心康冲剂对慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA表达的影响
2014-11-27聂孝平王建国毛湘屏陈朝晖毛以林
谭 雄,张 辉,聂孝平,王建国,毛湘屏,陈朝晖,毛以林*
(1.湖南中医药大学第二附属医院,湖南 长沙410007;2.湖南中医药大学,湖南 长沙410208)
慢性心力衰竭 (Chronic heart failure,CHF)是各种心血管疾病的终末阶段,病死率高,水潴留是其最重要的病理生理变化之一[1]。 研究表明CHF 时水潴留机制的主要途径:心输出量下降,由下丘脑产生的血管加压素(arginine vasopressin,AVP)水平升高,作用于肾脏集合管主细胞AVPV2 受体,通过异三聚体G 蛋白(Gs 蛋白)激活膜内腺苷酸环化酶,使主细胞内cAMP 升高, 继而激活胞质内蛋白激酶A(protein kinase A,PKA),使AQP2 发生磷酸化并由胞浆囊泡向管腔膜转移,通过胞吐作用融合并嵌入管腔膜,水通道开放,形成水潴留[2]。 前期临床研究表明,临床效方心康饮对慢性心衰合并利尿剂抵抗的患者具有良好效果[3],现将该方制作成颗粒冲剂,观察其对慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA的影响,进一步探讨其抗心衰作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SPF 级雄性SD 大鼠70 只, 体质量180~220 g, 由湖南斯莱克景达实验有限公司提供动物许可证号:SCXK(湘)2011-0003。
1.1.2 药物 盐酸多柔比星,深圳万乐药业(批号:1206E5); 芪苈强心胶囊, 石家庄以岭药业 (批号:123901); 心康冲剂(黄芪30 g, 白参10 g, 陈皮10 g,茯苓15 g,桂枝6 g,制附片10 g,薏苡仁30 g,生姜皮10 g,大腹皮10 g,柴胡5 g,升麻5 g,桔梗5 g,砂仁6 g),经湖南省中医院药剂科制成颗粒剂(15 g/包),每克相当于生药3.38 g。
1.1.3 试剂 常规化学试剂由北京化学试剂公司提 供;Tris、Trizol、DEPC 均 由Sigma 提 供;SYBGREEN PCR Mix Mix、Taq 酶、 逆 转 录 试 剂 盒、DL1000 DNA Marker、dNTP 均 购 于Genstar;EDTA由Fermentas 提供;E.B.购买于ABI;水合氯醛由天津科密欧化学试剂公司提供。
1.1.4 仪器 旋涡混合器VORTEX-5、 摇床ZD-2008(江苏海门其林贝尔仪器公司);台式冷冻离心机5417R (德国eppendorf 公司);……
