改良人原代脐静脉内皮细胞的分离及鉴定*

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崔丽丽， 余芳芳， 左丽**

(贵阳医学院 免疫学教研室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 优化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的分离及培养方法。方法： 在传统HUVECs分离的基础上进行改进，通过Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs，利用倒置显微镜观察其生长状况、免疫组织化学方法及流式细胞术检测所培养细胞的纯度。结果： 改良实验步骤和精简操作后，HUVECs分离不受影响，分离的HUVECs在体外2～4 d可长成单层，倒置显微镜下可见细胞呈“鹅卵石”状排列，Ⅷ因子免疫组化实验阳性，流式细胞术检测细胞纯度达99.37%。结论： 用胶原酶消化法分离HUVECs具有培养周期短，所获得的HUVECs纯度较高的优点，有利于体外血管内皮细胞模型的建立。

[关键词]内皮，血管; 脐静脉； 免疫组织化学； 细胞培养； 细胞分离； 流式细胞术

血管是人体的重要器官，血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VECs)是覆盖其内膜表面的单层扁平或多角形的细胞。VECs既是感应细胞又是效应细胞，不仅能感知血液中的炎性信号、激素水平、切应力及压力等信息，而且能通过分泌多种血管活性物质对这些信息作出反应。血管内皮细胞在生理止血、血管渗透及血管对于其他生理性和病理性刺激做出的反应中起重要的作用[1-6]。血管内皮细胞的培养是体外研究大血管内皮细胞功能的重要手段。Jaffe等[7]首次从人脐静脉中分离出内皮细胞(ECs)并在体外培养成功后，人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell， HUVECs) 作为体外研究 ECs 的模型受到研究者的关注。新生儿脐带由于取材方便，来源充足，而成为体外内皮细胞实验的主要材料。……