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猪食盐中毒的病理诊断

2015-01-23戴卫明江苏省常熟市梅李动物防疫站215511

中国畜禽种业 2015年7期
关键词:载玻片二甲苯病死猪

戴卫明(江苏省常熟市梅李动物防疫站 215511)

猪食盐中毒的病理诊断

戴卫明(江苏省常熟市梅李动物防疫站 215511)

为了探索猪食盐中毒的发病原因,对某养殖户的病死猪进行检查,结合临床症状及剖检病变初步诊断为食盐中毒。取病死猪的脑组织进行病理组织学检查,镜下可见脑血管周围有多量淋巴细胞聚集,形成 “袖套”现象。综合以上结果,进一步诊断该病例是由食盐中毒引起。

猪;食盐中毒;病理学;诊断

猪食盐中毒是由于采食含盐份较多的饲料或饮水,如泔水、腌菜水、饭店食堂的残羹、洗咸鱼水或酱渣等喂猪,配合饲料时误加过量的食盐或混合不均匀等而造成。全价饲养,特别是日粮中钙、镁等矿物质充足时,对过量食盐的敏感性大大降低,反之则敏感性显著增高。饮水是否充足,对食盐中毒的发生更具有绝对的影响。食盐中毒的关键在于限制饮水。为此,本文通过对猪食盐中毒的病理诊断进行了研究,为该病的预防和治疗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 动物

江苏省常熟市梅李镇某养殖户的发病猪。

1.2 药品试剂和器材

1.2.1 药品试剂

(1)70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精。95%以下的各级浓度酒精是用95%酒精加蒸馏水稀释而成。

(2)Bouin氏固定液(苦味酸饱和水溶液75ml,福尔马林25ml,冰醋酸5ml,混合即成)。

(3)蛋白甘油(蛋白50ml,甘油50ml,水杨酸钠1g,混合即成)。取一新鲜鸡蛋的蛋白,充分搅拌成雪花状泡沫,然后滤去泡沫,加入等量甘油,搅拌均匀,再加入水杨酸钠作防腐用。

(4)埃利希苏木精染液(苏木精1g,纯酒精50ml,冰醋酸5ml,甘油50ml,钾矾约5g的饱和量,蒸馏水50ml)。将苏木精溶于约15ml的纯酒精中,再加冰醋酸后搅拌;当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器,同时加入其余的酒精;将钾矾在研钵中研碎并加热,然后将它溶解于水中,将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中,并随时搅动;此液混合完毕,将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来,放在暗处通风的地方,并经常摇动以促进它的成熟。

(5)0.5%伊红酒精溶液(0.5g伊红溶于100ml95%酒精中即成)。

(6)盐酸酒精(100ml 70%酒精中加入1ml盐酸)。

二甲苯、切片石蜡、中性树胶等。

1.2.2 器材

解剖器一套、单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、标本瓶、烧杯、量筒、漏斗、染色缸、树胶瓶、酒精灯、毛笔、绘图纸、滤纸、熔蜡箱、展片台、小木块、蜡带盒、烤片盒、切片托盘、显微镜等。

2 方法

2.1 病史及流行病学调查

2007年8月,常熟市梅李镇某养猪户饲养70日龄的白猪86头,喂的自配饲料,其配方为玉米60%,麸皮15%,豆粕20%,另加5%的预混料(其所含食盐0.35%),在此基础上又添加了250g的氯化钠。29号早上发现有一圈12头猪突然全部发病,几头平时采食较快的猪,卧地不起,其中4头强壮的猪口吐白沫,流涎,角弓反张,四肢呈游泳状,呈阵发性抽搐,于上午陆续死亡;而其它圈的猪群情况良好,尚未发病。根据调查了解,养猪户反映发病的猪圈由于饮水设施损坏、供水不足,该圈猪群饮水较平常少。

