梁月琴，王崇静，王 珩，李仲昆

（昆明医科大学附属延安医院，云南 昆明 650051）

云南雀嘴茶对免疫功能低下小鼠的保护作用

梁月琴，王崇静，王 珩，李仲昆

（昆明医科大学附属延安医院，云南 昆明 650051）

目的研究雀嘴茶的免疫调节作用。方法取雄性ICR小鼠，制作环磷酰胺致免疫抑制小鼠模型，分别给予雀嘴茶及蒸馏水灌服，取血清。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠血清的白细胞介素-2（IL-2）、 -干扰素（IFN- ）的含量，用流式细胞仪测定小鼠血清 CD4，CD8，CD3的水平。用紫外法测定血清溶血素的含量。结果雀嘴茶能够提高小鼠血清中 CD4，CD8，CD3的百分比分别至（31．56±6．51）%，（11．47±3．63）%，（2．91±0．82）%，提高 IL-2及 IFN- 的含量分别至（562．74±43．82）pg／L和（1 035．40± 44．84）pg／L，提高溶血素的吸光度（OD）值至（1．380±0．159），与模型组相比，均有显著性差异(P＜0．05或0．01)。结论雀嘴茶具有提高小鼠免疫功能的作用。

雀嘴茶；小鼠；免疫功能

雀嘴茶 Vaccinium dunalianum W．是云南特有的茶叶品种，《中药大辞典》等典籍称其能活络散瘀、祛风除湿炎。近年来，有很多学者开始研究中药及其复方制剂在免疫调节中的作用[1]，并取得了令人瞩目的成就。但关于雀嘴茶的研究较少[2-3]，其对免疫功能影响的相关研究尚未见报道。本试验中通过流式法测定小鼠血清 T淋巴亚群 CD4，CD8，CD3的水平，酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠血清白细胞介素-2（IL-2）、γ-干扰素（IFN-γ）的含量，紫外分光光度法测定小鼠血清溶血素，观察雀嘴茶对免疫抑制小鼠的调节作用，旨在探讨雀嘴茶对小鼠免疫功能的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1．1 材料

试药：雀嘴茶由云南天秀植物科技有限公司在云南省楚雄州采集后，经中国科学院昆明植物研究所李锡文教授鉴定为正品，磨细制备成粉。注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为09080521）；ELISA试剂盒（IFN-γ，IL-2）购于晶美公司；流式试剂mouse CD4FITC，mouse CD8-PE，mouse CD3E PE-CY5，购于BD公司。5%鸡红细胞（CRBC）的制备，取新鲜鸡血，不断搅拌除掉纤维蛋白，用0．9%氯化钠注射液配制成5%CRBC混悬液备用。补体的制备，豚鼠4只，雌雄各半，氨基甲酸乙酯腹腔注射麻醉后，抽取心脏血，分离每只豚鼠的新鲜血清，混合后备用，临用时用0．9%氯化钠注射液稀释至1∶10。

动物：ICR雄性小鼠72只，购于昆明医科大学动物科，体重（20±2）g，动物试验许可证号为SCXK（滇）2005-0008。

仪器：Bio-RAD680型酶标仪；全自动流式仪（美国 BD公司）；UV-2401-PC型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）。

1．2 方法

小鼠血清 CD4，CD8，CD3，IFN-γ，IL-2影响试验[4]：取雄性ICR小鼠36只，随机均分为3组，A组为空白对照组，B组为环磷酰胺模型组，C组为雀嘴茶组。C组灌服雀嘴茶，共给药7 d，给药剂量为0．5 g／kg；B组、C组每天灌服蒸馏水0．3 mL；C组、B组于第 2天进行环磷酰胺腹腔注射，100 mg／kg。各组于第8天取血。取各组血清，按照IFN-γ及IL-2试剂盒说明书操作，用酶标仪测定小鼠血清中IFN-γ及 IL-2的含量；用流式仪测定肝素抗凝血的T细胞亚群数据。

