周玉波

摘要：采用NaNO2-AlCl3-NaOH法测定枇杷叶不同炮制品中总黄酮含量，以精制枇杷叶多糖测得枇杷叶多糖对葡萄糖的换算因子，苯酚-硫酸法测定枇杷叶不同炮制品中多糖的含量，比较枇杷叶生品与不同炮制品中总黄酮和多糖的含量差异。结果表明，枇杷叶生品总黄酮含量3.40%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品总黄酮含量分别为3.77%、4.02%、2.88%、3.98%；枇杷叶生品多糖含量9.16%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品多糖含量分别为9.51%、7.95%、10.09%、9.19%。枇杷叶经过炮制后多糖和总黄酮的含量均有变化，其中总黄酮含量以姜汁炒枇杷叶中的为最高，多糖含量以姜汤煮枇杷叶中的为最高。

关键词：枇杷叶；炮制品；总黄酮；多糖

中图分类号： R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0270-03

1材料与方法

1.1仪器

HP8453型紫外-可见分光光度计（惠普公司）；80-2台式低速离心机（上海手术器械厂）；METTLER AL204型分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；FZ102粉粹机（北京市永光明医疗仪器厂）。

1.2试剂与试药

枇杷叶（购于浙江震元医药连锁有限公司，产地为浙江），经鉴定为蔷薇科枇杷属植物枇杷的干燥叶。D-无水葡萄糖 （购自中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904），芸香苷（购自中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707），重蒸苯酚，浓硫酸、乙醇、亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠等试剂为分析纯。

1.3样品的制备

1.3.1枇杷叶及其炮制品的制备生枇杷叶：取枇杷叶 20 g，用纯净水洗后烘干。

蜜炙枇杷叶：取炼蜜冷开水4 ∶1稀释后加入枇杷叶丝拌匀，闷润，置锅内文火加热（炒干），炒至微黄色、不黏手时，取出晾凉。每100 kg枇杷叶，用炼蜜20 kg。

姜汁炒枇杷叶：枇杷叶丝加姜汁拌匀，润透后置锅内文火加热，炒干，取出晾凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

姜汤煮枇杷叶：取干姜片，加水与枇杷叶同煮至水尽，取出枇杷叶，炒干，放凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

清炒枇杷叶：取净枇杷叶，置锅内，用文火加热，炒至微焦，有香气，取出放凉。

1.3.2枇杷叶总黄酮样品溶液及对照品的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制品粉末各1.0 g，用75%乙醇50 mL加热回流提取3次，每次2 h，趁热过滤，滤液在60 ℃下减压浓缩蒸去乙醇后，于分液漏斗中用相同体积的乙醚萃取2～3次，除去叶绿素及蜡质等，最后用75%乙醇定容至50 mL，即得总黄酮样品溶液。

精确称取芸香苷0.019 9 g，60%乙醇定容至50 mL量瓶中，摇匀即得对照品。

1.3.3枇杷叶精制多糖的制备及其溶液的配制称取枇杷叶粉末30 g，加10倍量80%乙醇于90 ℃水浴中回流3次，每次2 h，抽滤。药渣挥尽乙醇后，加入10倍量水，加热回流3次，每次2 h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至60 mL，取出，加乙醇使醇含量达到80%，于4 ℃冰箱中过夜，过滤，干燥，即得枇杷叶粗多糖。

将粗多糖以水复溶，用Servage法[6]除蛋白 （氯仿-正丁醇，体积比4 ∶1），反复操作，用考马斯亮蓝法[7]测定至无蛋白为止。用95%乙醇调至醇浓度达到80%，4 ℃静置过夜，离心，沉淀用热蒸馏水溶解后抽滤，滤液浓缩至60 mL，再加95%乙醇使含醇量达到80%，4 ℃静置过夜，将离心后的沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，于60 ℃烘干至恒重，得精制的枇杷叶多糖。

