阮 麟，王有良

彭州市人民医院 检验科（彭州 611930）

紫外线照射是医院和很多行业常见的消毒方法，其作用机制是使细菌DNA相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，从而破坏DNA构型，干扰其正常复制，导致细菌突变或死亡。紫外线照射消毒具有方便、快捷、有效、不良反应小和无二次污染等优点，被广泛应用于空气、环境和物体表面等的消毒，但不规范的紫外线照射消毒并不能达到预期的消毒效果。细菌在进化过程中会发生遗传变异，对紫外线的敏感程度也可能会发生变化，紫外线常规消毒能否杀灭常见细菌，杀菌效果是否会发生变化，都是需要研究的问题。为进一步了解紫外线的杀菌能力，确保紫外线的杀菌效果，为临床应用紫外线消毒或治疗提供参考，本研究采用紫外线照射对临床5种常见细菌进行消毒观察，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验菌株来源 菌株均来源于我院临床标本，经梅里埃Vitek 2compact全自动微生物鉴定仪鉴定确认为：1）革兰阳性菌：金黄色葡萄球菌；2）革兰阴性菌：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌。

1.1.2 质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、肺炎克雷伯菌ATCC700603和鲍曼不动杆菌ATCC19606购于卫生部临检中心。

1.1.3 培养基制备 营养琼脂粉购于杭州天和生物公司，按照试剂说明书要求配制营养琼脂，营养琼脂平板直径90cm、厚度3mm。平板无菌试验：抽验5% 营养琼脂平板，无细菌生长；质控菌株接种营养琼脂上，35℃温箱，24h细菌生长良好。

1.1.4 仪器 力申 HF－safe－900超净工作台、上海医疗器械PYX－YDH40X50型油电二用恒温培养箱、海尔生物安全柜（型号：HR40－ⅡA2，内置紫外线40W，强度130μW／cm2、距工作台面680cm）。

1.2 实验方法

1.2.1 菌悬液的制备 用无菌生理盐水将5种细菌菌株分别稀释配制成0.5个麦氏单位浓度，相当于1.5×108cfu／mL菌悬液备用。

1.2.2 “干燥环境”下紫外线照射 将每种细菌取40μL菌悬液，分别涂布于无菌滤纸上（直径6mm），并置于5个无菌平皿，每种细菌重复3次，共75个平皿。待菌液干燥后，在室温24℃、相对湿度41%条件下，将平皿放于生物安全柜中，一字排开，打开培养基盖，开紫外灯垂直照射，立即计时。照射0、10、30、60和90min后，依次取出平板，倾注营养琼脂，放入35℃ 孵育箱内培养48h。用含有干燥菌液（0min照射）的平皿做阳性对照，观察细菌生长情况。

1.2.3 “湿环境”下紫外线照射 5种细菌分别取菌悬液分区接种于5个90cm营养琼脂平皿上，每种细菌重复3次，共75个平皿。将平皿一字排开放于生物安全柜，打开培养基盖，开紫外灯垂直照射0、10、30、60和90min后，依次取出平板，放入35℃孵育箱内培养48h。将0min照射的平皿做阳性对照，观察细菌生长情况。

2 结果

2.1 “干燥环境”和“湿环境”判断细菌是否生长的标准

“干燥环境”下“阳性”，表示3个平行营养琼脂平板有菌落生长；“阴性”表示3个平行营养琼脂平板无菌落生长；“湿环境”下“阳性”，表示营养琼脂平板划线区有菌落生长，“阴性”表示营养琼脂平板上划线区无菌落生长。

2.2 对照组（0min照射）细菌生长情况

“干燥环境”和“湿环境”下，5种细菌在35℃ 孵育箱内培养48h后观察平皿，均有菌落均匀生长（表1、表2）。

2.3 观察组（10、30、60和90min 照射）细菌生长情况

“干燥环境”下紫外线照射10min，可杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌4种细菌，不能杀灭肺炎克雷伯菌；紫外线照射30、60和90min，可完全杀灭5种常见致病菌（表1）。“湿环境”下，紫外线照射10min，不能杀灭常见5种致病菌；紫外线照射30、60和90min，可杀灭铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌2种细菌，不能杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌3种细菌；紫外线照射60和90min，可完全杀灭5种常见致病菌（表2）。