小鼠血清溶血素影响试验[5]：取雄性ICR小鼠36只，随机均分为3组，A组为鸡红细胞模型组，B组为环磷酰胺组，C组为雀嘴茶组。试验开始后，A组、B组每天灌服蒸馏水0．3 mL；C组灌服药物，共给药7 d，剂量为0．5 g／kg。3组均于第1天腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0．4 mL，B组和C组于第2天腹腔注射环磷酰胺100 mg／kg。于给药后第8天，取小鼠血，加入1．5 mL离心管中，放置1 h，离心后取血清，用0．9%氯化钠注射液稀释200倍，取稀释血清2．0 mL，与10%补体血清1．0 mL及5%鸡红细胞混悬液1．0 mL混合，置37℃恒温箱中孵育30 min，然后在0℃冰箱中放置30 min终止反应，以3 000 r／min转速离心，取上清液，参照文献[6]，用紫外分光光度计在540 nm波长处测吸光度（OD）值。以不加血清的空白对照管上清液作对照比色。

2 结果

2．1 雀嘴茶对小鼠血清IFN- 及IL-2水平的影响

结果见表1。可见，雀嘴茶可升高环磷酰胺致免疫抑制小鼠的血清IFN-γ及IL-2的水平。

表1 雀嘴茶对小鼠血清IL-2及IFN- 水平的影响（，pg／L，n=12）

表1 雀嘴茶对小鼠血清IL-2及IFN- 水平的影响（，pg／L，n=12）

注：与B组比较， P＜0．05， P＜0．01。下表同。

组别A组B组C组IFN-1 033．50±36．20 939．04±91．74 1 035．40±44．84 IL-2 546．22±37．31 410．91±85．41 562．74±43．82

2．2 雀嘴茶对小鼠血清T细胞亚群水平的影响

结果见表2。流式细胞测定结果显示，B组和 C组的总 T淋巴细胞（CD3）百分比低于A组，说明环磷酰胺对小鼠免疫功能有损伤，B组的 T辅助细胞（CD4）百分比降低较明显；从 CD4／CD8分析，C组较 B组明显升高（P＜0．01），提示雀嘴茶可能通过提高CD4／CD8来改善小鼠细胞免疫功能。

表2 雀嘴茶对小鼠血清细胞亚群水平的影响（，n=12）

表2 雀嘴茶对小鼠血清细胞亚群水平的影响（，n=12）

组别A组B组C组CD4（%）29．30±6．14 22．85±6．72 31．56±6．51 CD8（%）14．60±3．68 17．63±5．96 11．47±3．63 CD4／CD82．06±0．46 1．51±0．55 2．91±0．82 CD3（%）63．91±14．84 37．40±9．77 50．98±10．57

2．3 雀嘴茶对小鼠血清溶血素水平的影响

结果见表3。可见，A组和B组相比有显著性差异(P＜0．01)，说明造模成功，小鼠腹腔注射鸡红细胞后，会引起溶血素含量升高；小鼠腹腔注射环磷酰胺后，会引起血清溶血素下降。给小鼠灌服雀嘴茶可升高小鼠血清溶血素含量，C组与B组相比有显著差异(P＜0．01)，提示雀嘴茶能增强小鼠的血清溶血素含量，提高小鼠机体特异性体液免疫功能。

表3 雀嘴茶对小鼠血清溶血素含量的影响（）

表3 雀嘴茶对小鼠血清溶血素含量的影响（）

组别A组B组C组动物只数12 12 12 OD值1．922±0．353 0．993±0．126 1．380±0．159

3 讨论

疾病的发生与免疫功能密切相关。在正常情况下，各种免疫细胞的相互调控处于平衡状态，如果这些平衡被打破，就会导致机体的免疫功能发生紊乱，使机体容易受到外界致病菌的入侵而发病[7]。因此，免疫功能的保护对预防和治疗疾病具有重要意义。

试验周期可为14 d，也可为7 d。经过验证，两种方法均能成功造模，且灌服药物后能体现差异，因此均采用7 d的试验周期。

血清中溶血素的水平被认为是反映体液免疫功能的重要指标[8]。本试验中用新鲜的鸡红细胞对小鼠进行免疫，从而使小鼠体内溶血素水平有所提高。取小鼠新鲜血清与新鲜鸡红细胞按一定比例混合，在补体（豚鼠血清）参与下发生溶血、释放血红蛋白，通过紫外法测定吸光度值，可反映出小鼠体内血红蛋白的变化，从而确定溶血素的含量变化。本试验结果显示，小鼠灌服雀嘴茶后，血清中溶血素吸光度值与环磷酰胺组相比有显著提高，表明雀嘴茶能促进小鼠的体液免疫功能。

