T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎诊断中的临床价值

阚 威

目的分析T细胞斑点试验技术诊断结核性胸膜炎的临床价值。方法选择初诊结核性胸膜炎患者、恶性胸腔积液患者、非结核性胸膜炎患者以及同期健康体检者，经T细胞斑点试验技术检测各组受试者外周血单个核细胞中对结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6和培养液蛋白10致敏的T细胞。结果结核性胸膜炎组T细胞斑点试验技术检测阳性率较其他各组均有所升高（P＜0．05）；T细胞斑点试验技术对结核性胸膜炎诊断的敏感性、特异性以及准确性均较腺苷脱氨酶高（P＜0．05）。结论T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎辅助诊断中具有临床价值。

T细胞斑点试验技术；结核性胸膜炎；诊断

本次研究出于分析T细胞斑点试验技术诊断结核性胸膜炎价值的目的，选取我院收治的初诊结核性胸膜炎、恶性胸腔积液、非结核性胸膜炎以及同期健康体检者，经T细胞斑点试验技术检测上述各组受试者的外周血单个核细胞中对结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6和培养液蛋白10致敏的T细胞，汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究中资料来源于2012年5月～2015年7月收治的初诊结核性胸膜炎患者32例、恶性胸腔积液患者27例、非结核性胸膜炎患者30例以及同期健康体检者45例，各组基本资料比较无较大差异（P＞0.05），可比较。

1.2 方法

采集各组受试者外周血标本4 ml，将其置于抗凝试管中，试管中应置入适量肝素锂，并及时进行混合，混合后及时进行PBMC分离，且应提前将RPMI1640液置于离心管内，RPMI1640液应控制在4 ml，然后将处理后的抗凝全血置于离心管中，并进行混合处理，同时将3 ml淋巴细胞分离液置于另外一个离心管内，然后将混匀的8 ml细胞悬液置于淋巴细胞分离液上方，进行离心运动，离心时间应控制在20 min左右，离心后采用加样器进行处理，吸取白细胞层并置于15 ml的离心管当中，而后加入11 ml的RPMI1640，离心7 min，分离出上清液。然后置入1 m AIMV，混匀细胞，并逐渐增加至10 ml，混匀。吸取适量细胞计数，通常应控制为10 ul，然后根据细胞计数计算AIMV量。选取合适的离心管沉淀细胞，去除上清液，并置于预算好的AIMV量，制成细胞工作液。取出板条，并对各个标本进行处理，每个标本制四个孔，并将AIMV、抗原和阳性对照置于孔内，而后均加入细胞工作液100 ul，在二氧化碳培养箱中培养16～20 h，培育完成后取出板条，将液体弃去，每孔经PBS反复清洗4次，而后继续加入50 ul的间隙磷酸酶标记的小鼠抗人INF-γ单克隆抗体，在4～8℃条件下温育1 h，温育后取出，清除液体，并利用PBS对各孔进行清洗，通常每孔应清洗四遍，清洗后置入50 ul显色底物，并将其置于温室内庇荫处温育，温育时间为7 min，温育后利用清水冲洗，晾干，2～3 h后查看结果。

1.3 结果判断标准

所有操作均严格按照试剂盒使用说明书进行，若是因对照孔斑点形成细胞不足6，（检测孔斑点形成细胞-阴性对照孔形成细胞）×4不低于24，则可视为检测结果阳性；若是阴性对照孔斑点形成细胞不低于6，检测孔斑点形成细胞为阴性对照孔的2倍，则视为检测结果阳性。

1.4 数据处理

2 结果

2.1 各组检测阳性率比较

健康对照组无阳性，结核性胸膜炎组阳性29例，阳性率90.63%，恶性胸腔积液组阳性2例，阳性率7.41%，非结核性胸膜炎组阳性2例，阳性率6.67%。结核性胸膜炎组阳性率较其他各组均有所升高，具有统计学意义（P ＜ 0.05）。。

2.2 T细胞斑点试验对结核性胸膜炎诊断中的性能

经统计发现，经T细胞斑点试验对结核性胸膜炎诊断的敏感性为87.50%，特异性为93.7%，准确率为87.50%。腺苷脱氨酶法对结核性胸膜炎诊断的敏感性为68.75%，特异性为84.38%，准确性为71.88%。前者高于后者（P＜0.05）。

3 讨论

结核性胸膜炎是引起胸腔积液的主要因素之一，研究显示我国结核性胸膜炎患者所占比例在49.5%～54.5%［1］，因这一类疾病缺乏临床特异性表现，经细胞学方法进行检测的阳性率相对较低，胸膜活检的创伤性使其应用具有较大的限制性，分子生物学虽属于快速诊断技术的一种，然而其仍存在较大问题，比如假阳性较高等，因此对一种敏感、特异的实验室诊断技术进行寻找为当务之急［2］。

T细胞斑点试验时经酶联免疫斑点技术发展而来，本次研究中采取结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞的应答反应来对结核分枝杆菌感染状态进行判断，在结核性胸膜炎诊断中进行应用［3］。通过试验发现，结核性胸膜炎组T细胞斑点试验技术检测阳性率较其他各组均升高；T细胞斑点试验技术对结核性胸膜炎诊断的敏感性、特异性以及准确性均较腺苷脱氨酶、结核抗体检测方法高。这一结果与相关文献报道结果相似，由此证实，T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎辅助诊断中具有较大的临床价值，意义重大，值得关注。

［1］马瑞新．结核性胸膜炎105例临床分析［J］．中国继续医学教育，2015，7（12）：69-70．

［2］王永生，徐小雅，杨华，等．T-SPOT．TB试剂盒在结核性胸膜炎临床诊断中的应用价值［J］．四川医学，2011，32（12）：1854-1856．

［3］刘琛琛，高兴林，罗泽如．慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰T细胞巨噬细胞移动抑制因子的表达及其意义［J］．实用医学杂志，2014，30（8）：1238-1241．

The Clinical Value of T Cell Spot Test Technology in the Diagnosis of Tuberculous Pleurisy

KAN Wei Baicheng Hospital of Traditional Chinese Medicine in Jilin，Baicheng 137000，China

ObjectiveTo analyze the T cell spot test technology the clinical value of diagnosis of tuberculous pleurisy．MethodsFirst diagnosis of tuberculous pleurisy patients, patients with malignant pleural effusion and tuberculous pleurisy patients and healthy physical examination was selected to study during this period, T Spot TB test subjects in each group，test the targeting antigens 6 early secreted from mycobacterium tuberculosis and Protein 10- sensitized T cells in culture fluid in peripheral blood mononuclear cells．ResultsTuberculous pleurisy group T cells spot test technology test positive rate than other groups were significantly higher （P＜0．05）; T cells spot test technique for diagnosis of tuberculous pleurisy sensitivity， specificity and accuracy were relatively high adenosine deaminase （P＜0．05）．ConclusionT-cell spot test technique in assistant diagnosis of the tuberculous pleurisy has significant clinical value．

T cells spot test technology，Tuberculous pleurisy，The diagnosis

R521．7

B

1674-9316（2015）29-0153-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．29．113

137000 吉林省白城中医院