张 瀛，张文军

(天津中医药大学中药学院，天津 300193； 天津医科大学总医院，天津 300052)



HPLC法测定甘杏颗粒剂中苦杏仁苷的含量

张 瀛1，张文军2

(天津中医药大学中药学院，天津 300193； 天津医科大学总医院，天津 300052)

目的：建立甘杏颗粒剂中苦杏仁苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，流动相为水-甲醇-乙腈(75∶15∶10)，检测波长为210 nm，进样量20 μl。结果：苦杏仁苷在0.079 68～0.318 7 mg/ml(r=0.999 9)浓度范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.98，RSD为0.78%。结论：该法操作简便、准确，可作为甘杏颗粒剂中苦杏仁苷的含量控制方法。

甘杏颗粒剂，苦杏仁苷，高效液相色谱法

甘杏颗粒剂是由麻杏石甘汤经典方剂加减而成，具有宣肺清热、止咳化痰的功效，对痰热型喘证有良好效果，临床上用于治疗急性支气管炎等症。苦杏仁是方中止咳平喘的君药，其中苦杏仁苷是止咳平喘的主要有效成分，在无酶的条件下，只能在胃酸的作用下缓慢分解，产生微量的氢氰酸而奏止咳平喘之效，且无不良反应[l，2]。苦杏仁苷的含量将直接影响到甘杏颗粒剂的安全和疗效。参考有关文献[3，4]，采用HPLC测定苦杏仁苷的含量，控制产品质量，为保证该制剂安全有效提供依据。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪：美国Spectra-physics；Spectra Focus紫外检测器；输液泵SP8810；Anstar色谱工作站；苦杏仁苷对照品(批号110820-200403，中国药品生物制品检定所，含量测定用)。甘杏颗粒剂(本院自制，规格：5 g/袋，批号141012、141015、141018)。甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：TIANHE Kromasil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相：水-甲醇-乙腈(75∶15∶10)；检测波长：210 nm；流速：0.8 ml/min，柱温：室温，进样量20 μl。在上述色谱条件下苦杏仁苷对照品的保留时间为11.5 min。理论塔板数按苦杏仁苷峰计算不低于2 500，分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取对照品5.00 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 0.199 2 mg/ml的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取甘杏颗粒剂(批号141015) 5 g，研细，精密称定，用适量甲醇溶解，浸泡l h，超声处理 30 min，微孔滤膜过滤，定容为25 ml，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按“2.3.2”项下方法制得不含苦杏仁的阴性对照品溶液，备用。

2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。苦杏仁苷的保留时间约为 11.5 min。阴性样品在苦杏仁苷峰位置处干扰，本色谱条件苦杏仁苷与其他组分分离完全，见图1。

2.4 标准曲线和线性范围 分别精密吸取对照品溶液，用甲醇稀释配制浓度分别为0.079 68、0.119 52、0.159 36、0.199 2、0.239 0、0.278 9和0.318 7 mg/ml的苦杏仁苷系列对照品溶液。 精密吸取上述苦杏仁苷系列对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，依“2.1”项下色谱条件进样测定，以峰面积积分值(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程Y=32 617 248.7X-8 869.6(r=0.999 9)，苦杏仁苷在0.079 68～0.318 7 mg/ml浓度范围内与峰面积线性关系良好。

1.苦杏仁苷

2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液20 μl，依“2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录色谱图，RSD为0.39%。

2.6 稳定性考查 取“2.2.1”项下浓度为0.199 2 mg/min的对照品溶液，依“2.1”项下色谱条件进样测定，于3、6、12和24 h分别进样20 μl，结果峰面积RSD为0.50%(n=6)，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性考查 取同一批号(批号141015)样品6份，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件分别进样20 μl，测定峰面积，计算苦杏仁苷的含量，本试验重复性较好，RSD为1.03%。

2.8 加样回收试验 取6份已测定含量(苦杏仁苷含量为0.203 3 mg/g)的同一批甘杏颗粒剂(批号141015) 样品约5.0 g，分别准确加入80%、100%和120%的对照品适量，照“2.1”项下色谱条件操作，进样20 μl，计算回收率为99.98，RSD为0.78%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 含量测定 精密吸取甘杏颗粒剂供试品溶液20 μl，依“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，用外标法计算苦杏仁苷的含量，结果见表2。

表2 甘杏颗粒剂中苦杏仁苷的含量测定结果

3 讨论

3.1 苦杏仁酶的去除 苦杏仁苷在苦杏仁酶的作用下会水解破坏，故原药材中苦杏仁苷的含量与苦杏仁酶密切相关[1]，传统方法是以加热除去苦杏仁酶来保证苦杏仁的质量。

3.2 提取方法 样品曾采用甲醇热回流、水热回流和甲醇超声提取，用水提取测得苦杏仁苷峰形有分叉且含量偏小，说明提取不完全。甲醇热回流和超声提取的苦杏仁苷含量偏差不大，超声提取比热回流操作简便，故选用甲醇超声提取。

3.3 流动相的选择 本实验用水-甲醇作为流动相，苦杏仁苷峰有拖尾，增大甲醇比例并加入适量乙腈后，图谱有明显改善，与其他峰分离良好。

以苦杏仁苷作为定量控制指标，采用HPLC法测定，方法简便可靠、专属性强、重现性好，能够较全面地反映该制剂的内在质量，可进一步提高质量标准[5，6]。

1 魏金婷，刘文奇.方药中苦杏仁苷的研究和应用进展[J].海南医学院学报，2007，13(6)：589-591

2 何俊，廖茂梁，刘昌孝，等.配伍对三拗汤煎液中苦杏仁苷煎出量的影响[J].中成药，2011，30(1)：18-120

3 张云风.HPLC测定杏桔合剂中苦杏仁苷的含量[J].安徽医药，2010，14(8)：896-897

4 杨树斌，刘青，孙立立.HPLC测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量[J].中成药，2006，28(10)：1452-1454

5 魏智锐，贾少谦. 高效液相色谱法测定麻杏定喘合剂中苦杏仁苷含量[J].中国药业，2009，l8(20)：36-37

6 邹小娟，谢和兵，钱芳，等.HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究[J].中国药事，2009，23(1)：33-36

Determination of amygdalin content in Ganshi granules by HPLC

Zhang Ying，Zhang Wenjun

(1.College of Traditional Chinese Medicine,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193； 2.Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300052)

Objective：To develop an HPLC for quantitative analysis of amygdalin in Ganshi granules．Methods：Mobile phase was composed of water, methanol, and acetonitrile at a rate of 70∶15∶10.The detection wavelength was at 210 nm．Results：The average recovery of amygdalin from Ganshi granules was 99.98%(RSD was 0.79%),and the content of amygdalin was 0.203 3 mg/g in Ganshi granules.Conclusion：Besides simplicity，the method yields accurate reproducible results and can therefore be used in the quality control of a mygdalin content in Ganshi granules.

Ganshi granules，amygdalin，HPLC

2015-05-21

R927.2

A

1006-5687(2015)04-0005-03