体液免疫效应是由B细胞通过对抗原进行识别、活化、增殖，然后分化成浆细胞并分泌抗体来实现的。本试验中，雀嘴茶组小鼠的IL-2和IFN-γ水平显著高于模型组，说明雀嘴茶能提高小鼠的免疫功能[9]。

T细胞对免疫应答具有重要调节的功能，CD4+T细胞对病原体没有直接损伤作用，主要通过分泌细胞因子起作用[10-11]，如经抗原识别、活化、增殖合成和分泌大量的各种免疫细胞因子发挥作用。本试验结果显示，雀嘴茶组的总T淋巴细胞CD4、CD3百分比明显高于环磷酰胺组，表明雀嘴茶对环磷酰胺致免疫抑制小鼠的细胞免疫功能具有恢复作用。

[1]张爱萍，徐今宁．中药免疫调节作用研究进展[J]．中国药业，2011，20（3）：75-77．

[2]李 菊．雀嘴茶药学基础研究[D]．昆明：昆明医学院，2007．

[3]李 菊，胡炜彦，张荣平，等．雀嘴茶急性毒性、病理学及其化学成分的初步研究（摘要）[J]．昆明医学院学报，2006，27（4）：129．

[4]杨 错，邢立国，刘玉兰．柴胡乳剂对小鼠免疫功能的影响[J]．沈阳药科大学学报，2006，23（3）：169-171．

[5]刘荣珍，李风文，李裕生，等．绵羊红细胞与鸡红细胞对小白鼠溶血素的影响的探讨[J]．广西医学，2003，25（9）：1 739．

[6]华 伟，李 凡，米新陵，等．刺山柑软膏对小鼠血清溶血素的影响[J]．中国麻风皮肤病杂志，2011，27（1）：26-27．

[7]郝燕生，杨玉明．复方参芪维E胶囊联合泛昔洛韦对带状疱疹患者免疫功能的影响[J]．中国药业，2014，16（23）：32-33．

[8]杨铁虹，卢保华，贾 敏，等．当归多糖对小鼠免疫功能的影响[J]．中国药理学通报，2003，19（4）：448-451．

[9]罗晓丽，杨 侃，孙 明．黄芪扶正汤对免疫抑制小鼠的免疫调节功能[J]．中南大学学报，2009，34（6）：555-558．

[10]Rose CM，Kimzey SL，Green JM．The host response of CD28-deficient mice to Pneumocystisinfection[J]．Microb Pathog，2006，40（1）：23-28．

[11]何茂锐，万荣珍，谢雪梅，等．匹多莫德对艾滋病并肺孢子虫肺炎的临床疗效及细胞免疫功能的影响[J]．中国药业，2014，11（23）：20-21．

Protecting Effect of Lyonia Ovalifolia（W．）Produced in Yunnan on Mice with Lowered Immune Function

Liang Yueqin，Wang Chongjing，Wang Heng，Li Zhongkun
（Yunnan Hospital of Kunming Medical University，Kunming，Yunnan，China 650051）

Objective To investigate the immunomodulatory effect of Lyonia ovalifolia（W．）．Methods The cyclophosphamid induced immunosupression mice model was prepared in the male ICR mice and gavaged by Lyonia ovalifolia（W．）and the distilled water for taking serum．The ELISA was used to detect the concentrations of serum interleukin-2（IL-2）and interferon-γ（IFN-γ）．The flow cytometry was adopted to detect the percentages of serum CD4，CD8and CD3．The UV was adopted to detect the concentration of serum hemolysin．Results Lyonia ovalifolia（W．）could enhance the percentages of serum CD4，CD8and CD3to（31．56±6．51）%，（11．47± 3．63）% and（2．91±0．82）% respectively，the contents of IL-2 and IFN-γ to（562．74±43．82）pg／L and（1035．40±44．84）pg／L respectively，and the absorbance degree（OD）of hemolysin to(1．380±0．159)，which had statistical differences compared with the model group．Conclusion Lyonia ovalifolia（W．）has the effect for increasing the immunologic function in mice．

Lyonia ovalifolia（W．）；mice；immune function

R285．5；R282．71

A

1006－4931(2015)04－0025－02

梁月琴（1963-），女，大学本科，主任药师，主要从事临床药学工作，（电话）0871-63211161（电子信箱）1598203375＠qq．com；李仲昆，主任药师，主要从事临床药学和中药研发工作，本文通讯作者，（电话）0871-63211154。

2014－10－27；

2014－12－22)