杨柳，董博宇，白洁，李鹏跃，赵梦迪，谭宁，陆洋，杜守颖

(北京中医药大学中药学院，北京 100102)



犬用盐酸特比萘芬片剂矫味处方及含量测定研究

杨柳，董博宇，白洁，李鹏跃，赵梦迪，谭宁，陆洋*，杜守颖*

(北京中医药大学中药学院，北京 100102)

为了对犬用盐酸特比萘芬片剂进行矫味处方筛选并对盐酸特比萘芬进行含量测定，试验以片剂成型性为指标优选出含5%纯天然鸡粉、3%鸡粉香精及5%味精的片剂矫味处方，并分别按照处方对所制片剂进行重量差异、崩解时限考察，再以比格犬对各处方片剂偏好筛选出最优矫味剂为纯天然鸡粉，采用HPLC法测定该矫味处方盐酸特比萘芬含量。盐酸特比萘芬回归曲线方程为y=2.652×107x- 2.418×104(r=0.9998)，在0.0201～0.4026 mg/mL范围线性关系良好，平均回收率为97.97%，RSD=0.94(n=6)。对三批片剂进行含量测定，含量在99.17%～101.24%之间，含量均匀度A+1.8S<15。因此所筛选的矫味剂处方工艺可行，含量测定方法简便、符合生产要求，纯天然鸡粉作为矫味剂既可以迎合犬类的偏爱又不影响片剂的质量检查。

犬用片剂；矫味剂；盐酸特比萘芬；含量测定

盐酸特比萘芬片是由盐酸特比萘芬加入适量辅料制成供犬用的片剂。盐酸特比萘芬是一种新型的丙烯胺类抗真菌药，具有广谱抗真菌活性，抗菌作用强，并且很少产生耐药性，为国家二类抗真菌新药[1]。可广泛的应用于畜禽特别是犬猫真菌病的治疗。但由于犬的嗅觉很灵敏，服用片剂的顺应性差,主人通常需要将药物与食物混合或者其他的方式诱导小动物服药，这样不仅影响药物的吸收与利用，而且也对主人造成一定的困扰。因此有必要对原有的盐酸特比萘芬处方进行矫味优化，改善药物的气味，从而诱导犬类主动服药，提高犬类服药的顺应性。试验选用3种安全可靠的矫味剂(纯天然鸡粉、鸡粉香精以及味精)进行矫味效果的考察，筛选出适宜的矫味剂及用量，并对所制备的盐酸特比萘芬片进行重量差异、崩解时限检查、含量及含量均匀度的测定。

1 材料

1.1 仪器 ZP10旋转式压片机(上海信源制药机械有限公司)；崩解仪(ZBS-6G天津大学无线电厂)；HC-97硬度测定仪(Kraemer)；LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；BSA224S型电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 试剂与药品 盐酸特比萘芬原料药(济南明鑫制药股份有限公司，批号13125510)；盐酸特比萘芬对照品(中国食品药品检定研究院，批号100563-201402)；纯天然鸡粉，市售；鸡粉香精，市售；味精，市售；纯净水(杭州娃哈哈集团)；甲醇(fisher，色谱纯)；四氢呋喃(fisher，色谱纯)；乙腈(fisher，色谱纯)；磷酸(北京化工厂，色谱纯)；四甲基氢氧化铵(国药集团化学试剂有限公司)

1.3 实验动物 比格犬，6只，10～15 kg, 年龄3～5岁，由中国农业大学动物房提供。

2 方法与结果

2.1 盐酸特比萘酚矫味处方研究

2.1.1 未经矫味的片剂的制备 参照文献方法[2-3]，盐酸特比萘芬、淀粉、糊精适量，共制成100片。按处方量将盐酸特比萘芬、淀粉、糊精进行混合，并过60目筛混合均匀，加入黏合剂制成软材，用16目筛制粒，所得颗粒置于65℃鼓风烘箱中干燥，然后用18目筛整粒。压片，干燥贮藏。

2.1.2 添加矫味剂的处方设计 按照未经矫味的处方的辅料比例，相应的减少淀粉和糊精的量，分别加入纯天然鸡粉、鸡粉香精及味精三种矫味剂。矫味剂的用量参考《鸡精调味料》国家行业标准、药用辅料常用用量及实验研究[4]进行设计，以片剂的可压性作为评价指标，考察不同比例的矫味剂对压片成型的影响，结合生产成本考虑，初步筛选出处方3、6、7进行质量检查,结果见表1。

