免疫亲和柱层析净化-高效液相色谱法检测中药材中赭曲霉毒素A
2015-01-19李浩
李 浩
(广西壮族自治区食品药品检验所,广西 南宁 530021)
赭曲霉毒素A(OTA)是赭曲霉毒素中最主要的一种,在紫外光下显绿色荧光,属于稳定的无色结晶化合物,呈弱酸性,溶于极性溶剂和碳酸氢钠溶液,微溶于水,溶点为165 ℃[1-2]。目前,已知赭曲霉毒素A 能致癌、致畸、破坏免疫系统,对肾脏造成损害,还可导致神经中毒[3]。世界上许多国家和涉及安全卫生的国际组织已制订了对赭曲霉毒素A 的限制性法律法规或限量标准[4-6]。中药材在生长、收获、运输、贮藏、加工等过程中均有被霉菌污染的可能性,我国现行国家标准中赭曲霉毒素A 的检测方法为薄层色谱(TLC)法和酶联免疫吸附(ELISA)法。免疫亲和柱是20 世纪90 年代在分析领域得到应用的新技术,溶液样品的大分子通过与亲和柱体内的特异蛋白结合,得到纯度较高的特异性结合蛋白,再用合适的洗脱液将特异性结合蛋白洗脱出来,从而达到分离、纯化的目的,由于该过程去掉了绝大部分干扰物,故大大提高了信噪比和方法的检出限。对于含有多种干扰物质的中药材,如何减少干扰是准确测定赭曲霉毒素A 最重要的前提,为此,笔者进行了试验,现报道如下。
1 仪器与试药
Ochra TestTM免疫亲和柱(美国维康、德国拜发公司);Waters2695型液相色谱仪、Waters 2475 型荧光检测器;KQ-100DB 型数控超声波清洗器超声机(昆山市超声仪器有限公司);电子天平(Electronic Scale);pH 计(Mettler Toledo);高质量空气泵(Hailea Aco-5502)。赭曲霉毒素A 标准品(Alexis 公司);乙腈、甲醇均为Fisher Scientific 色谱纯;试验用水均为超纯水(Milli-Q Academic 0.22 μm 超纯水机);磷酸盐缓冲液(PBS,16 g 氯……
