赵艳琴，吴元华，赵秀香，安梦楠，陈建光

1沈阳农业大学/植物保护学院,辽宁沈阳市东陵路120号 110866；

2 内蒙古民族大学/农学院,内蒙古通辽霍林河大街22号 028043

烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）SRAP-PCR 体系建立及优化

赵艳琴1，2，吴元华1，赵秀香1，安梦楠1，陈建光1

1沈阳农业大学/植物保护学院,辽宁沈阳市东陵路120号 110866；

2 内蒙古民族大学/农学院,内蒙古通辽霍林河大街22号 028043

采用烟草靶斑病菌YC-9, LJT-8和QYS-7为DNA模板,初步筛选SRAP引物组合；采用L16(45)正交试验设计,对烟草靶斑病菌的SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs, Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板浓度等5个因素进行优化试验。结果表明：共筛出13对扩增条带清晰且多态性好的引物组合；烟草靶斑病菌的最佳SRAP反应体系为Mg2+浓度2.0 mmol/L、dNTP浓度200 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.8 U、引物浓度140 mmol/L、模板DNA 20 ng及1×PCR buffer,反应总体积为20 μL；各因素对SRAP-PCR扩增反应结果影响的差异较大,依次为Taq DNA聚合酶＞引物＞ Mg2+＞ dNTPs=模板DNA。

烟草靶斑病菌；正交试验设计；反应体系优化；引物筛选

SRAP (Sequence related amplified polymorphism)技术是2001年Li和Quiros在芸苔属植物上开发出的新型分子标记技术[1]。该技术无需任何序列信息即可直接 PCR 扩增,从DNA 水平上直接检测基因组DNA 的多态性[2],相比此前广为应用的RAPD(Random amplification polymorphism DNA)技术以及AFLP (Amplified fragment length poly-morphism)等技术,SRAP技术稳定性和重复性好,并且成本低,简单快速[3]。目前SRAP技术已成功在多种植物遗传图谱和多样性分析的研究中应用[4-5],以及在植物病原物的遗传多样性研究中应用[6-7]。

烟草靶斑病（Thanatephorus cucumeris(Frank)Donk）在许多国家都有发生[8-10],是一种危害严重的烟草叶部病害。我国烟草靶斑病主要发生在烟草旺长期和成熟期,潜育期短、流行性强,严重影响烟叶的品质和产量[11]。……