精确称取枇杷叶精制多糖0.012 0 g，置于50 mL容量瓶中，加水溶解，摇匀定容，得浓度为0.24 mg/mL的枇杷叶精制多糖溶液。

1.3.4枇杷叶多糖样品溶液及对照品溶液的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制粉末各1.0 g，用80%乙醇50 mL加热回流2次，每次2 h，过滤后取滤渣挥尽乙醇后，用50 mL水回流提取3次，每次2 h，趁热抽滤，合并滤液，浓缩后移入50 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。

精确称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.049 9 g，置于 50 mL 容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，得浓度为 0.998 mg/mL 的葡萄糖对照品溶液。

2结果与分析

2.1枇杷叶总黄酮含量测定

2.1.1标准曲线的绘制取芸香苷对照品溶液0.5、1.0、15、2.0、2.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，依次加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加10%氯化铝溶液 0.3 mL，摇匀后放置6 min，再加4%氢氧化钠溶液4 mL，加60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min后，以随行试剂作空白参比在510 nm波长处测定吸光度D。以D为纵坐标，以芸香苷浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=10571x-0.031（r=0.999 8），说明芸香苷在0.019 9～0.099 5 mg/mL 范围内，线性关系良好。

2.1.2稳定性试验取供试品溶液1.0 mL，置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，间隔10 min测定1次，连续测定1 h，结果吸光度值的RSD为1.85%，表明供试品溶液在室温下放置60 min内稳定。

2.1.3精密度试验精确吸取芸香苷对照品溶液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，按“2.1.1”节方法测定吸光度，平行测定6份，RSD为1.39%，表明仪器精密度良好。

2.1.4重复性试验精确称取同一批次粉碎后的枇杷叶生品6份，按“1.3.2”节操作制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，RSD为227%，表明重复性良好。

2.1.5加样回收率试验精确称取枇杷叶生品1.0 g 6份，分别加入芸香苷对照品35 mg，按照“1.3.2”节方法制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，计算芸香苷平均回收率为100.71%，RSD为203%（n=6）（表1）。endprint

摘要：采用NaNO2-AlCl3-NaOH法测定枇杷叶不同炮制品中总黄酮含量，以精制枇杷叶多糖测得枇杷叶多糖对葡萄糖的换算因子，苯酚-硫酸法测定枇杷叶不同炮制品中多糖的含量，比较枇杷叶生品与不同炮制品中总黄酮和多糖的含量差异。结果表明，枇杷叶生品总黄酮含量3.40%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品总黄酮含量分别为3.77%、4.02%、2.88%、3.98%；枇杷叶生品多糖含量9.16%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品多糖含量分别为9.51%、7.95%、10.09%、9.19%。枇杷叶经过炮制后多糖和总黄酮的含量均有变化，其中总黄酮含量以姜汁炒枇杷叶中的为最高，多糖含量以姜汤煮枇杷叶中的为最高。

关键词：枇杷叶；炮制品；总黄酮；多糖

中图分类号： R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0270-03

1材料与方法

1.1仪器

HP8453型紫外-可见分光光度计（惠普公司）；80-2台式低速离心机（上海手术器械厂）；METTLER AL204型分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；FZ102粉粹机（北京市永光明医疗仪器厂）。

1.2试剂与试药

枇杷叶（购于浙江震元医药连锁有限公司，产地为浙江），经鉴定为蔷薇科枇杷属植物枇杷的干燥叶。D-无水葡萄糖 （购自中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904），芸香苷（购自中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707），重蒸苯酚，浓硫酸、乙醇、亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠等试剂为分析纯。

1.3样品的制备

1.3.1枇杷叶及其炮制品的制备生枇杷叶：取枇杷叶 20 g，用纯净水洗后烘干。

蜜炙枇杷叶：取炼蜜冷开水4 ∶1稀释后加入枇杷叶丝拌匀，闷润，置锅内文火加热（炒干），炒至微黄色、不黏手时，取出晾凉。每100 kg枇杷叶，用炼蜜20 kg。

姜汁炒枇杷叶：枇杷叶丝加姜汁拌匀，润透后置锅内文火加热，炒干，取出晾凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

