赵文博，李瑞航，贺鹏亮，李朋娅，王梦醒，杨春华，于永忠，崔玉东

（黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319）

羊口疮是由羊口疮病毒引发的羊属动物接触性皮肤传染病，主要侵害2～5月龄羔羊，引起感染部位皮肤以及粘膜增生性病变[1]。临床上主要以感染动物的唇、鼻孔、口腔黏膜、乳房、阴部等部分皮肤形成红斑、水疱、脓疱、丘疹和疣状痂皮为特征，在感染羊群中采用抗病毒药物以及抗生素治疗，发病率依然能达到60%，死亡率达到24.7%，并且偶尔感染人的一种人畜共患传染病[2]。羊口疮病毒属于痘病毒科副痘病毒属，病毒粒子长250～280 nm，宽170～200 nm，呈椭圆形的线团样，且病毒粒子外有囊膜包裹，ORFV基因组长134～139 kb，病毒基因组中间是一个长的中心编码区，两头是相同的反向末端重复序列[3]。在ORFV全基因组中，第11号基因为B2L基因，位于病毒的保守区，基因全长1 137 bp，是一个完整的阅读框，编码蛋白质大小为42 kDa。该蛋白是病毒囊膜的成分之一，可刺激机体产生强烈的抗体反应，并刺激淋巴细胞释放[4-5]。然而，目前专门针对这种疾病的药物相对较少，国内外对于ORFV中蛋白质的抗原性研究较少，但已经肯定的是B2L蛋白是羊口疮病毒优势抗原之一[6]。因此实验借助PCR技术扩增B2L基因将其定向克隆至pET-30a，成功构建pET30a-B2L表达载体，为进一步研究羊口疮病毒，分析鉴定细胞表位以及基因工程疫苗的制作夯实基础。

1 材料与方法

1.1 材料

羊口疮病毒保存于黑龙江八一农垦大学生命技术学院分子病毒研究室。病毒DNA提取试剂盒、质粒提取试剂盒、胶回收试剂盒、pET-30a载体、PMD18-T载体、T4DNA连接酶、限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ购自Promega公司；……