邸福川，王淑芳，何 佩

（天祝县动物疫病预防控制中心，甘肃 天祝733299）

牦牛在O 型-亚洲Ⅰ型二价苗一免、二免（一免后一月）、三免（二免后6月）后，每月采样，采用液相阻断ELISA 试验方法测定牛血清样品中O 型-亚洲Ⅰ型口蹄疫抗体水平，并计算免疫抗体的群体合格率。在30d时，O 型口蹄疫免疫抗体群体合格率分别为76.7%、90%、100%；亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体群体合格率分别为76.7%、85%、90%。60d 时O 型免疫抗体群体合格率降到72.5%、85%、100%，亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体群体合格率分别降为56.6%、80%、90%。二免的牛口蹄免疫抗体群体合格率在120d内都能在70%以上；三免后5～6月内抗体维持在60%～70%之间。

多年来，我们常用牛羊口蹄疫O 型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗预防牛羊口蹄疫，A 型苗用量不多。对免疫后的抗体检测，仅限于O 型口蹄疫抗体水平检测，方法常用易操作的间接血凝试验或3ABCELISA 法，省略了亚洲1型抗体水平评估。研究证明，口蹄疫液相阻断ELISA 抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性，现被大量应用于口蹄疫免疫抗体水平的检测中。本试验利用中国农业科学院兰州兽医研究所研制的O 型口蹄疫、亚洲1型免疫抗体液相阻断ELISA 试剂盒，对牛不同时间和不同次数免疫后，2个型的抗体合格率作了跟踪监测，时间跨度为12个月，通过监测，找出个体达到99%保护，群体抗体合格率全面达到70%以上的最简便、最有效免疫程序，为制定天祝白牦牛口蹄疫二价苗免疫程序提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 牛羊口蹄疫O 型--亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗 中牧实业股份有限公司生产，批号1201001和1201003。

1.1.2 试验动物 选用天祝县华藏寺镇一家牦牛育肥场-牧阳养殖场，是一个饲养管理正规、免疫规范的规模化牛场。饲养牦牛约300头.选取3群1岁左右健康、营养良好、未接种过口蹄疫疫苗的牦牛。

1.1.3 诊断试剂 O 型口蹄疫免疫抗体液相阻断ELISA 试剂盒由中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号2012030101、2012070601、2012091001。亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体液相阻断ELISA 试剂盒由中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号2012030102、2012072102、2012100902。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 试验牛分3组，每组10头，分别为一次免疫组，第30d二次免免疫组，第180d三次免疫组，计量按照疫苗使用说明书的规定进行操作，分别于末次免疫后30、60、90、120、150、180d采集血样，制备血清样品共360份。

1.2.2 检测方法 用国家标准GB／T18935-2003中的液相阻断酶联免疫吸附（LBP-ELISA）。

1.2.3 判定标准 以病毒抗原对照平均D 值的50%为临界值，被检血清D 值大于临界值的孔为阴性孔，小于临界值的孔为阳性孔，阳性孔的最高稀释度为该血清的抗体效价。O 型口蹄疫LPBELISA 抗体效价≥1∶128 为99%保护，效价≤1∶16 不保护；1∶22 ～1∶90 为50%保护。亚洲I型口蹄疫试验标准同O 型检测标准。存栏家畜的抗体合格率≥70%时判定为群体免疫合格。

2 结果与分析

2.1 牛O 型口蹄疫不同免疫次数抗体效价结果。3组牦牛在1次免疫后在不同时间抗体检测保护率比例，详见表1。

表1 牛O 型口蹄免疫抗体效价合格率统计表 %

从表1看出，无论是一次、二次还是三次免疫后30d到60d之内，抗体合格率均在70%以上或接近高峰，仅进行一次免疫的组免后30d 时免疫抗体群体合格率虽能达到农业部规定的标准，但免疫抗体群体合格率下降速度较快，一免后60d时免疫抗体群体合格率降到73.3%，临近农业部规定标准，维持合格仅2个月；二免后一个月合格率为90%，比相同时间的一免合格率72.5%提高了17.5个百分点；合格率维持了4个月；三免时间是二免5月后，当时平均合格率为60%，30d 后采样检测合格率达到了100%，比起2免的55%提高了45个百分点，6个月内合格率均在70%以上，达到了农业部规定标准。2.2 牛亚洲1型口蹄疫不同免疫次数抗体效价合格率结果。详见表2。

表2 牛亚洲1型口蹄免疫抗体效价合格率统计表 %

从表2看出，仅进行一次亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫的组，在疫苗免疫后30d抗体合格率为76.7%，第60d时迅速下降低于农业部规定的群体合格率标准，仅仅维持了一个多月，免疫效果不理想；二免后直到120d还能达到70%的合格率；三免后一个月比二免同时间的合格率60%提高了30 个百分点，并且5个月内合格率达到70%以上。

3 讨论

3.1 从检测结果看出，一次免疫后，O 型和亚州1型口蹄疫抗体上升的不快，并且下降很快，加强没有后抗体上升快并且持续时间也长。据了解，首免后可以诱导免疫动物对抗原产生免疫记忆，再次进行免疫时动物体内的记忆细胞会被迅速激活，从而诱导机体产生高效的Ig G 抗体。所以，一免后只有及时进行加强免疫才能保证牛群口蹄疫抗体群体合格率超过农业部规定标准。

3.2 牦牛群一免后60d时尽管O 型口蹄疫抗体群体合格率仍高于农业部规定标准，但亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体群体合格率在一免后30～60d之间时已降低于农业部规定标准，所以牛首次应用二价灭活苗免疫后应在30 日龄左右及时加强免疫，以免产生亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫空白期。本研究表明，牛群首免牛羊口蹄疫O 型，亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗，30～60d内后加强免疫，5～6个月后第三次免疫，可以保证牛群的O 型和亚洲Ⅰ型口蹄取得良好的免疫效果。

3.3 牛免疫牛羊口蹄疫O 型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗后产生的O 型口蹄疫平均效价和群体合格率与亚洲Ⅰ型总体上呈正相关，说明用二价苗进行免疫时，可以使牛同时获得O 型和亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体，所以在生产实际中应用二价灭活苗能够很好地预防口蹄疫。

3.4 通过一年的跟踪检测，不论是O 型口蹄疫还是亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫，牛群在进行2 次以上强化免疫后，免疫抗体群体合格率不但高而且维持的时间长，说明对牛群每年进行3次强化免疫，可以使免疫抗体平均效价高而且维持时间长，因此在本地免疫口蹄疫疫苗后应及时、定期用科学的方法进行口蹄疫免疫抗体群体合格率监测，通过统计分析监测数据对免疫效果进行准确评估，并且结合疫情流行动向、疫苗效价及场（户）自身防疫条件等多种因素，制定适合本地的免疫程序。

［1］ 杨苏珍，卢曾军等.牛、羊、猪人工感染口蹄疫病毒3ABC 抗体的变化［J］.甘肃农业大学学报，2006（5）：22-26.

［2］ 李静，张鲁安.奶牛口蹄疫O-AsiaⅠ型双价疫苗母源抗体消长情况的观察［J］.中国畜牧兽医，2008，35（4）：69-70.