朱翠玲,马洪兵*,孟宪鹏,王振,姜淑霞**

1.山东农业大学植物保护学院,山东泰安2710182.山东省泰安市泰山风景名胜管理委员会,山东泰安271000



中国伞菌属一新记录种

朱翠玲1,马洪兵1*,孟宪鹏2,王振1,姜淑霞1**

1.山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018
2.山东省泰安市泰山风景名胜管理委员会,山东泰安271000

摘要:本文报道了伞菌属中国一新记录种Agaricus flocculosipes，标本采自山东省徂徕山国家森林公园。将采集标本进行详细的形态描述及ITS序列分析，并与伞菌属相近种进行比较。根据其菌柄表面直立的丛毛状鳞片这一特点及其拉丁学名含义命中文名为鳞柄伞。

关键词:Agaricus flocculosipes;形态学; ITS序列;分类

伞菌属Agaricus由林奈1753年建立，目前已知约有200个种[1,2]。其种类分布广泛，以温带地区最常见，多为散生或群生[1,3]。该属主要特征为孢子印紫褐色，菌褶离生，有菌环，菌盖与菌柄易分离；菌丝通常无锁状联合[4-6]，本属有许多重要的食药用菌，如广泛栽培的双孢菇A. bisporus、巴西蘑菇A. brasiliensis等[7,8]。

在山东省泰山区系进行大型真菌资源调查过程中，于2012年8月、2013年9月分别在徂徕山国家森林公园光华寺景区的北瓜场、里峪两地采集到一伞菌属大型真菌，采用传统分类学及分子生物学研究方法鉴定标本，确定该标本为赵瑞琳在泰国发现并于2012年发表的新种—Agaricus flocculosipes[9]。目前国内并无该种的相关报道，为中国新记录种。根据菌柄有直立丛毛状鳞片这一特征及其拉丁学名含义暂定中文名为鳞柄伞。

1　材料与方法

1.1供试标本

本研究标本于2012年8月、2013年9月采自山东省泰安市徂徕山国家森林公园。标本存放于山东农业大学省农业微生物重点实验室A413室，标本编号12CLS43、13CLS62、13CLS63、13CLJW2、13CLJW5。

1.2研究方法

1.2.1标本采集在野外对标本的生态环境及外部形态进行现场观察，填写采集记录表，详细记录采集地点的海拔、植被、生长基物等生境及菌体形态特征，同时进行拍照。将标本清理干净，编号装袋后带回实验室。

1.2.2形态特征观察将标本带回实验室进行详细形态描述。用变色硅胶在干燥器内吸湿制成干制标本。用5% KOH溶液复原组织结构，显微镜下观察其显微结构并记录拍照。随机选取100个成熟的担孢子，观察测量。担孢子的大小：测量其侧面观的长度和宽度，小梗的长度不计入内。担孢子的长或宽以(a~)b~c(~d)表示，90%的测量数值为b~c, a、b分别为测量数据中的最小值和最大值；担孢子的长宽比用Q表示。梅尔泽试剂（Melzer's reagent）染色，判断其孢子壁是否为淀粉质[10]。

1.2.3 ITS序列获得和系统发育分析用CTAB法提取子实体总DNA。内转录间隔区（ITS1和ITS2）、5.8 S及部分18 S和28 S区域用ITS1/ITS4引物进行扩增。PCR扩增在MycyclerTM热循环仪上进行。反应程序如下：94℃预变性3 min，94℃变性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸1 min、进行30个循环，72℃延伸10 min，4℃保存。取5 μL PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测后测序，将得到的碱基序列进行同源性分析，从GenBank下载同源近似表中相近种序列用于系统发育分析，以伞菌科青褶伞属的大青褶伞Chlorophyllum molybdites作为外群，采用MEGA5.05软件建立系统发育树。

2　结果与分析

2.1生境

在山东泰安8~9月份生于覆盖枯叶层的板栗林地中，群生，采集地点海拔250~380 m，采集时日平均气温为28~31℃，气候较干燥，昼夜温差大。

2.2形态学特征

子实体大型，成熟个体菌盖直径100~150 mm，菌盖幼时半球形，呈浅黄至棕褐色；成熟时平展，颜色暗黄至灰白色；老熟个体菌盖中间呈黄褐色，边缘灰黄色至灰褐色。菌盖表面有细鳞片，由于气候干燥，成熟时部分个体菌盖从中间开裂（图1-A），老熟后盖表皮出现锈色斑块（图1-B）。菌肉白色，无伤变现象。菌褶离生，幼时白色，后逐渐变为赭红直至黑褐色。菌褶密，不等长，易于菌肉剥离，宽5~8 mm。子实体幼时菌褶全部被内菌幕包被，初成熟时内菌幕不规则破裂呈薄膜状悬挂于菌盖边缘或菌柄上，后逐渐脱落（图1-B、图1-D）。菌环中到大型，位于菌柄上部，单层膜质，白色，易脱落。菌柄100~160 mm×10~15 mm（上部）×15~30 mm（基部），中空棒状，下端膨大，灰白至微黄色，菌环以上光滑，菌环以下部位表面有白色鳞片（图1-C）。无菌托。