2.2 病理变化

剖检可见病死猪口角有白沫,肺部淤血、水肿,胃粘膜充血、出血,脑膜显著充血,脑实质充血、水肿。十二指肠充血,出血。其它脏器未见明显病变。

2.3 实验室诊断

2.3.1 细菌学检查

2.3.1.1 触片镜检

无菌操作剖开病死猪腹腔,取出心、肝、脾、肺和肾制成组织触片,革兰氏染色镜检,未见有致病菌的存在。

2.3.1.2 细菌培养

在洁净的操作台上,无菌操作取病死猪的肝、脾、肾,分别接种于普通琼脂、麦康凯和血琼脂上进行细菌培养,置于37℃恒温箱中,培养24~48h后观察,未见有致病菌的存在。

2.3.2 病毒学检查

取病死猪的肝、脾、肾、肺、脑组织和淋巴结进行圆环病毒、伪狂犬病病毒多重PCR检测,猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒多重RT-PCR检测,结果均为阴性。

2.3.3 病理组织学检查

2.3.3.1 取材和固定

将病死猪头部打开,用锐利的刀片割取脑组织。组织块的大小以厚度不超过5mm为宜。然后,将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。固定时间为数小时至24h(需视组织块的大小而定)。

2.3.3.2 冲洗

经固定的材料,用酒精冲洗,洗去固定液以便染色。用Bouin氏液固定的材料,直接移入70%酒精中,多换几次酒精,直至无黄色时为止(也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液,以迅速洗去黄色)。而后将浸洗材料保存在70%酒精中过夜。

2.3.3.3 脱水

先从低浓度的酒精开始,然后,递增浓度,直至无水酒精。具体方法是,将材料经70%酒精→80%酒精→95%酒精(Ⅰ)→95%酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ),各级酒精1~2h。

2.3.3.4 透明

将脱水后的材料经1:1无水酒精与二甲苯→二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ),各级时间为0.5~2h,务使组织达到透明为止。

2.3.3.5 浸蜡

先将装有56~58℃石蜡的三个蜡杯放在熔蜡箱内熔化,并使熔蜡箱的温度保持恒定(约58℃)。然后将透明了的材料放入蜡杯(Ⅰ)→蜡杯(Ⅱ)→蜡杯(Ⅲ)。浸蜡时间视材料大小而定,总的浸蜡时间为2~4h左右。

2.3.3.6 包埋

包埋前,视组织块的大小先将绘图纸折成一纸盒,作为包埋的容器。将纸盒盛满已熔化的石蜡,随即将第三杯中已浸蜡的材料放入其中,切面朝下,位置放正。然后速将纸盒半浸于冷水中,待石蜡表面凝结后,将纸盒全部浸入水中冷却。石蜡全部凝固后,拆去纸盒即成蜡块。

2.3.3.7 切片

将修整后的蜡块粘在小木块上,小木块装在切片机上,以待切片;在旋转式切片机上将蜡块切成4~8um厚的薄片。用毛笔轻轻取下蜡带,放在蜡带盒内备用。

2.3.3.8 贴片或烤片

用小玻棒蘸取一点蛋白甘油滴于一干净的载玻片上,用手指涂匀,并加几滴蒸馏水于载玻片上。将蜡带切成适当长度的蜡片,然后用小镊子将蜡片轻放在载玻片的水面上,再把载玻片放在展片台上(温度为45℃左右)。蜡片受热后即慢慢展平。待完全展平后,用解剖针将切片位置拨正,倾去载玻片上的余水后,将其放在烤片盒中,置于50℃左右恒温箱内烤干。

2.3.3.9 HE染色

(1)脱蜡:将烤干的切片放入二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ)中,各为5min,以溶去切片上的石蜡。

(2)复水:是将脱蜡后的切片经各级浓度酒精逐渐下降到水的过程,即将二甲苯(Ⅱ)中取出的切片移入无水酒精→95%酒精→80%酒精→70%酒精→蒸馏水,各级中停留1~5min。

(3)染色:①将蒸馏水洗涤后的切片移入苏木精液中5~10min,使细胞核着色。②用自来水洗去切片上残余的染液。③用1%盐酸酒精分色数分钟。分色时随时用显微镜检查切片,使分色适度。④入1%氨水或自来水浸洗,使之蓝化。⑤在蒸馏水中浸片刻。⑥切片入70%→80%→90%各12min。⑦入0.5%伊红酒精溶液中染色2~5min,使细胞质着色。

2.3.3.10 脱水

切片依次入95%酒精(Ⅰ)→95%酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ),各级中停留1~5min。

