西安交通大学第二附属医院(西安 710004)

贺军涛 张彦平 何 娜△

双联检半定量隐血检测在海路HF-180自动粪便分析仪上的应用*

西安交通大学第二附属医院(西安 710004)

贺军涛 张彦平 何 娜△

目的：探讨双联检半定量隐血检测方法在海路HF-180自动粪便分析仪上的应用价值。方法：采用海路HF-180自动粪便分析仪和双联检半定量隐血卡片对641例消化科病人粪便进行隐血检测，加样15min后在仪器连接的电脑中观察结果，统计双联检法的免疫法(单克隆胶体金)和化学法(四甲基联苯胺)的阳性率。结果：化学法阳性、免疫法阴性比率39.4%，化学法阴性、免疫法阳性比率0.47%，化学法阳性、免疫法阳性的比例17.6%。结论：双联检半定量法优于传统的胶体金法，此法用于HF-180粪便分析仪，更能在检测标准化，快速化的同时，消除人为因素造成的误差，避免交叉污染，使检测结果更准确，有较大的应用价值。

粪便隐血是消化道异常的早期预警信号，当消化道出血量较少时，粪便外观可无异常改变，肉眼不能识别，因此，对疑有消化道慢性出血的患者，应进行粪便隐血检查，对消化道恶性肿瘤(如胃癌、大肠癌、息肉、腺瘤)的早期筛查意义重大。 传统的化学法和免疫法都有其各自的缺点，而双联检半定量法则结合了两种方法，化学法可以半定量检测人粪便样本中的血红蛋白。将这种方法用于海路HF-180自动粪便分析仪，更能使粪便潜血检测自动化、标准化、便捷化。

材料与方法

1 材料选择

1.1 标本来源：2015年3月在西安交通大学第二附属医院消化科住院和门诊病人的641例粪便标本，男性379例，女性262例，年龄16～85岁，粪便留取30min内完成检测。

1.2 仪器与试剂：苏州海路生物技术有限公司生产的自动粪便分析仪HF-180、一次性使用粪便采集标本盒 、海路系列分析仪稀释液(氯化钠0.9%、硫酸钠0.1%、磷酸盐缓冲液0.01%、苯甲酸钠0.01%)、海路系列分析仪清洗液。天津中新科炬生物制药有限公司生产的大便潜血(FOB)检测试剂盒(双联法)。

2 方 法

2.1 用一次性粪便采集标本盒收集641例消化科病人的粪便标本，用采便棒在样本上几个不同位置随机取样黄豆大小(20～50mg)。将粪便采集盒按编号顺序放入HF-180自动粪便分析仪检测孔，一对一放入双联检半定量隐血卡片进行粪便隐血试验，操作流程严格按照仪器及试剂盒说明书要求进行。

2.2 双联检隐血结果判读。

2.2.1 免疫法结果判读：阳性(反应线T与质控线C同时出现一条色带)，阴性(质控线C出现一条色带，反应线T无色带出现，无效(质控线C和反应线T均无色带出现，或仅有反应线T出现一条色带，则表明试验无效。

2.2.2 化学法结果的判读：阳性(在滴加样本液1min内试纸卡片从橙色到黄绿色或深绿色的变化，结果为阳性)，阴性(1min内不变色，结果为阴性)，无效(若试纸卡片呈花色，则判断无效)

结 果

对641例消化科病人的粪便标本采用HF-180自动粪便分析仪和双联检半定量隐血试纸卡片进行检测，其中化学法阳性、免疫法阴性比例39.4%，化学法阴性、免疫法阳性比例0.47%，化学法阳性、免疫法阳性的比例17.6%，见附表。

