汪天杰，刘永松，韦 兵

（1. 广州出入境检验检疫局，广东广州 510623；2. 天河出入境检验检疫局，广东广州 510623）

澳大利亚进境种羊副结核感染情况调查

汪天杰1，刘永松1，韦 兵2

（1. 广州出入境检验检疫局，广东广州 510623；2. 天河出入境检验检疫局，广东广州 510623）

[目的]为摸清澳大利亚进境种羊副结核病的感染情况。[方法] 采用皮内变态反应试验（TST）和酶联免疫吸附试验（ELISA）对6810头种羊进行调查。[结果] 104头羊副结核病检测呈阳性，阳性率为1.53%。[结论] 澳大利亚进境种羊副结核病的感染率虽然不高，但此病严重威胁着羊业的发展，应该高度重视该病的防控。

澳大利亚；进境种羊；副结核病；调查

羊副结核病是由副结核分枝杆菌（Mycobacterium avium subsp Paratuberculosis，MAP）引起的慢性消化道疾病，以顽固性腹泻、渐进性消瘦、肠黏膜增厚并形成皱襞为特征。我国农业部将其划为二类动物疫病。该病在全世界分布广泛，且发病率呈上升趋势，对养殖业造成了严重的经济损失[1]。对于副结核病，目前尚无有效的治疗方法，检出、监测、隔离、淘汰感染动物和建立纯净的种群是唯一办法。今后，随着我国动物进出口贸易的增加，携带动物疫病的风险势必会上升，因此加强相关疫病的监测和调查，具有非常重要的意义[2]。

近年来，我国每年从国外进口大量的种羊，澳大利亚是主要的出口国。为了解从澳大利亚进境种羊感染副结核病的情况，使用皮内变态反应和酶联免疫吸附试验对2004-2014年间进境的6810头种羊进行了副结核病的调查研究[3]。

1 材料和方法

1.1 研究对象及样品

2004—2014年，从广州口岸入境的15批共计6810头种羊。用一次性无菌注射器（20 mL）颈部采血8-10mL，然后将血液转移到真空采血管中，实验室分离血清，-20℃保存备用。

1.2 主要试剂

禽型结核菌素（Avian），由新西兰AgriQulity公司生产，每毫升含25000IU禽型结核菌素；副结核病ELISA诊断试剂盒，由美国IDEXX公司生产。

1.3 方法与结果判定

1.3.1 皮内变态反应试验（TST）。在羊的颈侧中部上三分之一处剪毛后接种，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，做好记录。按照常规方法，用注射器吸取0.1mL禽型结核菌素在颈部皮内注射。注射后48h、72h，分别观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量术部皮皱厚度。

将接种后72h的皮厚度减去接种前的皮厚度，如果皮厚增加2mm以上时，可判定迟发型变态反应阳性，皮厚肿胀差不超过2mm为阴性。

1.3.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。具体操作过程及结果判定标准严格按照试剂盒说明书进行。对检出的可疑样品进行复检，结果仍为可疑时，则判为阳性。

2 结果与分析

2.1 检测结果

根据我国与澳大利亚双边议定书的要求，皮内变态反应和酶联免疫吸附试验的任一结果呈阳性反应，即可判定该动物为阳性。经对进境的15批6810头种羊进行皮内变态反应试验和血清样本检测，结果共有104头阳性，总阳性率为1.53%。（详见表1）。

表1澳大利亚进境种羊副结核检测结果

2.2 结果分析

检测结果显示，澳大利亚进境种羊中存在副结核病，各批次羊副结核病的阳性率在0～2.92%之间。其中，ELISA试验检出的阳性数量较多；有两批羊同时存在TST试验和ELISA试验检测结果阳性。

3 讨论

3.1 我国应重视进境羊的副结核病检疫

副结核病是一种慢性进行性传染病，是羊的三大疫病之一，严重威胁养羊业的发展。因此，副结核病是我国进境种羊检疫工作中的必检项目，被写入我国与贸易国的双边条款中。

我国实施国外预检制度，只有经检疫合格的种羊方允许出口到中国，但调查结果显示，从澳大利亚进境的多批种羊中均检出该病，虽然阳性率不高，但应引起重视。国家应进一步加强入境动物检疫，严格遵照双边协议开展检测，有效的预防和控制羊副结核病的传入，保障国内畜牧业的发展和人类身体健康。

3.2 联合使用皮内变态反应和ELISA方法，可有效提高羊副结核病的检出

动物机体首先产生细胞免疫应答，然后才产生体液免疫应答。何昭阳等[4]曾报道对感染副结核菌的病牛，同时进行皮内变态反应和ELISA检测，结果发现皮内变态反应阳性出现比 ELISA 阳性早数月。迟发型变态反应是由免疫细胞参与的反应，被病原致敏后T细胞再次接触到该抗原时会引发变态反应，适用于感染初期检测[5]。ELISA试验检测血清抗体，需要机体达到一定的抗体水平，此时机体已进入体液免疫反应时期。因此，采用皮内变态反应和ELISA方法的联合使用可有效提高羊副结核病的检出，符合当前进境动物的检疫要求。

3.3 ELISA试验阳性率较高的原因可能是羊处于体液免疫应答阶段

在15批种羊的检测过程中，仅有2批次同时出现TST和ELISA结果阳性，且阳性结果重合的数量较少（3头），可能与感染动物所处的免疫阶段有关。当动物处于感染初期时，机体以细胞免疫应答为主，此时可能TST试验阳性而ELISA 试验阴性；当机体细胞免疫应答和体液免疫应答同时存在时，则可能TST和ELISA试验结果皆为阳性；当TST试验阴性而ELISA试验阳性时，可能体液免疫突出，而机体细胞免疫应答较弱[6]。

[1] de Lisle G W，Yates G F，Montgomery R H. The emergence of Mycobacterium paratuberculosis in farmed deer in New Zealand-a review of 619 cases [J]. J NZ Vet，2003，51：58-62.

[2] 曹志玲.副结核病随进境动物引入的风险分析[J]. 检验检疫学刊，2009，19 （2）：66.

[3] 李朝君，陈京彩，宋英俊，等.进口奶牛副结核病感染情况的调查及分析[J].中国动物检疫，2012，29（4）：74-75.

[4] 何昭阳，顾万钧，陈奖励，等. 牛副结核抗体的检测以及各种检测方法的关系[J]. 吉林农业大学学报，1991，13（3）：50- 52.

[5] 颜思通，林志雄，朱道中，等.微量补体结合试验检测牛、羊副结核病的研究[J].中国动物检疫，2004，21（11）：23-26.

[6] 徐贤坤，黄小武，蓝纪，等.两种奶牛结核病检测方法的比较[J].畜牧与兽医，2010，42（2）：29-33.

Survey and Analysis on Paratuberculosis Prevalence in the Imported Breeding Sheep Herd from Australia

Wang Tianjie1，Liu Yongsong1，Wei Bing2
（1. Guangzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623；2. Tianhe Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623）

In order to understand the paratuberculosis infection status in the imported sheep herd from Australia ，6810 sheep were detected by means of TST and ELISA. Result showed that 104 sheep were positive with a positive rate of 1.53%. The positive rate was considered as low，however，strict prevention and control measures should be taken due to its serious thread to sheep industry..

Australia；imported sheep；paratuberculosis；survey

S858.26

：B

：1005-944X（2015）02-0032-03