表1 “干燥环境”下紫外线照射5种细菌在营养琼脂上生长情况

表2 “湿环境”下紫外线照射5种细菌在营养琼脂上生长情况

3 讨论

紫外线是一种低能量的电磁波，其光谱范围为100～400nm，杀菌作用最强的部分为250～260nm。紫外线辐射使细胞内DNA分子发生多种形式的结构变化，导致其被破坏；同时对蛋白质、酶及其与生命有关的物质也有一定作用，最终引起细菌体内生化过程的破坏而造成细菌死亡。紫外线生物学作用的特点是穿透力弱，细菌需暴露在紫外线下，仅应用于空气与物体表面的杀菌。紫外线在杀菌消毒过程中可能产生臭氧，诱发光氧化反应而对眼睛角膜和皮肤造成损伤，从而引起呼吸道炎症病变。因此要求在消毒过程中避免有人员的存在，以免发生不必要的损伤［1］。

紫外线杀菌效果与其照射强度、时间、距离和角度密切相关，受环境相对湿度影响也很大。王云凤等［2－3］报道在无人活动的室内可将30W 低臭氧紫外线灯（按1.5W／m2计算）悬挂室内中央2.0～2.5m高处，每次时间不少于30min，在环境“干燥”的情况下可达到消毒目的，与本次实验结果一致，但在特殊气候环境下（如高湿度）难以保持。本实验显示在“湿环境”条件下，细菌在培养基中，常规的紫外线消毒方法30min不能完全杀灭5种细菌，照射时间延长到60min以上方可灭菌。目前湿度对紫外线杀菌的影响尚无一致看法，武惠斌等［4］报道相对湿度在60%～70% 以上，细菌的杀灭率下降，最适为40%～60%，超过80% 甚至有激活作用。相对湿度由33%增至56%时，杀菌能力可以减少到原有的1／3。

李香云等［5］报道，杀灭细菌芽胞，发生变异（如L型细菌）和细菌的数量越多，均需增加紫外线的照射强度或时间，才能达到杀菌效果。细菌的种类、数量及不同生长阶段对紫外线作用的敏感性均有一定差别。各种微生物对紫外线的耐受力不同：紫外线对杆菌杀菌能力比球菌强，真菌胞子对紫外线的耐受力最强，细菌芽胞次之，最差的是繁殖体型微生物，对结核杆菌有显著的耐受性，对生长期细菌敏感［6－7］。在同一种细菌的不同菌株、不同培养物和不同代之间，其对紫外线的抵抗力也存在一定差异。

为了保证杀菌效果，应加强对紫外线灯管理。曹璟宜［8］建议紫外线灯管累计使用时间达750h应列为标准使用时限，累计达1 000h为最长使用时限，必须更换新灯管。在实际工作中，每支紫外线灯管应建立使用登记本，紫外灯管号、灯管规格、灯管清洁度、辐射强度、检测日期、累计消毒时间数以及使用过程中出现的问题等应作详细记录，保证紫外灯管的使用完好率和灭菌效果达标率。同时室内消毒时，应保持清洁干燥，在温度＜20℃，湿度＞60%时，适当延长照射时间。消毒物表时，易受物体遮挡形成死角，使消毒不彻底，影响消毒效果。所以紫外线要直接照射，不能有任何遮挡物，要保持足够时间和强度［9－12］。

细菌在进化过程中会发生遗传变异，紫外线对细菌具有诱变作用，可能是由于经紫外线照射后，细菌DNA发生突变，表达新的基因或原有的基因失活，使紫外线的杀菌敏感程度和杀菌效果发生变化。在今后工作中，细菌对紫外线敏感性有待进一步的观察研究。

本次实验显示，紫外线照射对临床5种常见致病菌有显著抑制和杀灭作用。同种细菌在“干燥环境”和“湿环境”条件下对紫外线消毒杀菌效果存在一定差异，“湿环境”条件下紫外线消毒杀菌时间需延长；同一类细菌对紫外线消毒杀菌效果也存在一定差异。紫外线消毒杀灭临床常见致病菌的最佳效果需持续照射60min以上。本实验通过对5种常见细菌在不同环境下对紫外线敏感性的观察，为临床应用紫外线消毒或治疗提供了参考。

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［3］王云凤，刘奕.紫外线对多药耐药鲍曼不动杆菌杀灭效果观察［J］.中华全科医学，2012，10（2）：294.

［4］武惠斌，巴福森，宿双宁，等.影响紫外线杀菌效果的因素［J］.疾病控制杂志，2002，6（4）：371－372.

［5］李香云，刘礼，张长杰，等.冷光紫外线照射杀菌效果的实验观察［J］.中国现代医学杂志，2006，16（20）：3143－3146.

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