刘亚芹，杨振斌，冯冬霞

（聊城市传染病医院 检验科，山东 聊城252000）

HAIN是由德国Hain Lifescience公司推出的一种检测结核菌对异烟肼和利福平是否耐药的技术，该技术基于多重PCR扩增，扩增产物通过反向杂交技术与预先固化在试纸条上的特异性探针杂交，通过杂交条带的显色情况来判定结核菌对利福平和异烟肼的耐药性。HAIN技术6h出结果，比常规比例法药敏（60天）快的多。原发耐药结核病是指没有接受过抗结核药物治疗而发生耐药的菌株感染引起的疾病，对该病的耐药检测常规采用比例法，我国每年新发结核病人近百万，如此严重的疫情，急需新的检测方法，我们通过收集新发涂阳结核病人的痰标本，对标本分别进行培养、比例法药敏和HAIN（线性探针）检测，来分析HAIN在原发耐药结核检测中的可行性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 标本来源 随机抽取我市2012年7月至2013年3月新发痰涂片阳性的病人338例，选其痰标本2个。一个用HAIN检测，一个进行培养和比例法药敏。

1.1.2 标准菌株 H37RV即结核分枝杆菌（ATC C27294），由山东省胸科医院汉光国际感染疾病研究中心赠与。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器 ①HAIN方法：生物安全柜、博日Life Touch基因扩增仪、Twincubator杂交仪、水浴锅、超声破碎仪、离心机、杂交仪，水浴锅，移液器（1000μl，200μl，10μl）3套。②培养和比例法药敏设备：培养基蒸汽凝固灭菌器，ZHN－4型，中国原子能科学研究院；电子天平，FA1604型，上海舜宇恒平科学仪器公司，精度达1／10000级。

1.2.2 试剂 ①HAIN方法，试剂：消化前处理液（4%NaOH，2.94%柠檬酸钠，NALC），无菌 PBS，无菌蒸馏水，PNM，热启动Taq酶试剂盒，分子生物级水，Genotype试剂盒，蒸馏水。……