于琬姝，范红艳 (吉林医药学院:．202级影像学本科班，2．药理教研室，吉林吉林 3203)

吐温80对蟾蜍离体心脏收缩活动的影响

于琬姝1，范红艳2*(吉林医药学院:1．2012级影像学本科班，2．药理教研室，吉林吉林 132013)

目的 探讨不同浓度的吐温80对蟾蜍离体心肌收缩活动的影响，为吐温80作为临床注射剂的常用增溶剂提供安全性指导。方法 用不同浓度(0．001% ～1%)的吐温80任氏液溶液对蟾蜍离体心脏进行灌流，观察不同浓度吐温80对心肌收缩活动的影响。结果 吐温80在浓度为0．001%(V/V)对心肌收缩力无明显抑制作用(P＞0．05);浓度为0．01% ～1%范围内对心肌收缩呈明显抑制作用(P＜0．05，P＜0．01，P＜0．001)，心肌收缩力降低幅度分别为13．86%，19．23%，24．63%，呈现浓度效应依赖关系(r=-0．905)。结论低于0．001%浓度吐温80对心肌无明显作用抑制，浓度超过0．01%的吐温80溶液对心肌收缩呈明显的抑制作用。

吐温80;蛙心灌流;心肌收缩力;蟾蜍

吐温80又名聚山梨酯80，化学名为聚氧乙烯-20-山梨醇酐单油酸酯，属多元醇型非离子表面活性剂，由于具有较长的碳链结构，对亲脂性药物有较好的助溶作用，故常被用作增溶剂、乳化剂等，为中西药注射剂的常用辅料之一［1-2］。近年来临床上以吐温80为辅料的制剂静脉注射引发类过敏反应事件已引起医药界的广泛重视，如鱼腥草注射液和维生素K1注射液等［3-5］。因为吐温80为一种聚合物，稳定性不佳，在一定条件下可发生降解［6-7］。高纯度的吐温80呈无色透明，而大多数吐温80含有一定的杂质或降解产物，外观呈淡黄色，这些杂质或降解产物可能是导致吐温80出现不良反应的主要原因［8-9］。各国药典对吐温80质量控制的标准不尽相同，国内外不同厂家生产的产品质量差别很大，可以直接影响其安全性［10-11］。吐温80的不良反应与其用量间存在明显的量效关系［12-13］，故选择优质的吐温80并限定其使用浓度，是保证注射液安全性的关键。吐温80在科研实验中也经常作为药物的助溶剂，本研究目的在于探讨吐温80对动物心肌收缩力的影响。利用变温动物离体心脏为实验对象进行的Straub's法和八木-Hartung法蛙心插管能够直观地观察整体心脏收缩，具有操作简单、不需恒温装置和供氧设备，心脏活动不受神经体液调节等优点。故本实验以蟾蜍离体心脏为研究对象，观察吐温80对离体蛙心心肌收缩力的影响及其浓度与效应的关系。

1 材料与方法

1．1 实验材料

蟾蜍，雌雄兼用，体质量50～70 g，延边大学实验动物中心提供。

BL-420S生物机能实验系统，张力换能器(四川成都泰盟科技有限公司);吐温80(南京威尔化工有限公司，批号090813-3)，临用前以任氏液配置成相应浓度备用;任氏液为标准配方(所需试剂为国产分析纯)。

1．2 离体蟾蜍心脏标本的制作

采用斯氏蛙心插管法［14］。取蟾蜍60只，毁脑毁髓，背位固定于蛙板上，打开胸腹腔，暴露心脏及相连的大血管。在主动脉干及左主动脉下分别穿1条丝线，并打虚结备用;在左主动脉根部剪1个V字型切口，将盛有任氏液的插管由切口向心脏内插入至动脉圆锥，再旋转插管尖端向心室方向，在心脏收缩瞬间插入左心室腔内。插管成功后，用新鲜任氏液冲洗插管3～5次，洗去心室内残留血液。用手术线分别结扎插管和左右主动脉，固定于插管侧钩上。剪断左右主动脉，提起心脏，结扎腔静脉，并剪断使心脏离体，向心管内加入1 mL任氏液，用试管夹将蛙心插管固定在万能支台上。在每次给药前从心管中准确抽出1 mL任氏液，再加入同等容量的含有不同浓度吐温80的灌流液，以便保持心脏前后负荷的一致性。

1．3 蟾蜍心脏收缩活动的记录

用连有张力换能器的蛙心夹于心室舒张期夹住心尖，用张力换能器连接离体蛙心与BL-420S系统，使收缩曲线的波动幅度局限在2．0 g左右。待心肌收缩曲线平稳后，记录心肌收缩幅度。准确抽出1 mL心管内的任氏液，重复灌注任氏液，稳定30 min，待心脏舒缩曲线平稳后记录心肌收缩力及心率，作为空白对照(自身对照)。用任氏液冲洗3～5次，1 mL/次，至心肌收缩曲线恢复，同上述方法，依次灌注给予0．001% ～1%的吐温80任氏液，分别记录上述观察指标［15］。

