彭统全，邵建伟，张润祥，曹 翀，马 波，高明春，王君伟

(东北农业大学 动物医学学院，哈尔滨 150030)

牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

彭统全，邵建伟，张润祥，曹 翀，马 波，高明春*，王君伟*

(东北农业大学 动物医学学院，哈尔滨 150030)

克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因，使其在真核细胞中表达，并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因，然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体 pPICZαA 上，构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0，重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100 μg·mL-1zeocinTM筛选和PCR鉴定，阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明：SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18 和21 ku，推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明，重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性，达到5.72×106U·mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。

牛BoIFN-α0亚型;巴斯德毕赤酵母;分泌表达；抗病毒活性

α干扰素(interferon-α，IFN-α) 属于Ⅰ型干扰素，是迄今发现的最大的一个干扰素基因家族，具有抑制病毒增殖、抗肿瘤以及加强NK细胞杀伤病原感染细胞的能力[1- 2]。1996年P.J.Chaplin等从病毒感染的牛肠上皮细胞中克隆出BoIFN-α[3]，牛IFN-α(BoIFN-α)多基因家族至少由10～12个亚型基因组成，亚型之间同源性很高。已报道的牛IFN-α A、B、C、D、E、F、G、H八个亚型核苷酸相似性在93.6%～97.2%，氨基酸相似性在91.0%～95.2%，核苷酸和氨基酸相似性均超过了90%以上。牛IFN-α和人IFN-α、鼠IFN-α氨基酸序列相似性分别为65%和57%。不同亚型可能是由不同细胞或同一细胞在不同时期分泌的，但由于缺乏系统的对比研究，其生物学活性是否有差异目前还不清楚[4]。……