邢 明，刘 晶，王 辉，郝 攀，刘 群

(中国农业大学动物医学院，国家动物寄生原虫实验室，农业部人畜共患病重点开放实验室，北京 100193)

新孢子虫GRA6表达、定位及对小鼠免疫效力的初步分析

邢 明，刘 晶，王 辉，郝 攀，刘 群*

(中国农业大学动物医学院，国家动物寄生原虫实验室，农业部人畜共患病重点开放实验室，北京 100193)

顶复亚门原虫在其侵入宿主细胞及其纳虫空泡的形成过程中，有多种蛋白质发挥着重要的作用，其中致密颗粒蛋白在纳虫空泡的形成和修饰过程中起着至关重要的作用。作者从新孢子虫基因组中扩增致密颗粒蛋白GRA6基因，构建原核表达质粒pGEX-NcGRA6，表达、纯化蛋白质，制备鼠源多抗，利用IFA对NcGRA6进行细胞内定位，显示其定位于纳虫空泡的网状系统。构建真核表达质粒pcDNA-GRA6，分别用真核质粒和重组蛋白质免疫BALB/c小鼠，给三免后小鼠腹腔接种2×106新孢子虫速殖子，观察小鼠临床变化。每次免疫前，采血检测抗体水平；攻虫后第30天，处死小鼠，利用RT-PCR检测小鼠脑内荷虫量，结果显示真核表达质粒和纯化蛋白免疫后均对小鼠提供了较好的免疫保护，与未免疫的对照组小鼠相比差异显著(P<0.05)。

新孢子虫；GRA6；定位；免疫原性

新孢子虫病(Neosporosis)是由(犬)新孢子虫(Neosporacaninum)引起的多种动物共患寄生原虫病，呈世界性分布。新孢子虫是一种严格的胞内寄生原虫，宿主范围广泛，包括牛、马、猪、犬、猫等多种家养动物，鹿、狐狸、熊、灵长类动物等多种野生动物也都可以感染[1-2]。新孢子虫病主要引起宿主的肌肉神经系统功能障碍，导致孕畜流产、死胎、产弱胎等一系列繁殖障碍，对牛的危害最大，已在世界范围内对养牛业造成巨大的经济损失。……