陈亚冰，符 梅，兰道亮，林宝山，黄 偲，李 键*

(1.西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041； 2.西南民族大学青藏高原研究院，成都 610041)

牦牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定

陈亚冰1，符 梅1，兰道亮2，林宝山1，黄 偲1，李 键2*

(1.西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041； 2.西南民族大学青藏高原研究院，成都 610041)

本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞系，并对建立的细胞系生物学特性进行鉴定,采用组织块种植法，分离培养乳腺上皮细胞；通过胰酶消化法纯化细胞；利用免疫荧光及Western blot技术对其进行鉴定；脂质体介导法将绿色荧光蛋白基因转染进乳腺上皮细胞中，荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白基因表达；金黄色葡萄球菌侵染牦牛乳腺上皮细胞，流式细胞仪(AnnexinV/PI 双染法)检测乳腺上皮细胞的凋亡，RT-PCR检测感染细胞中抗菌肽以及凋亡因子表达。结果表明，分离纯化获得牦牛乳腺上皮细胞，细胞角蛋白18表达呈阳性，波形蛋白表达呈阴性，证明培养的细胞是上皮细胞并且没有成纤维细胞污染；β-酪蛋白表达呈阳性，说明建立的乳腺上皮细胞具有一定的泌乳功能；荧光显微镜能够检测到绿色荧光蛋白表达，表明EGFP基因成功导入了乳腺上皮细胞；金黄色葡萄球菌感染牦牛乳腺上皮细胞3 h后， Annexin V/PI 双染法检测发现感染组细胞凋亡率明显升高，差异显著(P<0.05)；感染细胞中TAP(P<0.01)、BNBD5(P<0.01)及BAX(P<0.01)表达量明显增高，BCL-2(P<0.05)表达量降低。综上表明，本研究成功建立了一株稳定的牦牛乳腺上皮细胞系，该细胞系能够作为研究牦牛乳腺发育及分化的体外研究模型。

牦牛；乳腺上皮细胞；培养；鉴定

保留乳腺特异性功能的乳腺上皮细胞系可以作为研究乳腺发育、分化以及乳腺生物反应器的理想模型[1-4]。……