表1 处方中各矫味剂用量的考察结果

2.1.3 质量检查

2.1.3.1 性状检查 参照文献方法[5]，按照2.1.1制备工艺，根据处方3、6、7制备片剂，观察片剂表面光洁，色泽均匀。

2.1.3.2 重量差异 随机抽取20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再精密称定各个片的重量。三个处方(处方3、6、7)平均片重分别是0.606 g、0.604 g、0.603 g，均符合中国兽药典规定。

2.1.3.3 崩解时限 在每个处方中，随机抽取6片，采用升降式崩解仪进行检查，检查三次。三个处方片剂的平均崩解时限分别是125 s，106 s，112 s。均符合中国兽药典规定。

2.1.4 比格犬对矫味效果评价 经2.1.2项下初步筛选出处方3、6、7，分别将三个处方的盐酸特比萘芬片喂给比格犬，观察，以比格犬服药的顺应性为评价指标，试验发现比格犬对处方3最为偏爱。结果见表2。

表2 比格犬对矫味效果评价

2.2 盐酸特比萘芬片剂含量测定

2.2.1 色谱条件 参照文献方法[6-8]，色谱柱：Merck KGaA Hibar-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-四氢呋喃-四甲基氢氧化铵缓冲液(取25%四甲基氢氧化铵5.8 mL，加水800 mL，用0.7 mol/L磷酸溶液调pH值至7.8，加水稀释至1000 mL)(60∶20∶20)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：280 nm。

2.2.2 对照品溶液的制备 按照所需浓度精密称取盐酸特比萘芬对照品，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，微孔滤膜滤过，取续滤液，作为对盐酸特比萘芬对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 将不同批次样品研磨，精密称取约0.015 g(相当于盐酸特比萘酚约2.5 mg)，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.4 线性关系考察 按照2.2.2项下方法，配制浓度为0.4026 mg/mL的盐酸特比萘芬对照品溶液。精密量取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置10 mL容量瓶中加甲醇稀释至刻度，配制浓度分别为0.0201、0.0403、0.0805、0.1610、0.2416、0.3221、0.4026 mg/mL的对照品溶液。取不同浓度对照品溶液，按2.2.1项下方法测定，以盐酸特比萘芬吸收峰面积为纵坐标(y)，进样浓度(x，mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，y=2.652×107x- 2.418×104，r=0.9998)表明盐酸特比萘芬在0.0201～0.4026mg/mL的浓度范围内线性关系良好。

2.2.5 重复性考察 按照2.2.3项下方法，配制成浓度为0.100mg/mL供试品溶液，6份，按2.2.1项下方法测定，样品中盐酸特比萘芬平均含量为0.095mg/mL，RSD=1.18%。

2.2.6 精密度考察 按照2.2.2项下的方法，配制浓度为0.098 mg/mL的对照品溶液，按2.2.1项下方法测定，日内重复进样6次，计算峰面积的RSD=0.13%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性考察 按照2.2.3项下的方法，配制成浓度为0.100 mg/mL供试品溶液，按2.2.1项下方法测定，样品中盐酸特比萘芬平均含量为0.095 mg/mL，RSD=1.18%。

2.2.8 加样回收率考察 按照2.2.2项下方法，配制0.25 mg/mL的盐酸特比萘芬对照品溶液，从中精密吸取10 mL共6份，分别置50 mL量瓶中，再取盐酸特比萘芬样品6份，每份约0.015 g，精密称定，分别置上述量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，按2.2.1项下方法测定，回收率计算结果见表3。

2.2.9 色谱图 盐酸特比萘芬阴性对照溶液(A)、对照品溶液(B)及样品处理液(C)的色谱图见图1，盐酸特比萘芬的保留时间为12.4 min左右，理论塔板数为13081。阴性对照品为按照盐酸特比萘芬片剂处方，不添加盐酸特比萘芬药物而制备。

A:盐酸特比萘芬阴性对照溶液; B:盐酸特比萘芬对照品溶液; C:盐酸特比萘芬样品处理液;1.盐酸特比萘芬峰图1 盐酸特比萘芬HPLC色谱图

2.2.10 样品测定 三批样品，每批样品取10片，按2.2.3项下制备盐酸特比萘芬供试品溶液，按2.2.1项下方法测定，计算样品相当于标示量的百分含量及SD值、含量均匀度。三批样品的含量分别是99.17%、99.70%、101.24%；含量均匀度(计算A+1.80S)分别为2.65、4.00、4.60，均符合中国兽药典的规定。