2.3.3.11 透明

切片入1:1无水酒精、二甲苯→二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ),各级停留1~5min。

2.3.3.12 封藏

将切片从二甲苯(Ⅱ)中取出,用纸或布擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴一小滴树胶,然后用镊子加盖盖玻片。切片封好后,放在切片托盘上待干燥,即可镜检。

2.3.3.13 显微病变观察

病理组织学检查,镜下可见脑血管周围有多量淋巴细胞聚集,形成 “袖套”现象。

3 小结与讨论

(1)根据病史及流行病学调查、临床症状、剖检病变、细菌分离培养、病毒学检查以及病理组织学检查等实验室检查,诊断本病为猪食盐中毒所致。本病例中猪群具有过量食用食盐的病史,临床上具有流涎、口吐白沫、角弓反张、呈阵发性抽搐。剖检可见肺部淤血、水肿,胃粘膜充血、出血,脑膜显著充血,脑实质充血、水肿。十二指肠充血,出血。其它脏器未见明显病变。病理组织学检查结果表明,脑血管周围有多量淋巴细胞聚集,形成 “袖套”现象。符合食盐中毒。而且通过细菌学和病毒学检查的结果排除患其它细菌性疾病和病毒性疾病感染的可能。

(2)在诊断本病时,临床上应与链球菌病、猪水肿病、猪伪狂犬病等有相似神经症状的疾病加以区别。脑膜脑炎型猪链球菌病,除有神经症状外,常伴有败血症及多发性关节炎症状。体表(如腹下,四肢下端、耳尖)出现紫红色或出血性红斑,嗜中性白细胞数增加;猪水肿病,急性者病初精神沉郁,食欲废绝,眼睑、头、颈部甚至全身水肿,后期出现神经症状,盲目行走或转圈,痉挛或惊厥,触之惊叫、倒地,四肢似游泳状,24h内死亡。剖检在胃壁及结肠袢肠系膜上出现水肿。从肠系膜淋巴结及小肠内容物中容易分离到致病性大肠菌;伪狂犬病新生仔猪表现神经症状,还可侵害消化系统。成年猪则常为隐性感染或症状轻微,表现一过性发热,咳嗽,便秘,有的可呕吐,多在3~4d恢复。体温继续升高则出现神经症状。怀孕母猪出现胎儿吸收,木乃伊化死胎,流产。检肝和脾有1~2mm的白色坏死灶。猪食盐中毒临床上则表现流涎、口吐白沫、呈阵发性抽搐、对外界环境反应不敏感,而且体温正常,并且有过量摄入食盐的病史。

(3)在饲养中常添加一定比例的食盐,可增强代谢,促进生长发育。但是,如果添加过量或方法不当,就易造成食盐中毒。关于各种食盐中毒量,有文献中记载猪中毒量为2.2g/kg,食盐含量在0.35~5%即能满足猪的需要量,本病例中该用户在喂给猪食盐正常量的同时又在饲料中多补给了250g/100kg,因猪对食盐较敏感,易发生中毒。同时饮水不足对食盐中毒的发生具有决定性影响。实验表明猪饲料中含食盐0.25%时,若限制饮水或饮水不足可导致中毒。该圈发病或死亡的猪,由于饮水设施损坏、供水不足,而其它圈猪群饮水充足,则没有发生中毒现象。

(4)由于本病多呈急性或亚急性经过,因此诊治本病应掌握 “早与快”的原则,并根据临床症状情况,灵活掌握对症疗法,常采用10%葡萄糖溶液250~500mL;10%溴化钙静脉注射;症状严重的可静注25%山梨醇液或甘露醇,以缓解脑水肿,降低颅内压;另外用利尿剂(如氢氯噻嗪),以促进氯化钠的排出,对于食盐中毒的病猪如能及早发现,及时治疗,常能提高治愈率,获得满意的疗效。

(5)本病应以预防为主,给猪饲料添加食盐要掌握适量,通常配合料中的食盐含量0.3~0.5%,且要拌和均匀;如利用含盐的残渣剩羹喂猪时,要适当限制喂量,并同其他饲料搭配饲喂;给猪保持供给充足的饮水等,可有效的预防本病。

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