图1　子实体宏观形态图Fig.1 Axternal morphylogy of the specimen

担孢子长椭圆形，(4.41~)4.79~7.64(~8.19)μm×(2.64~)2.88~4.57(~4.94)μm(平均6.25×3.75 μm，Q=1.661)，脐部突出，表面光滑，褐色，壁厚(图2-G)。梅尔泽试剂不能使孢子壁着色，孢子壁非淀粉质。担子棒状，无隔，有四个小梗(图2-E、图2-F)，未观察到囊状体。菌髓规则平行排列(图2-H)。

图2　标本微观形态图Fig.2 Micro-morphylogy of the specimen

2.3ITS序列获得和系统发育分析

用ITS1和ITS4引物对标本的ITS区进行PCR扩增获得长度710~730 bp的序列，将其与Genbank数据库中的核苷酸序列BLAST比较，结果显示与Agaricus floculosipes序列（Genbank登录号：JN662351等）同源性为99%，相差碱基数最大为6个，最小仅1个。

图3　基于ITS序列的系统发育进化树Fig.3 Bootstrap tree based on ITS sequences

删除相关序列两端引物及其上下游序列后建树，软件生成的系统树如图3所示。伞菌属Arvensis组的种类A. flocculosipes、A.augustus、A.arvensis、A.subrufescens在系统树上优先聚类。Arvensis组中，所采标本（GenBank登录号分别为KJ162113、KJ162116、KJ162117、KJ162114、KJ162115）与A. floculosipes模式标本序列（GenBank登录号JN662351）自展支持率为99%，外群菌株及较远的亲缘关系处在系统树的外围，因此确定所采标本为A. floculosipes。

系统树上，2013年采自里峪的标本序列（GenBank登录号为KJ162114、KJ162115和KJ162116）自展支持率为94%，分离自编号13CLS63号的标本菌丝序列（GenBank登录号KJ162113）与模式标本序列自展支持率为28%，这表现出A. flocculosipes基因序列有区域性差异及种内多态性的特点。

3　讨论

本研究标本与模式标本在子实体的颜色、菌盖和菌柄上的鳞片、菌环形态及老熟盖表有红色斑点等主要特征基本一致，且子实体均发生在高温干燥的气候条件下。差异之处:徂徕山采集到的标本菌盖直径100~150 mm，较模式标本略小，且没有观察到褶缘囊状体；模式标本菌盖直径110~180 mm，褶缘囊状体椭圆形至球形或者棒状，单个或链状，有时缺无。分布的地区和海拔也有一定的差异，本文报道种主要分布在N35°E116°的温带地区，海拔为250~380 m；而模式标本发现于N18-20° E98-99°的亚热带地区：泰国及马约里岛，海拔范围为900~1700 m。

在采集时有两个伞菌属近似种易混淆：大紫蘑菇A.augustus Fr.、褐鳞蘑菇A. subrufescens Peck，前者较鳞柄伞子实体略大，菌盖黄色，盖表有纤毛组成的紫褐色鳞片，担孢子略大，为（7~9）×（5.5~6.5）μm[12]；褐鳞蘑菇较鳞柄伞子实体个体相对较小，菌盖表面底色米黄，覆盖有丛毛状褐色鳞片，孢子椭圆形，(4.5~5.5)×(3~3.5)μm[13]。

本研究种其菌盖较大，菌肉清香，经两年野外观察其子实体均发生在高温干燥气候条件下。采用最大耐受法对其进行了急性毒力测定[14,15]，结果表明，该种对昆明小白鼠无急性毒性。由于伞菌属真菌在食药用方面占有重要地位，因此推断该种类具有一定的开发价值。

参考文献

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**通讯作者:Author for correspondence. E-mail:jsx6206@163.com

ANew Record of Agaricus in China

ZHUCui-ling1,MAHong-bing1*,MENGXian-peng2,WANGZhen1,JIANGShu-xia1**

1. College of Plant Protection/Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, China
2. Management Committee of Mountain Tai Scenic Zone, Tai’an 271000, China

Abstract:A species of the genus Agaricus flocculosipes has been recorded for the first time in China and the specimens were collected from Mount Culai National Forest Park in Shandong Province. We described the morphology of Agaricus flocculosipes and ITS sequence analysis comprehensively, compared with those of similar taxa. We named it Linbingsan because of its distinguishing erect floccose squamules on the surface of the stipe and the Chinese translation of its latin name.

Keywords:Agaricus flocculosipes; morphology; ITS sequence; taxonomy

作者简介:朱翠玲(1988-),女,硕士研究生,研究方向:大型真菌分类. E-mail:zhucuiling1988@163.com.*并列第一作者

基金项目:山东省自然科学基金(ZR2011CM033)

收稿日期:2014-02-23修回日期: 2014-04-11

文章编号:1000-2324(2015)04-0533-04

文献标识码:A

中图法分类号:Q-9