李 龙

西安交通大学医学院第一附属医院(西安710061)

异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样与老龄大鼠卵巢不同应力松弛特性关系研究*

李 龙

西安交通大学医学院第一附属医院(西安710061)

目的:探讨异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样与老龄大鼠卵巢应力松弛特性差异。方法:使用电子万能试验机，以0.1%/s的应变增加速度，对老龄大鼠卵巢、3日龄乳鼠异体新鲜卵巢和冷存卵巢进行应力松弛实验，比较异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样与老龄大鼠卵巢应力松弛特性差异性。结果:三组卵巢试样应力松弛曲线呈对数变化，可发现老龄大鼠卵巢组曲线与其他两组曲线明显不同，老龄组大鼠卵巢7200s应力下降幅度为0.009±0.0002显著低于异体新鲜(0.020±0.001)、冷存乳鼠卵巢组(0.022±0.003)(P<0.05)；异体新鲜组的7200s应力下降幅度与冷存乳鼠卵巢组的差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:老龄大鼠卵巢与异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样具有不同的应力松弛特性，冷存乳鼠卵巢试样具有和异体新鲜试样相近的应力松弛特性。

卵巢是女性重要生殖器官之一，功能主要包括产卵及分娩类固醇激素，是女性生理代谢的重要组织。随着卵巢癌、卵巢早衰、更年期综合征等卵巢相关疾病发病率的不断增高，卵巢健康越来越被临床重视[1]。目前，临床常选用外激素替代疗法来救治卵巢相关疾病，但这些替代激素与机体自然分泌激素存在一定生理差异，患者易出现或加重子宫肌瘤、子宫内膜异位症等疾病。因此，卵巢移植术成为恢复女性内分泌功能的重要救治方式[2]。本次研究中，我们对15只12月龄SD大鼠，30只3日龄SD乳鼠进行了卵巢移植术，旨在分析异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样与老龄大鼠卵巢应力松弛特性，并为临床提供参考意见。

材料与方法

1 实验动物和仪器 选取15只12月龄SD大鼠，30只3日龄SD乳鼠。所有动物均麻醉后取双侧卵巢，试样分组包括老龄大鼠卵巢组，乳鼠异体新鲜卵巢组和乳鼠冷冻卵巢组，每组试样15份。

2 实验方法 计算试样直径及长度，并输入计算机内。预处理试样，再将试样置于含生理盐水的有机玻璃缸内，并置于电子万能试验机上，于室温20℃环境下应变。异体新鲜卵巢组大鼠应变37.2%，乳鼠冷冻卵巢组应变达38.1%，各组应变力达0.055mPa时，恒定应变，将应力逐步降低。计算机从应变开始时采集数据，直至应变结束，共采集100个数据，历时7200s，将结果打印导出。

3 观察指标 观察3组试样应力松弛数据和曲线，以及应力与时间的变化规律。

结 果

1 应力松弛曲线 3组卵巢试样应力松弛曲线，见图1。可发现老龄大鼠卵巢组曲线与其他两组曲线明显不同，老龄大鼠卵巢组试样7200s应力下降幅度，与异体新鲜组试样和冷存组试样比较差异有统计学意义(P<0.05)，而异体新鲜组试样和冷存组试样比较差异无统计学意义(P>0.05)，见附表。

图1 3组试样应力松弛曲线

组 别份数7200s应力下降量FP老龄大鼠组150.009±0.0002异体新鲜组150.020±0.001*17.835<0.05冷存组150.022±0.003*

注：*与老龄大鼠组比较，P<0.05

2 各组卵巢试样归一化应力松弛函数结果 见图2。

图2 各组试样归一化应力松弛函数曲线

女性卵巢位于子宫底后外侧，临盆腔侧壁，呈圆形，主要结构包括卵泡、结缔组织、血管、神经及淋巴管等。卵巢移植术是一种新型卵巢疾病救治手术，国外也有全卵巢移植成功案例，但我国研究较晚，至今尚无临床实例[3]。卵巢与其他器官一样，均有生物黏弹性材料组织，这种黏弹性是保证器官及组织功能的重要条件[4]。本次研究中我们对SD大鼠进行卵巢移植研究，并对大鼠自体卵巢异体新鲜与冷存卵巢应力松弛特性进行研究。

