李见春，张文静，朱 娜，张红敏，王 秀，张 劲（蚌埠医学院药学系，安徽蚌埠 233030）

富马酸喹硫平（Quetiapine fumarate，QF）是一种新的非经典抗精神疾病药，该药安全有效，作用于5-羟色胺2受体（5-HT2）、D1、D2及D4等多种受体[1]，不但对精神分裂症的阳性症状有效，对阴性症状也同样有效[2]。目前QF已成为精神分裂症与双向情感障碍治疗的一线用药[3-4]。由于QF市售产品多为片剂，口服后不仅会产生一系列不良反应，如头晕、嗜睡、直立性低血压、心悸、口干、食欲不振和便秘等，还可能由于首关消除的影响，降低药物的生物利用度。为避免口服后的相关不良反应，本研究选择了鼻腔给药。

固体脂质纳米粒（Solid lipid nanoparticle，SLN）原位凝胶作为鼻黏膜给药的载体[5-7]，可使药物绕过血脑屏障直接进入脑内，避免了口服给药产生的首关效应及减少外周的不良反应，并且增加其在鼻黏膜上的黏附，从而延长吸收时间以及减小用药剂量。本研究利用三元相图的绘制筛选SLN处方，继而采用星点设计-效应面法优化温度敏感型原位凝胶处方，拟为QF治疗精神疾病开发出一条新的治疗途径。

1 材料

1.1 仪器

LC-15AC型二元高压梯度高效液相色谱仪（日本岛津公司）；JN-02HC型高压均质机（广州聚能生物科技有限公司）；Nano-ZS90型粒度电位仪[马尔文仪器（中国）有限仪器]；AllegraTMX-22R型低温离心机（美国贝克曼库尔特公司）；JEM-2100型高分辨透射电子显微镜（日本电子公司）。

1.2 药品与试剂

QF原料药（武汉大华伟业医药化工有限公司，批号：131228FM，纯度：99.4%）；单硬脂酸甘油酯（广东汕头市西陇化工厂）；油酸山梨坦（司盘80，无锡市亚盛化工有限公司）；正丁醇（天津市大茂化学试剂厂）；泊洛沙姆407（P407）、P188（上海源叶生物科技有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯，三乙胺、冰醋酸等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 SLN处方优化

参考微乳法[8]通过三元相图优化SLN处方。以加热融解的单硬脂酸甘油酯为油相，司盘80为乳化剂，正丁醇为助乳化剂，纯化水为水相，按不同比例混合制备纳米乳。通过改变司盘80/正丁醇的配比（Km）和油相/混合乳化剂的配比绘制不同Km值下的三元相图，选择适宜的纳米乳处方。结果显示，不同Km值下均有微乳形成，当Km为1 ∶9时，微乳形成的区域最大。故从Km为1 ∶9相图中，选取3个较好的处方制备后，使用均质机将初乳进行粉碎，在压力为1 200 bar条件下反复循环，低温冷却得SLN混悬液。分别通过粒度电位仪考察SLN的粒径分布，进一步优化SLN的处方。同时采用染色法[9]将制备好的微乳平均分成两份，一份加入油溶性的苏丹红染料，一份加入水溶性的亚甲基蓝染料，观察形态，结果见表1。

表1 不同处方所制SLN的形态分析与验证结果Tab 1 Morphological analysis and verification results of SLN with different formulations

由表1可见，粒径分布情况表明处方二所制SLN粒径最小且分布均匀，染色后观察形态结果为W/O型。按处方二精密称取，按上述制备方法制得空白纳米粒的初乳，并将制得的初乳加入到均质机中，60 ℃条件下，调节调压阀，进行粉碎，最终得到符合条件的空白纳米乳，立即放入冰浴迅速冷却呈半固态即得空白SLN。

2.2 QF-SLN的制备

按“2.1”项下处方二精密称取单硬脂酸甘油酯，水浴融化后加入司盘80与正丁醇溶液，加入精密称取的QF 1 g，再加入水，轻度搅拌30 s，即可形成澄清透明的W/O型微乳。使用均质机将初乳进行粉碎，在温度为60 ℃、压力为1 200 bar的条件下反复循环，立即冰浴迅速冷却即得QF-SLN混悬液。

2.3 空白原位凝胶的制备

采用冷溶法[5]制备原位凝胶。精密称取一定量的P407和P188至适量的纯化水中，放入4 ℃冰箱保存24 h以上，直至得到澄清、无团块、分散均匀的溶液即得空白原位凝胶。

2.4 胶凝温度的测定

取4 ℃原位凝胶至玻璃试管，将温度计插入凝胶液面下，试管放入恒温水浴锅中平衡10 min，以0.5 ℃/min的升温速率缓慢升高水浴锅温度，每5 s倾斜试管45°，直到凝胶不再流动时即为胶凝温度[10]。每个样品平行测定3次取平均值。

