纪勇平，赵龙友， 庄 杰，周 斌

(丽水市中心血站，浙江丽水323000)

人类血型抗原的基因频率与分布状况，随着民族和地域的不同，会有很大的差异性。畲族作为我国一个历史悠久的散居少数民族，全国约有人口70万，公元二世纪至五世纪就已经在长江中下游居住，目前主要分布在浙江和福建省的交界地带，而浙江丽水为其主要的聚居区。目前国内对于畲族稀有血型的筛查和研究较为局限，部分红细胞血型的频率尚不清楚。为获得畲族人群更多的血型抗原信息资料，进一步开展红细胞血型抗原的生物学研究，同时解决临床稀有血型输配血困难等问题，我们对浙江丽水地区3 580例非血缘关系的丽水地区畲族献血者样本进行了抗Ena、抗 H、抗 Lub、抗 Ge、Jk(a-b-)、抗 Wrb和成人i阳性等红细胞稀有血型的频率与分布情况进行了研究。

一、材料和方法

1.样本来源 选择无血缘关系且父母3代均为畲族的献血者为研究对象，共计3 580例，其中男2 055例，女1 525例，年龄18～55周岁。其中O型样本1 498例。分别采取静脉血3 mL，用EDTA抗凝，将受检者血样配制成3%红细胞悬液备用。

2.试剂仪器 抗-H、抗-i、和鼠源性抗-GPA、抗-GPC 、抗-Lub(批号:20120710)、抗-Wrb以及羊抗鼠IgG(二抗)均由上海市血液中心提供。分析纯尿素试剂:使用前配制为2 mol/L浓度的应用液。KA-2200血库专用离心机(KUBOTA公司)、振荡器(Heidolph Titramax 101)、平板离心机(KUBOTA 8100)，U型96孔微量板(苏州康容生物公司)。

3.筛选方法 96孔微量板法筛选成人i阳性血型、孟买/类孟买血型和Ge-血型 在96孔微量板中加入3%受检红细胞悬液20μL，并加入对应的抗体应用液20μL。置振荡器上振荡15 s混匀后在平板离心机以90×g离心5 min，轻敲板侧观察结果，红细胞凝集为阳性，反之为阴性。成人i血型筛选，以新鲜脐血红细胞作阳性对照。孟买/类孟买血型筛选只选择初筛为O型的红细胞样本。

96孔微量板法筛选 Lub-血型、Ena-血型和Wrb-血型在96孔微量板中加入受检红细胞悬液20μL，并加入对应的抗体20μL，800 rpm振荡15 s混匀。将混匀后的96孔板加盖置37℃水浴30 min，再加入二抗40μL，振荡混匀后在平板离心机以90×g离心5 min，轻敲板侧判读结果。红细胞凝集为阳性，反之为阴性。

96孔板筛选Jk(a-b-)表型每孔加入受检者红细胞悬液20μL及2 mol/L尿素溶液100μL，800 rpm振荡15 s混匀，在平板离心机上560×g离心1 min，判读结果。Jk(a+b+)、Jk(a+b-)、Jk(a-b+)表型红细胞在尿素溶液中立即溶血，而Jk(a-b-)表型红细胞在2M尿素下可保持30 min内不溶血。

稀有血型的确认经上述方法初筛为稀有血型的样本，分别通过盐水凝集试验或间接抗球蛋白试验等血清学试管方法进行复查确认。

二、结果

在3 580例畲族献血人群中分别筛选出Jk(a-b-)及 wrb-各 1例;未发现 Ena-、Ge-、Lub-、成人i阳性等表型;对其中1 498例O型献血者进行筛选，未筛选出孟买/类孟买血型。结果见表1。

表1 浙江丽水畲族献血人群稀有血型筛选结果

三、讨论

中国是一个人口众多的多民族国家，不同的民族和地域，人类血型抗原频率分布不尽相同。目前国内对于畲族稀有血型研究较少［1-2］，而浙江丽水畲族献血人群 Lub-、Ena-、Ge-、Wrb-、Jk(ab-)、H-和成人i等红细胞血型抗原的筛查目前尚未见报道。

Kidd(Jk)血型系统的相关抗体可引起速发和迟发性溶血性输血反应，偶尔可引起新生儿溶血病，对Jk(a-b-)表型及其分子生物学研究，对于预防输血反应有较为重要的免疫学意义。本研究对3 580例畲族献血者样本筛查发现，浙江丽水畲族献血人群中Jk(a-b-)表型频率为0.028%，与国内报道的广西壮族人群Jk(a-b-)表型频率为0.044%［3］，上海地区人群为0.004%［4］和新疆地区汉族人群为0.006%［5］有一定差异，而与广东番禺地区献血人群的0.029%［6］接近，低于太平洋群岛波利尼亚人 0.10%～0.14%［7］，表明 Jk(a-b-)的表型频率存在地区及民族分布的差异性。

抗-Wrb多为IgG性质的抗体，可引起溶血性输血反应和新生儿溶血病，Wrb抗原阴性多存在于南美印第安人、美国土著人与蒙古人中。本研究调查在3 580例畲族献血者样本中筛选出一例Wrb-表型的稀有血型，表型频率为0.028%。而在国内新疆维吾尔族、广州番禺地区汉族、广西壮族等人群调查中均未发现相同的表型。

同时，在本次筛查中3 580例畲族献血者样本中未发现 Ena-、Ge-、Lub-、成人 i等稀有表型，对其中1 498例O型献血者进行筛选，未筛选出孟买/类孟买血型。而在国内广西壮族及广东番禺地区汉族人群的调查中Lub-表型频率分别为1.26%和 0.048%［3，6］。1989年台湾 Yang 等［8］曾报道922名中国人全部为Lu(a-b+)表型。

本研究针对浙江丽水地区畲族献血人群Ena-、H-、Lub-、Ge-、Jk(a-b-)、Wrb-和成人 i阳性等红细胞稀有血型的频率筛查，结果显示浙江丽水地区畲族作为一个少数民族群体，人群中稀有血型的表型频率有其特点。同时本次筛查为进一步开展红细胞血型抗原的生物学研究，提供了详实的畲族少数民族的血型信息和数据。为有针对性地向本地区少数民族提供良好的输配血服务，提高临床输血安全发挥积极作用。

［1］周火根，金 蕾，傅启华.浙江畲族Kidd、Duffy血型基因型的调查［J］.中国输血杂志，2001，14(4):239.

［2］沈柏涛，王景仙.浙江畲族Duffy血型分布［J］.临床输血与检验，2001，3(1):46.

［3］焦 伟，黎海澜，王 晨，等.广西侗族人群稀有血型筛选［J］.中国输血杂志，2011，24(5):435-436.

［4］朱自严，沈 伟，陈和平，等.上海地区部分人群Jk(a-b-)、Dib-、Wrb-、K0、Ena-、Tja-、Ge-稀有血型筛选［J］.中国输血杂志，2002，15(4):232-233.

［5］方春富，吐逊古丽，周丽君，等.新疆人群稀有血型筛选结果分析［J］.中国输血杂志，2011，24(8):696-697.

［6］严康峰，邓诗桢，曾玫玫，等.广州番禺地区献血人群稀有血型的筛选［J］.中国输血杂志，2007，20(4):290-291.

［7］朱发明，严力行.Jk(a-b-)表型分子生物学研究进展［J］.国外医学输血及血液学分册，2003，26(5):424-426.

［8］李 勇，马严学.实用血液免疫学血型理论和实验技术［M］.北京:科学出版社，2006:237-238.