包常华，霍 万

（1.内蒙古民族大学医学院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学病原生物学与免疫学研究所，内蒙古 通辽 028000）

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤，且年新增患者数达50余万例，其中80%新增病例发生在发展中国家［1］。人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）与宫颈癌的发生密切相关，已知的HPV基因型达100余种，多数感染者呈现短暂并可自行消失的感染［2］，但少数型别尤其是高危型别的感染将导致癌前病变或宫颈癌，是宫颈癌发生的主要病因［3］，因此，HPV感染的基因型检测已成为临床筛查和预防宫颈癌的重要手段之一，本研究通过检测科尔沁地区502例妇科门诊女性感染的HPV基因型，以期对我区宣传预防宫颈癌的发生提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为502例来我研究所检验室进行HPV分型检测的女性。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

DNA提取试剂盒、HPV21导流杂交试剂盒、核酸导流快速杂交仪（凯普生物技术有限公司）、高速离心机、PCR仪、水浴箱。

1.2.2 采集标本

要求检测对象于检测前48h内不要做阴道冲洗或阴道内使用药物，月经正常的妇女，在月经来潮后10～18d为最佳检测时间，检测人员以专用采样刷采集宫颈脱落细胞，标本于4℃保存，3d内进行检测。

1.2.3 提取DNA

吸取500μl标本于离心管中，14000rpm离心5min，弃上清液；加溶液Ⅰ400μl于沉淀中，沸水浴15min；再加入 400μl溶液Ⅱ，14000rpm 离心 5min，弃上清液；沉淀即为DNA，60μl无菌水溶解DNA，备用。

1.2.4 目的片段扩增

预装24μl反应液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液进行扩增，PCR反应条件为95℃9min，40个循环（94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s），72℃ 5min。

1.2.5 导流杂交

450μl杂交液混合20μlPCR扩增产物浸润杂交膜，45℃杂交10min，开泵去除液体；……