我们的研究发现3组卵巢试样应力松弛曲线呈对数变化，老龄大鼠卵巢组曲线与其他两组曲线明显不同，老龄大鼠卵巢组试样7200s应力下降幅度，与异体新鲜组试样和冷存组试样比较差异显著，这可能与老龄大鼠卵巢功能衰退有关，功能衰退导致大鼠卵巢黏弹性损伤，应力下降迅速。而我们对比异体新鲜组试样和冷存组试样应力曲线发现，两种大鼠应力松弛曲线近似，提示这两组大鼠卵巢黏弹性近似。从时间变化上分析，我们可以从图1、图2中发现3组大鼠1000s前应力松弛曲线下降最快，这表明卵巢试样固有膨胀压低于局部压力，组织内水分子向外溢出速度较快，随着组织内水分子的大量溢出，膨胀压与局部压差逐步降低，故1000s后应力松弛曲线逐步稳定，最终平衡[5]。应力松弛是黏弹性组织材料流变特性的重要检测参数，是临床常用的生物材料、组织器官应力及时间检测标准，特指恒定应力下，应力随时间变化而下降，并在一定时间后趋于平衡的这一状态。应力松弛检测需求较长时间，且实验期间需保证外部环境稳定，因此对实验条件具有较高要求[6]。本次研究中，我们选用的电子万能试验机具有自动应力调节，应变增速以及恒定应力等功能，且试验机自带-35℃-200℃环境温箱及温控装置，实验人员可根据具体需求进行调控。此外，为保证试样湿度，我们将试样置于含生理盐水的有机玻璃缸内，并优先对试样进行预处理，将实验误差降到最低。有学者在大鼠新鲜卵巢和冷冻卵巢移植研究中发现，冻卵巢移植后卵巢功能恢复速度优于新鲜卵巢，分析可能与免疫抵抗有关[7]。还有学者对家兔卵巢移植后组织学状态进行分析发现，在位卵巢皮质内出现不同发育程度的健康卵泡，且间质细胞呈轻度肿胀；而自体皮下移植后存活的卵巢组织状态与移植前近似，卵巢被厚实的结缔组织报告，表面血管较为丰富，皮质内有不同发育程度的健康原始、初级卵泡，部分成功移植卵巢甚至可见成熟窦状卵泡，异体移植存活卵巢组织表现与正常卵巢形态近似[8]。

综上所述，老龄大鼠卵巢与异体新鲜、冷存乳鼠卵巢试样具有不同的应力松弛特性，其中老龄大鼠卵巢应力松弛较差，异体新鲜、冷存乳鼠卵巢近似，但冷存乳鼠卵巢移植后免疫排斥更小。

[1] 王燕蓉,孙 静,李 婧,等. 小鼠卵巢自体及异体移植前的尿促性素体外干预对卵泡存活的影响[J]. 器官移植, 2012,3(4):219-223.

[2] 郁丽丽,刘丽均,王俊风,等. 同品系小鼠卵巢移植方法的建立[J]. 中国比较医学杂志, 2013,23(7):41-43.

[3] 刘 芳,黑常春,郑小敏,等. 卵巢移植对去势大鼠海马神经元数量和ER-β、NG表达的影响[J]. 神经解剖学杂志, 2013,29(3):306-310.

[4] 徐大宝,许俊磊,韩雪莹,等. 大鼠胚胎卵巢原位移植的生殖内分泌功能研究[J]. 南方医科大学学报, 2011,31(10):1757-1760.

[5] 程春霞,薛 敏,徐大宝. 大鼠胚胎卵巢原位移植后子代的健康安全性研究[J]. 中南大学学报(医学版), 2011,36(12):1158-1162.

[6] 丁洪月,吴 瑶,李新颖. 老龄大鼠自体卵巢与异体新鲜及冷存卵巢应力松弛特性对比分析[J].中国老年学杂志, 2012,32(10):2117-2119.

[7] 孔 斌,刘 芳,张文华,等. 卵巢移植对去势大鼠海马神经元形态及BDNF表达的影响[J]. 神经解剖学杂志, 2012,28(3):273-277.

[8] 张 翘,张忠君,李新颖. 去卵巢骨质疏松模型大鼠L4脊椎骨的应力松弛与蠕变中国组织[J].工程研究与临床康复, 2011,15(26):4829-4832.

(收稿：2014-10-10)

Study on the relationship between Allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovary and aged rats ovarian specimens stress relaxation characteristics

Li Long

The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Medical College(Xi’an710061)

Objective: Discussion allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovaries and ovarian specimen stress relaxation characteristic difference in aged rats.Methods: The use of electronic universal testing machine, with 0.1% / s strain rate of increase of the rats ovary aging, three-day-old suckling mice and allogeneic fresh cold storage ovarian ovarian stress relaxation experiments to compare allogeneic fresh, cold storage neonatal rat ovary samples the aged rats with stress relaxation properties of ovarian differentiation.Results: Three samples of ovarian stress relaxation curves logarithmic changes could be found in the aged rats with ovarian group curve and the curve significantly different from the other two groups, the group aged rats with ovarian decrease stress specimen 7200s, 7200s stress decrease the aging group of ovariectomized rats was 0.009 ± 0.0002 was significantly lower than that in the fresh allograft group (0.020 ± 0.001), cold storage neonatal rats ovary group (0.022 ± 0.003) (P<0.05); 7200s allogeneic fresh set of stress decrease neonatal rat ovary and cold storage group the difference was not statistically significant (P> 0.05).Conclusion: Aging rats ovary and allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovary samples with different stress relaxation, cold storage neonatal rats ovary and allogeneic fresh samples have similar stress relaxation properties of the sample.

Ovary @The stress relaxation characteristics Animals,laboratory Rat

*陕西省科技攻关项目(K13-01-13)

卵巢 @不同应力松弛特性 动物，实验 大鼠

R-33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.002