2.5 P188和P407对胶凝温度的影响

将不同量的P407和P188加入到适量水中，根据“2.3”项下方法制成不同浓度的总质量为10 g的溶液，根据“2.4”项下方法测定其相变温度。结果显示，随着P188加入量的增加，相变温度逐渐上升；随着P407加入量的增加，相变温度逐渐降低，详见图1。

2.6 星点设计-效应面法的试验设计

根据预试验结果，确定对凝胶温度有显著影响的P407的质量分数（X1，%）和P188的质量（X2，%）为因素，各因素的极值范围为X120%～26%，X10～10%。根据星点设计-效应面法[11]制备10 g原位凝胶。因素与水平见表2，结果见表3。

图1 不同量的P407与P188对胶凝温度的影响Fig 1 Effects of P407 and P188 with different contents on the gelling temperature

表2 因素与水平Tab 2 Factors and levels

表3 星点设计试验结果Tab 3 Testing results of central composite test

模型拟合采用Design expert软件进行统计分析。以胶凝温度（T）为指标对各因素进行二项式回归，方程如下：由二次多项式的拟合优度R2及置信度P可知方程T的拟合效果良好。结合各因素的取值范围，经Design expert软件优化后处方为：P407 2.10 g，P188 0.56 g。预测T为33.39 ℃，对其进行验证试验。结果显示，实测T为（33.4±0.32）℃，表明此处方满足鼻腔用药要求（T为33 ℃左右），且实测T与预测T偏差＜5%。因此选择此处方为最优处方：P407 21%，P188 5.6%，纯化水73.4%。以最优处方按“2.2”项下方法制得适用于鼻腔给药的原位凝胶。

2.7 QF-SLN原位凝胶的制备

取空白原位凝胶加入QF-SLN，搅拌至完全溶解，即得QF-SLN原位凝胶。

2.8 QF-SLN原位凝胶的理化性质表征

2.8.1 QF-SLN原位凝胶的粒径分布 取适量优化后处方制备的QF-SLN原位凝胶，稀释20倍后放入粒度电位仪中测定。结果，其平均粒径为（136.3±6.4）nm。粒径分布见图2。

2.8.2 形态考察 取QF-SLN混悬液和QF-SLN原位凝胶加纯化水稀释，取适量滴加在覆盖碳膜的铜网上，染色，用透射电子显微镜观察其形态。结果显示，QF-SLN和QF-SLN原位凝胶均为类球形粒子，外观形态圆整。透射电镜图见图3。

图2 QF-SLN原位凝胶的粒径分布情况Fig 2 Particle size distribution of QF-SLN in situ gel

图3 透射电镜图Fig 3 Diagram of TEM

2.8.3 包封率测定 取QF-SLN混悬液40 μl于超滤离心管中，下层加入4 ml甲醇，以离心半径6.3 cm、4 000 r/min离心30 min。摇匀后，精密吸取该上清液，按文献[12]色谱条件进行测定，记录峰面积，代入回归方程，计算游离药物浓度后，根据公式计算包封率[13]。包封率＝[（m总－m测）/m总]×100%，其中：m测为上清液中测得的药物量，m总为加入的药物量。按最优处方制备3批QF-SLN原位凝胶，测得其包封率分别为97.22%、97.44%、98.14%，平均包封率为（97.60±0.48）%。

2.8.4 稳定性初步考察 将制得的3批QF-SLN原位凝胶样品放置于4 ℃冰箱内，分别于0、5、10、30 d取出样品进行粒径及含量的考察。结果显示，QF-SLN原位凝胶在30 d内，粒径略有增加，含量略为降低，稳定性能良好，结果见表4。

表4 稳定性初步考察结果（n＝3）Tab 4 Testing results of stability test（n＝3）

3 讨论

用于制备SLN的固体脂质材料一般包括甘油三酯、部分甘油酯、脂肪酸、类固醇以及某些酯类。余克富等[5]通过对布洛芬SLN原位凝胶的研究，发现单硬脂酸甘油酯制得的体系更澄清，因此选择单硬脂酸甘油酯作为本试验的脂质材料制备SLN。所得纳米粒均一透明，能形成稳定的体系。使用单硬脂酸甘油酯作为油相时，由于自身难溶，需先将其加热融解后再加入乳化剂与助乳化剂，另外滴加水相时，需要先加热至与油相温度相同后再加入，以避免因温度差异所造成的乳化不完全现象。

本试验参考文献[14]选用P407与P188这种新型的高分子材料来制备温度敏感型原位凝胶，具有热敏可逆性凝胶转变特征，并且无毒无刺激性，可用于鼻用眼用制剂中，是现阶段研究最成熟的温度敏感原位凝胶的高分子材料。处方筛选时采用了星点设计-效应面优化法，该方法试验次数少、精确度高、应用方便[15]。通过应用这种方法进行原位凝胶处方的优化，结果也表明拟合的数学模型在因素优化过程中是可行的。

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