附表 粪便隐血双联检检测结果

注：A代表免疫法，B代表化学法，(+)代表阳性，(-)代表阴性

讨 论

免疫胶体金法是应用胶体金免疫检测技术，用免疫学方法检测人粪便样本中出现的人血红蛋白。化学法是应用血红蛋白具有过氧化物酶活性，可使氧化物分解释放出氧原子，使四甲基联苯胺出现颜色变化，从而检测血红蛋白。免疫法和化学法都有各自缺点，消化道大出血患者大便往往呈柏油样便或血便，此时用胶体金试纸检测往往呈假阴性，因为试纸条所包被的抗体量是一定的，那么一旦超出检测范围就会出现假阴性[1]，化学法因为特异性不强，如果患者食用肉类，血块类等食物，其血红素的作用均可以使实验呈假阳性[2]。而双联检半定量法则结合了两种方法，化学法可以半定量检测人粪便样本中的血红蛋白。根据指示剂颜变化将血红蛋白含量划分为小于2μg/ml，2～20μg/ml，20～200μg/ml，200～2000μg/ml，大于2000μg/ml五个检测区间。免疫法可测出样本中微量的血红蛋白(0.2μg/ml)，这使单克隆法对人体无症状的消化道出血更敏感[3]。

对于化学法和免疫法结果不符合的患者标本，我们发现其中11例标本均为血便，其原因可能为病人出血量大，粪便中血红蛋白量过多导致抗原过剩而出现后带效应，因此出现了假阴性。另有2例标本取样量过大，导致粪便越过采样器的隔档进入吸样池，导致采样错误，故使用HF-180粪便分析仪使应在粪便表面各处均取，并且量最好为一匙(黄豆大小)。排除明显因粪便外观性状而出现的不符合结果外，就最终判定结果做一介绍，当免疫法呈现阳性结果，但化学法呈现阴性时，表明样本中血红蛋白含量较低，为隐性出血，判定结果阳性。免疫法显示阴性结果，化学法显示阳性结果时，可能为血红蛋白过高导致抗原过量，将样本用HF-180的稀释液稀释100倍后再检测一次，如果免疫法显示阳性，表明有大量出血；如果免疫法为阴性，可能为物质干扰，判定结果为阴性。

随着社会经济发展，医院就诊病人也成直线上升趋势，而传统的手工检测粪便隐血方法很难保证按时发出检查结果，我科目前使用的海路HF-180粪便常规分析仪可连续对多个标本进行处理，每小时可测试120个样本，单个样品5 min即完成检测，大大提高了检测的效率。仪器可对采集的粪便标本自动稀释，搅拌，加样，全自动操作模式取代了目前繁琐的手工操作。而专用的标本采集盒密闭，防外泄，以及仪器的高清洗能力都避免了因手工操作造成的交叉污染，将稀释滤过后的样本液体自动灌注计数池，通过自动视野转换，自动焦距调整，快速的计数并在电脑显示屏上显示的细胞形态、分辨细胞类型、自动换算等，同时完成化学检验和显微镜镜验，极大的减轻了操作人员的劳动强度，提高了工作效率。

综上所述，将双联检半定量法引入海路HF-180全自动粪便分析仪，在方法学上，免疫法弥补了化学法易出现假阳性的缺点，化学法能对人血红蛋白进行半定量检测。其次，它能够使粪便隐血试验的检测结果更加准确，迅速，方便，实现了粪便常规检查的自动化、标准化和规范化要求，彻底改变了传统的、原始的方法及操作方式，大大提高了检验科的工作效率，将有利于临床的推广应用。

[1] 张桔红，张凌玲，林 玮．金标法测便类潜血中的后带现象 [J].实用医技杂志，2004，11(7)：402-403．

[2] 杨小艺，孙巨军，杨小青.三种不同便潜血检测方法的对比观察 [J].陕西医学杂志，2012，41(2)：214-214.

[3] 韦常丽，粪便潜血单克隆抗体法临床应用的探讨[J].广西中医学院学报，2003，6(4)：56-57．

(收稿：2015-05-18)

*国家自然科学基金资助项目(81201925)

@大便隐血 化学定量分析 粪便

R446.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.11.048

△通讯作者