3 讨论与小结

根据压片成型性与成本的考虑，试验初步筛选处方3、处方6、处方7进行重量差异和崩解时限检查，均符合中国兽药典规定。结果可知，比格犬对处方3最为偏好，证明纯天然鸡粉的矫味效果明显优于鸡粉香精和味精。因此，筛选出最终处方为处方3，即5%纯天然鸡粉。通过对三批片剂的含量测定，盐酸特比萘芬的含量符合要求，含量均匀。

在HPLC色谱图中，盐酸特比萘芬能够很好的分离，阴性对照无干扰，辅料对含量的测定无干扰。

犬类具有高度发达的嗅觉，而味觉相对较弱。与人用药矫味剂的研究[9]相比，兽用矫味剂不仅要考虑口感问题，应该更着重研究气味对犬类服药顺应性的影响。因此本试验在筛选矫味剂时，通过比格犬试验，更简单直观的筛选出犬类更为偏爱的矫味剂并确定了合适的用量, 为兽药矫味剂的应用与选择方面提供一定的参考价值。此外，纯天然鸡粉具有营养性和便利性等特点，在市场上已经被广泛应用和认可，发展前景良好[10]。纯天然鸡粉作为兽药片剂的矫味剂较为安全可靠，同时研究表明，所选矫味剂几乎不影响盐酸特比萘芬片剂的质量检查，因此矫味后的片剂既提高了犬类的服药顺应性又保证了疗效。

[1] 吴云飞.盐酸特比萘芬的安全性和抗真菌药物的敏感性及临床疗效试验[D].南京农业大学,2012.

[2] 宫凯敏,潘旭,刘军.消炎止带合剂矫味工艺的研究[J].内蒙古中医药,2014,(5):61.

[3] 吴飞,王优杰,张继全,等.康儿灵颗粒的矫味研究[J].中国新药杂志,2014,06:701-705.

[4] F.吉姆伯托,L.佩罗特.可口的口服兽药组合物[P].法国：CN104519868A,2015-04-15.

[5] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2010版(一部)[S].北京：中国农业出版社,附录111.

[6] 金录胜.复方伊维菌素片含量测定方法的探讨.中国兽药杂志[J].2003,37(12): 30-31,27.

[7] 寇婉青,俞娟,开伟华.高效液相色谱法测定盐酸特比萘芬乳膏含量[J].安徽中医学院学报,2009,03:54-55.

[8] 李晓波,范薇,李迎杰.HPLC法测定盐酸特比萘芬乳膏的含量[J].中国药师,2010,07:993-995.

[9] 唐建华.新型矫味剂在药物口服制剂中的应用[J].中国药业,2007,18:59-60.

[10]吴广泉,杨巧萍,王颖.鸡精(粉)的现状及发展趋势[J].农产品加工(学刊),2010,08:89-91.

(编辑：陈希)

Taste-modifying and Determined the Content of Hydrochloride Terbinafine Tablets

YANG Liu, DONG Bo-yu,BAI Jie,LI Peng-yue,ZHAO Meng-di, TAN Ning , LU Yang*,DU Shou-ying*

(SchoolofChinesePharmacyBeijingUniversityofTCM,Beijing100102，China)

To study veterinary hydrochloride terbinafine tablets flavoring process for dogs and determined the content of hydrochloride terbinafine.We chose three prescriptions with flavor agent by tablet moldability as an index included 5% natural chicken powder,3% chicken essence and 5% monosodium glutamate of description dosages .Then we observed the weight variation and disintegration time in comformity with the rules.Finally, 5% natrual chicken power is the best prescription by the compliance of beagle dogs.We determined the content of tablets by HPLC.Hydrochloride terbinafine concentration in the range of 0.0201 to 0.4026 mg/mL has a linear relationship (y= 2.652×107x- 2.418×104，r=0.9998),average recovery (n=6)97.97%(RSD=0.94).We prepared three batches of samples to test in some aspects.The content of hydrochloride terbinafine is between 99.17% and 101.24%,the content uniformity is A+1.8S<15.Therefore the process of flavor test was proved to be feasible and stable .The method is simple and accurate for quatification ,and can be used for the quality control.Natural chicken powder could improve the taste of dogs while hardly interfering the quality test.

tablets for dogs;flavor agent; hydrochloride terbinafine; content determination

北京市科技新星计划(No.xx2015A048)

杨柳,硕士研究生，从事中药制剂新剂型与新技术方面研究。

陆洋,E-mail:landocean28@163.com;杜守颖，E-mail:dushouying@263.net

2015-08-28

A

1002-1280 (2015) 11-0045-04

S855.4