王瑞静，李瑞明

(天士力控股集团研究院，天津 300402)



HPLC法测定连夏消痞颗粒中盐酸小檗碱的含量

王瑞静，李瑞明

(天士力控股集团研究院，天津 300402)

目的：建立HPLC法测定连夏消痞颗粒中盐酸小檗碱的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Agilent zorbax C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(27∶73)；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：345 nm。 结果：盐酸小檗碱进样浓度在1.76～70.31 μg/ml范围内呈现良好的线性关系，回归方程为：Y=3 938.1X+6.528(r=0.999),平均回收率为99.88%， RSD为2.84%。结论：本方法简便可行，灵敏度高，重复性好，可用于连夏消痞颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。

连夏消痞颗粒，盐酸小檗碱，HPLC，含量测定

连夏消痞颗粒是由法半夏、黄连、干姜等8味中药材制成的中药复方制剂，具有健脾和胃、消除胀满之功效，本方为辛开苦降，寒热并用，阴阳并调，主治脾胃不和寒热错杂之痞。方中黄连所含盐酸小檗碱为其活性成分，本试验参考有关文献[1-6]，采用HPLC 法测定连夏消痞颗粒中盐酸小檗碱的含量，方法简便快速、准确可靠、重复性好，为控制产品质量提供依据。

1 仪器与试药：

1.1 仪器 Agilent 1100系列高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Agilent zorbax C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)，电子分析天平： METTER Toledo Ag 135型，KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)， Milli-Q超纯水系统(Millipore)。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号110713-200911，纯度为86.8%)；乙腈、甲醇为色谱纯(MERCK)，其余试剂均为分析纯，水为二纯水。连夏消痞颗粒(规格7 g/袋，批号20120401、20120402、20120403)为本公司制备的中试样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent zorbax C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8 g 加水溶解至1 000 ml，用磷酸调至pH 3.0)(27∶73)，流速：1.0 ml/min，柱温：30 ℃。检测波长345 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品13.13 mg，加甲醇定容至25 ml，精密吸取1 ml稀释到50 ml，浓度为0.010 5 mg/ml的溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品研磨，精密称取粉末约0.1 g，精密称定，置100 ml 量瓶中，加入盐酸-甲醇(1∶100) 约95 ml，超声处理30 min，放置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺黄连的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 方法专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，依法进样测定，记录液相色谱图，见图1。阴性对照在盐酸小檗碱对照品相同保留时间处无色谱峰出现，表明该方法专属性良好。

2.4 线性关系考查 精密称取盐酸小檗碱对照品(纯度86.8%)8.10 mg,置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制得70.31 μg/ml的对照品溶液(储备液)。取储备液稀释得浓度分别为70.31、35.16、17.58、8.79、3.52和1.76 μg/ml的溶液， 分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照“2.1”项下色谱条件进样测定。以进样浓度对峰面积进行线性回归， 得回归方程：Y=3 938.1X+6.528(r=0.999)，结果表明盐酸小檗碱进样浓度在1.76～70.31 μg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

1.盐酸小檗碱

2.5 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液10 μl，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，计算精密度，结果RSD 为0.70%，表明该仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验 取“2.2.2”项下供试品溶液，室温放置， 精密吸取供试品溶液10 μl，按照“2.1”项下色谱条件分别在0、2、4、6、12和24 h进样，共测定6次，测定峰面积，计算稳定性，结果RSD 为0.79%，结果表明供试品溶液在室温24 h内稳定性良好。

2.7 重现性试验 取同一批号(批号201204016)样品6份，分别按“2.2.2”项下制备成供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定，RSD为0.67%，表明该方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取颗粒6份，每份0.05 g，精密量取0.093 4 mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液4 ml，分别加入到6份样品中，制备供试品溶液，并计算加样回收率。得平均加样回收率99.88%，RSD为2.84%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.9 样品含量测定 取3批连夏消痞颗粒中试样品，按“2.1”项下色谱条件进样测定盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相配比 色谱条件的选择系参照《中国药典》2010版一部黄连药材中盐酸小檗碱的含量测定方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100 ml中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH 值为4.0)为流动相；检测波长为345 nm,在此基础上,本实验又通过对流动相进行深入考查，选择乙腈-磷酸二氢钠溶液，不同比例，调节不同pH值的配比，最终选取最优比例乙腈-磷酸盐缓冲液27∶73(磷酸调节pH值为3)，作为流动相，结果盐酸小檗碱与其他峰分离度均大于2,分离效果良好，保留时间适宜，重现性好。

3.2 供试品溶液制备方法 供试品溶液制备方法以盐酸小檗碱的提取率为指标，分别考查了提取方法(超声提取、加热回流提取)、提取溶剂(甲醇、不同比例的盐酸-甲醇、不同比例的乙醇- 水)、提取溶剂倍数和提取时间。结果采用盐酸-甲醇(1∶100) 95 ml 超声处理30 min 可以将盐酸小檗碱提取完全，故选择该法作为供试品溶液制备方法。

本研究建立的盐酸小檗碱的检验方法，操作简便、灵敏度高、重现性好，为连夏消痞颗粒质量标准的制定提供依据。

1 刘善新，靳光乾，王亮.三黄汤制炉甘石中盐酸小檗碱的含量测定[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013,19(13): 107-109

2 高聪聪，许闽，周悌强，等.四方胃胶囊中盐酸小檗碱的含量测定[J].河南中医学报, 2013,28(12): 1860-1861

3 冯果，刘文，陈登科，等.香连丸中盐酸小檗碱的含量测定[J].贵阳中医学院学报, 2011,33(4): 7-9

4 叶秀金，宋粉云.HPLC测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志, 2011,17(3): 90-92

5 陈庆辉，唐元军.知柏地黄丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定[J].药物分析杂志,2012，32(12):2198-2202

6 刘淑萍，褚连军.冬黄颗粒剂的制备及其含量测定[J].中国生化药物杂志,2010,31(4): 263-265

2014-08-08

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1006-5687(2015)01-0017-02