包常华，霍 万

（1.内蒙古民族大学医学院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学病原生物学与免疫学研究所，内蒙古 通辽 028000）

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤，且年新增患者数达50余万例，其中80%新增病例发生在发展中国家［1］。人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）与宫颈癌的发生密切相关，已知的HPV基因型达100余种，多数感染者呈现短暂并可自行消失的感染［2］，但少数型别尤其是高危型别的感染将导致癌前病变或宫颈癌，是宫颈癌发生的主要病因［3］，因此，HPV感染的基因型检测已成为临床筛查和预防宫颈癌的重要手段之一，本研究通过检测科尔沁地区502例妇科门诊女性感染的HPV基因型，以期对我区宣传预防宫颈癌的发生提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为502例来我研究所检验室进行HPV分型检测的女性。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

DNA提取试剂盒、HPV21导流杂交试剂盒、核酸导流快速杂交仪（凯普生物技术有限公司）、高速离心机、PCR仪、水浴箱。

1.2.2 采集标本

要求检测对象于检测前48h内不要做阴道冲洗或阴道内使用药物，月经正常的妇女，在月经来潮后10～18d为最佳检测时间，检测人员以专用采样刷采集宫颈脱落细胞，标本于4℃保存，3d内进行检测。

1.2.3 提取DNA

吸取500μl标本于离心管中，14000rpm离心5min，弃上清液；加溶液Ⅰ400μl于沉淀中，沸水浴15min；再加入 400μl溶液Ⅱ，14000rpm 离心 5min，弃上清液；沉淀即为DNA，60μl无菌水溶解DNA，备用。

1.2.4 目的片段扩增

预装24μl反应液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液进行扩增，PCR反应条件为95℃9min，40个循环（94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s），72℃ 5min。

1.2.5 导流杂交

450μl杂交液混合20μlPCR扩增产物浸润杂交膜，45℃杂交10min，开泵去除液体；加入封阻液500μl，25℃封阻 5min，开泵去除液体；加入 500μl显色液，36℃条件下显色5min后，开泵去除液体，观察并记录结果。

2 结果

2.1 HPV感染率

502例检测标本中病毒感染阳性结果117例，总阳性率为23.3%（117/502）。病毒感染阳性患者中单一亚型感染率为66.67%（78/117）。多种亚型感染率为33.33%（39/117），其中双亚型感染率为 25.64%（30/117），三亚型感染率7.69%（9/117），结果如图1所示。

图1 HPV单亚型与多亚型感染率统计图Fig.1 The infection rate of HPV single and multiple genotypes

2.2 HPV基因型分布

共检测到18种HPV亚型，其中高危型别14种，所占比例为83.24%；低危型别4种，所占比例为16.76%。低危型别中的43、44型和高危型别中的45型未被检出。感染者中以HPV16、31、6三种亚型多见，所占比例分别为20.95%、12.57%、8.38%，具体统计结果见表1。

表1 科尔沁地区女性HPV感染亚型统计Tab.1 Distribution of HPV genotype of female patients in Horqin region

3 讨论

宫颈癌是严重危害女性的一种恶性疾病，HPV的特定型别与宫颈癌的发生存在紧密联系［4］，采用基因芯片和导流杂交技术，能及时准确地进行病毒感染的检测与基因型诊断［5］。本研究结果表明，502例样本中共检出HPV感染117例，总感染率为23.3%，低于台州（35.08%）、北京（57.10%）、阳泉（35.20%）及鄂州（30.93%）等地区［6］。本地区检测出HPV感染的亚型处于前几位的分别为 16、31、6、39、18，与上述地区相比也存在着区域性的差异：如台州常见亚型为16、11、52，北京常见亚型为 16、58、52，鄂州常见亚型为 16、58、53。综上结果表明，本地区HPV亚型即与其他地区的常见感染亚型基本类似，又存在着区域性差异。HPV是宫颈癌的重要致病因素［7］，控制HPV病毒的感染有利于宫颈癌的预防［8］，因此针对女性开展定期的HPV检测是控制和预防宫颈癌的重要手段。通过本实验了解科尔沁地区女性HPV的感染及基因型分布现状，为在科尔沁地区开展预防宫颈癌的宣传提供理论依据。

［1］ 邵军辉，杨琳，龚逞英.新余地区2273例女性生殖道人乳头瘤病毒感染状况分析［J］.甘南医学院学报，2014，34（4）：579-581.

［2］ Trottier H, Franco E. The epidemiology of genital human papillomavirus infection［J］. Vaccine，2006，24（Suppl）1：1-15.

［3］ Bosch F X, Lorincz A, Munoz N, et al. The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer［J］. Jclin Pathol，2002，55（4）：244-265

［4］ Michael, Matthew, Singh M, et al. IR microspectroscopy：potentinal application in cervical cancer screening［J］.Cancer lett，2007，246（1-2）：1-11..

［5］ Kin C J, Jeong J K, Park M, et al. HPV oligonuckeotide microarray based detection of HPV genotypes in cervical neoplastic lesions［J］. Gynecol Oncol，2003，89（2）：210-217.

［6］ 包常华，张东丽，刘鑫，等.妇科人乳头瘤病毒感染基因型分析［J］.激光生物学报，2014，23（1）：55-58.

［7］Steben M, Duarte-France E. Human papillomavirus infection：epidemiology and pathophysiology［J］. Gynecol oncol，2007，（107）：2-5.

［8］ 冯阳春，张园，黄艳春.高危型人类乳头状瘤病毒负荷量对宫颈上皮细胞DNA倍体的影响［J］.中国病原生物学杂志，2012，7（1）：5-7.