胡海燕++++++刘植华

[摘要] 目的 观察全反式维甲酸（ATRA）对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC侵袭、转移能力的影响，并探讨其分子机制。 方法 分别用不同浓度ATRA（1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L）处理对数生长期HeLa/MMC细胞，以Transwell小室检测细胞侵袭、转移能力的变化；采用CCK-8法检测经1×10-7、5×10-7、1×10-6、5×10-6、1×10-5 mol/L ATRA处理后的细胞增殖情况；通过流式细胞仪观察1×10-6 mol/L ATRA处理HeLa/MMC细胞3、7 d后细胞周期的变化；半定量RT-PCR检测1×10-6 mol/L ATRA处理HeLa/MMC细胞3、7 d后细胞c-myc mRNA水平变化。 结果 ①Transwell小室结果显示，1×10-7 mol/L ATRA组、1×10-6 mol/L ATRA组、1×10-5 mol/L ATRA组细胞侵袭数、转移数[（40±6）、（73±7）个，（26±4）、（61±4）个，（16±3）、（49±5）个）]均减少，与对照组[（63±9）、（89±9）个]比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。②CCK-8法检测细胞增殖结果显示，随着全反式维甲酸药物浓度的递增，HeLa/MMC细胞增殖逐渐被抑制；实验各组与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。③流式细胞仪检测结果显示，全反式维甲酸使进入S期耐药细胞数减少。1×10-6 mol/L ATRA处理3、7 d S期细胞比例分别为（14.90±0.21）%、（6.48±0.18）%；两个实验组与对照组（16.28±0.12）%比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。④RT-PCR结果显示，全反式维甲酸下调癌基因c-myc的转录。1×10-6 mol/L ATRA处理3、7 d c-myc mRNA相对表达量分别为（0.5406±0.0011）、（0.4312±0.0009）；两个实验组与对照组（0.6804±0.0012）比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 全反式维甲酸可抑制宫颈癌耐药细胞株的侵袭、转移，其机制可能通过下调癌基因c-myc转录实现。

[关键词] 宫颈肿瘤；维甲酸；转移；侵袭

[中图分类号] R737.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）02（c）-0018-04

全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）是由维生素A在人体内代谢生成的高活性衍生物，对胚胎发育过程中细胞分化以及机体的生长、发育均具有重要调节作用[1]。到目前为止，ATRA用于急性早幼粒白血病治疗的基础与临床研究较为深入[2-3]，而有关人体实体瘤的分化研究，已见报道的有结肠癌、胃癌、肺鳞状上皮癌、乳腺癌等[4-5]。本课题组的前期研究显示，ATRA能有效抑制宫颈癌细胞HeLa增殖并诱导其分化，且能提高宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC对化疗的敏感性[6]。宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC较其亲本细胞HeLa增殖更快、恶性度更高。本研究以宫颈癌耐丝裂霉素细胞株HeLa/MMC为研究对象，体外观察ATRA对宫颈癌耐药细胞侵袭、转移能力的影响，探讨其作用的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

ATRA、二甲基亚砜（DMSO）、PI、CCK-8试剂盒、RNase（Sigma公司、美国）。Transwell小室（Corning公司、美国）。SV总RNA分离试剂盒（Promega公司、美国）。One step RT-PCR试剂盒（TaKaRa公司、中国）。引物由中国上海Invitrogen公司合成。

1.2 耐药细胞株HeLa/MMC的建立