microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响
2015-03-21刘晓阳郑海伦
刘晓阳,郑海伦,任 志,张 磊
microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响
刘晓阳1,2,郑海伦2,任 志2,张 磊1
目的研究miR-137过表达对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响。方法采用RT-PCR法检测5株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞(GES)中miR-137的表达。构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞。通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响。结果MKN-45细胞中miR-137的表达丰度明显低于在GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。同时成功构建micro up病毒感染的细胞组。划痕实验结果显示,与空白对照组(CON组)和阴性对照组(NC组)比较,micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义(P<0.05);细胞侵袭小室检测结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组的平均迁移率差异有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义(P<0.01)。结论miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点。
胃癌;miR-137;MKN-45;细胞侵袭
microRNA(miR)是长度约18~25个核苷酸的非编码单链小分子RNA,越来越多的研究[1-2]提示miR几乎参与调控所有人类已知的细胞进程,在功能上充当癌基因或抑癌基因的角色,在肿瘤的发生和发展中起着重要的调控作用。胃癌是人类的常见恶性肿瘤。该研究通过在人胃癌MKN-45细胞中转染miR-137使其过表达,探讨miR-137对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响,进一步揭示miR-137在胃癌细胞中的生物学功能。
1 材料与方法
1.1 实验材料has-miR-137、永生化正常人胃黏膜上皮细胞(GES)、人胃癌细胞系(AGS、BCG-823、MKN-45、MKN-74、SGC-7901)、Primer(R&F)购自上海吉凯基因化学技术有限公司;Trizol、Opti-MEM购自美国Invitrogen公司;DNTPs、Rnase Inhibitor、MMLV购自美国Promega公司;……
