何斌，陆征，陈洁，付书林，陈夏冰

摘要：为研究阿莫西林在肉鸡体内的药物动力学特征，为兽医临床用药提供依据，试验选取12羽成年三黄肉鸡，阿莫西林口中灌服给药，利用高效液相色谱法测定血浆中药物浓度。结果表明，阿莫西林口灌给药（15 mg/kg.BW） 后，其主要药动学参数：t1/2α为（0.627±0.071） h，t1/2ka为（0.139±0.011） h，t1/2β为（1.800±0.181） h，AUC为（6.005±0.641） μg/（mL·h），Tmax为（0.476±0.049） h，Cmax为（2.293±0.152） μg/mL。说明阿莫西林口灌给药后，在成年三黄鸡体内吸收迅速，消除较快。

关键词：阿莫西林;高效液相色谱;肉鸡;药物动力学

中图分类号：R969.1;R978.1        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2014）23-5813-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.23.048

阿莫西林（Amoxicillin）又称羟氨苄青霉素，人工半合成β-内酰胺类抗菌药物，为氨苄西林同系物[1]。性质稳定、耐酸，在胃酸中较稳定、吸收迅速、分布广泛，被WHO推荐为首选口服抗生素[2-4];同时其有杀菌作用较强、副作用少、剂型多样、与其他药物联用方便和价格便宜等优点，现已广泛用于兽医临床，用于防治各种敏感菌所引起的家禽消化、呼吸、生殖系统以及全身感染性疾病[5-8]。本研究就阿莫西林在肉鸡体内的药物动力学进行了研究，旨在为家禽养殖合理用药提供理论指导，对家禽养殖业中细菌性疾病的防控具有重要意义。

1  材料与方法

1.1  试验材料

美国Agilent 1100型高效液相色谱仪，紫外检测器，Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;原料药品由四川华蜀动物药业有限公司提供，阿莫西林原料药，批号：20100522，含量98.2%;阿莫西林对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号：0409-9706，含量86.2%;乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.2  试验方法

1.2.1  药物动力学试验设计  试验前将12羽成年三黄肉鸡适应饲喂7 d，给药前禁食12 h，阿莫西林以15 mg/kg体重的剂量口灌给药。

口灌给药后，分别于0.083、0.167、0.25、0.50、0.75、1、2、4、6、8、12 h采血2 mL左右，置于已添加肝素钠的聚丙烯离心管中，以2 000 r/min离心15 min，取上清液于-20 ℃冷冻保存，待测定。

1.2.2  色谱条件  色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;检测波长为210 nm;流动相为乙腈∶0.02 mol/L KH2PO4（pH 2.5）=5∶95;流速为1.0 mL/min;进样量为20 μL;柱温为（30±0.1）℃[9，10]。

1.2.3  血浆样品处理  准确吸取血浆样品0.5 mL，加入1.5 mL乙腈沉淀蛋白，涡旋振荡1 min，3 000 r/min离心10 min;取上清液于10 mL离心管中，再加入3 mL二氯甲烷，涡旋振荡1 min，3 000 r/min离心10 min，取上清液20 μL进样分析，记录色谱图[11-13]。

1.2.4  血浆标准曲线的建立  向9支5 mL聚丙烯离心管中各加入0.5 mL空白血浆，留一支作空白对照，然后依次加入阿莫西林对照品标准工作液，得到药物浓度依次为0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.50、5.00、10.00 μg/mL的血浆样品。分别按照“1.2.3”的方法处理后，进样分析。以测得的阿莫西林的峰面积（A）为横坐标，药物浓度（C）为纵坐标，建立标准曲线，求得阿莫西林的回归方程为C= 0.027 4A+0.017 6，r=0.999 7。

1.2.5  方法学验证  取空白血浆0.5 mL，添加适量阿莫西林对照品标准工作液，使其浓度分别为10.00、1.00、0.10 μg/mL，按照“1.2.3”的方法处理，并进行HPLC检测，每个浓度设置5个平行，测定结果为日内变异系数在5%以内;重复检测5 d，测定结果为日间变异系数在10%以内。阿莫西林的血浆萃取回收率为90.52%～97.62%;最低检测限（LOD）、最低定量限（LOQ）分别为0.01、0.04 μg/mL。

1.2.6  数据处理及统计分析  方法学验证考察数据采用SPSS软件分析处理;药-时曲线图和消除动态图采用Excel软件绘制;药物动力学模型拟合及参数计算均采用3P97药动学软件分析，药物动力学参数可根据公式进行计算。

2  结果与分析

2.1  色谱行为

通过反复多次试验所建立的色谱条件，基线平稳，药物峰形对良好，样品中阿莫西林在色谱条件下均能与杂质峰良好分离（图1、图2）。结果表明，本测定方法简便，稳定，检测效率高，色谱峰良好。

