赵东岳，陈金锋，韦剑辉

(福建师范大学南方生物医学研究中心，福州 350117)

弓形虫截短SAG2基因的克隆表达与免疫活性分析

赵东岳*，陈金锋，韦剑辉

(福建师范大学南方生物医学研究中心，福州 350117)

构建截短的弓形虫表面抗原2(SAG2)原核表达系统，并探讨其抗原活性。PCR扩增去掉信号肽和C-末端的SAG2基因片段，插入原核表达载体pGEX-4T-3后转化到大肠杆菌DH5α，并用IPTG诱导。SDS-PAGE和Western blot鉴定重组SAG2t的表达及其免疫反应原性。每升菌液约纯化出4 mg rSAG2t蛋白；Western blot显示，ME49株感染的鼠血清和rSAG2t免疫的鼠血清均可强烈识别表达的截短SAG2蛋白。原核表达体系实现了截短的SAG2蛋白的可溶性表达，并具有良好的完全抗原活性。

弓形虫RH株/ME49株；免疫印记；截短SAG2基因

刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是寄生在宿主有核细胞内的一种原虫，作为机会致病病原，引起人畜患病。弓形虫感染怀孕母畜后，侵害胎膜、侵染胎儿的大脑和肺[1]，可导致早产、流产、胎儿畸形，死胎。农场的贝类水生动物也有较高的弓形虫感染率[2]，因此弓形虫已经严重威胁人畜健康，弓形虫病的防治刻不容缓。弓形虫表面抗原2(SAG2)基因为单拷贝基因，无内含子，SAG2蛋白也具有1个游离的N-末端信号肽和疏水性的C-末端，被GPI锚定[3]。C.D.Yang等[4]诱导的嵌合蛋白rSAG1/2具有较强的免疫保护力；A.V.Machado等[5]制备的SAG2基因疫苗，能够强烈刺激宿主的体液免疫和细胞免疫，因此SAG2抗原具有较强的免疫原性。本研究利用去除信号肽和C-末端的SAG2(438 bp)基因序列进行克隆并在大肠杆菌内进行高效表达，以便制备快速、准确的抗体检测的相关试剂盒。……