1．4 统计学处理

数据以均数±标准差表示，用SPSS 17．0统计软件进行单因素方差分析和 Bonferroni检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

用浓度范围为0．001% ～1%的吐温80灌注离体蛙心后，测得的蟾蜍心肌收缩力及其与基础值差值的百分比见表1，其中与基础值差值的百分比(%)=(处理后收缩幅度-空白对照收缩幅度)/空白对照收缩幅度×100。由表1可见，与空白对照组比较，浓度为0．001%的吐温80对蟾蜍心肌无明显抑制作用(P ＞0．05)，但是浓度为 0．01%，0．1%，1% 的吐温80对心肌收缩力均有明显抑制作用(P＜0．05，P＜0．01，P ＜0．001，见图1 及表 1，图 1 中 A-D 分别表示灌流液为任氏液及不同浓度的吐温80)。与空白对照组比较，吐温80在0．01% ～1%浓度范围内时可使心肌收缩幅度分别降低13．86%，19．23%和24．63%，随着剂量的增加而抑制程度增强，呈负相关(r=0．905，见图 2)。

表1 吐温80对蟾蜍离体心脏收缩功能影响(，n=12)

表1 吐温80对蟾蜍离体心脏收缩功能影响(，n=12)

与空白对照组比较，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01，＊＊＊P ＜0．001

组别 心肌收缩幅度g与基础值差值的百分比%2．05 ±0．05 -0．001%吐温80 组 2．11 ±0．14 2．97 0．01%吐温80 组 1．76 ±0．30* -13．86 0．1%吐温80组 1．66±0．23＊＊ -19．23 1%吐温80 组 1．54 ±0．32＊＊＊空白对照组-24．63

3 讨论

刘倩等研究发现，吐温80作为中药注射剂的辅料，在高于0．062 5%的浓度下即存在细胞毒性［16］。本实验结果亦表明，吐温80在浓度为0．001%(V/V)以下时对心肌收缩力无显著影响，提示科研实验或临床用药时血浆药物浓度低于0．001%时是相对安全的;而浓度高于0．01%的吐温80则对离体蛙心收缩力存在明显抑制作用，且存在浓度效应依赖性。提示临床注射剂使用吐温80作为助溶剂时浓度应尽量降低，确保血浆药物浓度低于0．01%，以最大幅度减少吐温80本身作为辅料的副作用，是保证注射液安全性的关键;科研实验中血浆药物浓度高于0．01%则必须设溶剂对照组，以排除吐温80作为溶剂本身对心肌的直接抑制作用。

图1 任氏液及不同浓度的吐温80对蟾蜍离体心脏收缩力的影响

图2 不同浓度的吐温80对蟾蜍离体心脏收缩力抑制作用的线性相关性

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Effects of tween 80 on m yocardial contractility of isolated hearts in toads

YUWanshu1，FAN Hongyan2*(1．Imageology Undergraduate Class of Grade 2012;2．The Departament of Pharmacology，Jilin Medical College，Jilin City，Jilin Province，132013，China)

Objective To investigate the effects of different concentrations of tween 80 on themyocardial contractility of isolated hearts in toads，and provide a guidance for tween 80 as a clinical solubilizer．Methods The different concentrations(0．001% ～1%)of tween 80 solution were employed to perfusion of isolated toad hearts，and the changes ofmyocardial contractility on toad hearts were observed and recorded．Results Compared with the normal control group，tween 80 at a concentration of 0．001%(V/V)had no significant inhibition on myocardial contractility(P ＞0．05)．And themyocardial contractility was significantly inhibited by the Tween 80 at the concentration of0．01%to 1%(P ＜0．05，P ＜0．01，P ＜0．001)，the reduction ofmyocardial contractility were 13．86%，19．23%or 24．63%，which appeared in a concentration dependentmanner(r=-0．905)．Conclusion Tween 80 less than 0．001%concentration has no significant inhibition on cardiac，and themyocardial contractility could be inhibited bymore than 0．01%tween 80 solution．

tween 80;heart perfusion;myocardial contractility;toad

R96

A

1673-2995(2015)04-0251-03

吉林省教育厅“十二五科技计划”项目资助课题(2012337)．

于琬姝(1994-)，女(汉族)，本科在读．

范红艳(1975-)，女(汉族)，副教授，硕士．

10.13845/j.cnki.issn1673-2995.2015.04.005

2014-11-12)