2.2  药物动力学数据

按照试验设定方案进行给药和样品处理，经高效液相色谱分析检测、软件分析计算，肉鸡口灌阿莫西林后各时间点体内血药浓度见表1，药物动力学参数见表2。由表1、表2可见，肉鸡口灌阿莫西林后，在体内吸收迅速，达峰时间快，达峰浓度较高，药-时曲线（图3）符合有吸收二室开放模型，其药-时方程为C=1.568 1 e-1.106 3 t + 2.045 9e-0.385 1 t - 3.614 0e-4.988 3 t。

3  小结与讨论

本试验中，建立了阿莫西林的高效液相色谱检测方法，该方法简单、快速。试验中选择210 nm作为检测波长，有效地提高了检测的灵敏度，使药物与杂质得到了有效分离。

阿莫西林口灌后，药-时曲线符合有吸收二室开放模型，与Hernandez等[14]报道的在鸽体内的药动学模型相符，Hernandez等[14]报道阿莫西林在鸽体内的t1/2β为1.22 h，与本试验结果相似，这可能是由于两者同属禽类，所以阿莫西林在其体内的半衰期相近;与曾振灵等[15]报道的阿莫西林在猪体内的t1/2β为3.28 h相比较短，这可能是由于禽类的体温高，对药物代谢快所致。而阿莫西林在猪体内Tmax为0.53 h、在鸽体内Tmax为0.33 h，均与肉鸡体内的达峰时间相近，这说明阿莫西林在这些动物体内的吸收速度基本相近，鸡体内肌胃对阿莫西林的吸收没有影响。阿莫西林的药动学数据表明，阿莫西林在肉鸡体内吸收迅速、达峰时间短，消除较快。

参考文献：

[1] BAILEY T A，SAMOUR J H，SHEEN R S. Analysis of amoxycillin in bustard plasma by high-performance liquid chromatography after administration of a long-acting formulation[J]. Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1996，21： 119-202.

[2] 张玲玲，江善祥.阿莫西林药理与毒理研究进展[J].兽药与饲料添加剂，2009，22（1）：20-23.

[3] DORRESTEIN G M，VANGOGH H，RINZEMA J D，et al. Comparative study of ampicillin and amoxicillin after intravenous，intramuscular and oral administration in homing pigeons（Columba livia）[J].Research in Veterinary Science，1987，42（3）：343-348.

[4] 张致平.β-内酰胺类抗生素研究的进展[J].中国新药杂志，2002（1）：61-67.

[5] 陈杖榴.兽医药理学[M].北京：中国农业出版社，2004.

[6] HERNANDEZ E， REY R， PUIG M， et al. Pharmacokinetics and residues of a new oral amoxicillin formulation in piglets： A preliminary study [J]. Vet J，2005，170（2）： 237-242.

[7] FOROUTAN S M， ZARGHIB A，SHAFAATI A，et al. Simultaneous determination of amoxicillin and clavulanic acid in human plasma by isocratic reversed-phase HPLC using UV detection [J]. Pharm Biomed Anal，2007，45（3）： 531-534.

[8] CARTER G K，MARTENS R J，BROWN S A，et al. Pharmacokinetics of sodium amoxicillin in foals after intramuscular administration[J]. Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1986，47（10）： 2126-2129.

[9] 郭志彩.β-内酰胺类抗生素及其复合制剂的研究进展[J].现代中西医结合杂志，2007（9）：1289-1292.

[10] LOPEZTT S，ALARCON T， DELGADO T，et al. In vitro activity of β-lactam agents and β-lactamase inhibitors in clinical isolates of acinetobacter banmanni[J]. Veterinary Research Esp Quiioter，1999，12（12）：140-143.

[11] 李小青，黄文祥.β-内酰胺酶抑制剂研究进展[J].现代医药卫生，2006（3）：356-357.

[12] FRERE J M. Quantitative relationship between sensitivity to β-lactam antibiotics and β-lactamases production gram-negative bacteria-I：steadystate treatments [J]. Biochem Pharmacol，1989，38（9）：1415-1426.

[13] 杨永革，刘  静，许雪廷.阿莫西林-舒巴坦匹酯片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度[J].解放军药学学报，2007，23（4）：256-259.

[14] HERNANDEZ E，  REY R， PUIG M，et al. Pharmacokinetics and residues of a new oral amoxicillin formulation in piglets：A preliminary study[J]. The Veterinary Journal，2005，170（2）：237-242.

[15] 曾振灵，龙  潭.阿莫西林钠在猪体内的生物利用度及药动学研究[J].畜牧兽医学报，2002（6）：594-597.