同造成的，也有可能是不同创伤经历和不同疾病阶段造成的。但中枢系统取材困难，不适宜活体研究，外周血取材方便，并能够动态反应机体情况，中枢系统与外周系统是否存在不同的分子机制，仍值得进一步研究。

同时，在本研究中有52.6%的患者有自杀倾向，有自杀行为的人仅有1例。Henderson等［11］研究发现62%诊断PTSD的个体有自杀观念。既往研究［12］发现，自杀未遂者外周血单个核细胞p11 mRNA下降，在没有自杀者中有所上升。而本研究中自杀未遂者较少，这也可能是导致研究结果不同的另一原因。Su等［10］发现，PTSD患者p11 mRNA与HAMD评分呈正相关。本文结果显示，p11 mRNA表达量与HAMD、PCL-C评分有关，但与HAMA评分、经历创伤事件的年龄、距创伤事件的时间、创伤事件的类型无相关性。提示p11 mRNA可能与患者的临床症状有一定的相关性。

［1］沈渔邨.精神病学［M］.5版.北京:人民卫生出版社，2009:620-627.

［2］陈方彦.CCMD-3中国精神障碍分类与诊断标准［M］.济南:山东科学技术出版社，2001:95-98.

［3］Zhang L，Li H，Benedek D，et al.A strategy for the development of biomarker tests for PTSD［J］.Medical Hypotheses，2009，73(3):404-409.

［4］Marenholz I，Lovering RC，Heizmann CW.An update of the S100 nomenclature［J］.Biochim Biophys Acta，2006，1763(11):1282-1283.

［5］Moore BW.A soluble protein characteristic of the nervous system［J］.Biochem Biophys Res Commun，1965，19(6):739-744.

［6］Saris CJ，Kristensen T，D'Eustachio P，et al.cDNA sequence and tissue distribution of the mRNA for bovine and murine p11，the S100-related light chain of the protein-tyrosine kinase substrate p36(calpactin I)［J］.J Biol Chem，1987，262(22):10663-10671.

［7］Zokas L，Glenney JR Jr.The calpactin light chain is tightly linked to the cytoskeletal form of calpactin I:studies using monoclonal antibodies to calpactin subunits［J］.J Cell Biol，1987，105(5):2111-2121.

［8］Gerke V，Weber K.The regulatory chain in the p36-kd substrate complex of viral tyrosine-specific protein kinases is related in sequence to the S-100 protein of glial cells［J］.EMBO J，1985，4(11):2917-2920.

［9］Svenningsson P，Chergui K，Rachleff I，et al.Alterations in 5-HT1B receptor function by p11 in depression-like states［J］.Science，2006，311(5757):77-80.

［10］Su TP，Zhang L，Chung MY，et al.Levels of the potential biomarker p11 in peripheral blood cells distinguish patients with PTSD from those with other major psychiatric disorders［J］.J Psychiatr Res，2009，43(13):1078-1085.

［11］Henderson S，Andrews G，Hall W.Australia's mental health:an overview of the general population survey［J］.Aust N J Psychiatry，2000，34(2):197-205.

［12］Zhang L，Su TP，Choi K，et al.P11(S100A10)as a potential biomarker of psychiatric patients at risk of suicide［J］.J Psychiatr Res，2011，45(4):435-441.