姜汤煮枇杷叶：取干姜片，加水与枇杷叶同煮至水尽，取出枇杷叶，炒干，放凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

清炒枇杷叶：取净枇杷叶，置锅内，用文火加热，炒至微焦，有香气，取出放凉。

1.3.2枇杷叶总黄酮样品溶液及对照品的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制品粉末各1.0 g，用75%乙醇50 mL加热回流提取3次，每次2 h，趁热过滤，滤液在60 ℃下减压浓缩蒸去乙醇后，于分液漏斗中用相同体积的乙醚萃取2～3次，除去叶绿素及蜡质等，最后用75%乙醇定容至50 mL，即得总黄酮样品溶液。

精确称取芸香苷0.019 9 g，60%乙醇定容至50 mL量瓶中，摇匀即得对照品。

1.3.3枇杷叶精制多糖的制备及其溶液的配制称取枇杷叶粉末30 g，加10倍量80%乙醇于90 ℃水浴中回流3次，每次2 h，抽滤。药渣挥尽乙醇后，加入10倍量水，加热回流3次，每次2 h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至60 mL，取出，加乙醇使醇含量达到80%，于4 ℃冰箱中过夜，过滤，干燥，即得枇杷叶粗多糖。

将粗多糖以水复溶，用Servage法[6]除蛋白 （氯仿-正丁醇，体积比4 ∶1），反复操作，用考马斯亮蓝法[7]测定至无蛋白为止。用95%乙醇调至醇浓度达到80%，4 ℃静置过夜，离心，沉淀用热蒸馏水溶解后抽滤，滤液浓缩至60 mL，再加95%乙醇使含醇量达到80%，4 ℃静置过夜，将离心后的沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，于60 ℃烘干至恒重，得精制的枇杷叶多糖。

精确称取枇杷叶精制多糖0.012 0 g，置于50 mL容量瓶中，加水溶解，摇匀定容，得浓度为0.24 mg/mL的枇杷叶精制多糖溶液。

1.3.4枇杷叶多糖样品溶液及对照品溶液的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制粉末各1.0 g，用80%乙醇50 mL加热回流2次，每次2 h，过滤后取滤渣挥尽乙醇后，用50 mL水回流提取3次，每次2 h，趁热抽滤，合并滤液，浓缩后移入50 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。

精确称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.049 9 g，置于 50 mL 容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，得浓度为 0.998 mg/mL 的葡萄糖对照品溶液。

2结果与分析

2.1枇杷叶总黄酮含量测定

2.1.1标准曲线的绘制取芸香苷对照品溶液0.5、1.0、15、2.0、2.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，依次加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加10%氯化铝溶液 0.3 mL，摇匀后放置6 min，再加4%氢氧化钠溶液4 mL，加60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min后，以随行试剂作空白参比在510 nm波长处测定吸光度D。以D为纵坐标，以芸香苷浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=10571x-0.031（r=0.999 8），说明芸香苷在0.019 9～0.099 5 mg/mL 范围内，线性关系良好。

2.1.2稳定性试验取供试品溶液1.0 mL，置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，间隔10 min测定1次，连续测定1 h，结果吸光度值的RSD为1.85%，表明供试品溶液在室温下放置60 min内稳定。

2.1.3精密度试验精确吸取芸香苷对照品溶液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，按“2.1.1”节方法测定吸光度，平行测定6份，RSD为1.39%，表明仪器精密度良好。

2.1.4重复性试验精确称取同一批次粉碎后的枇杷叶生品6份，按“1.3.2”节操作制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，RSD为227%，表明重复性良好。

2.1.5加样回收率试验精确称取枇杷叶生品1.0 g 6份，分别加入芸香苷对照品35 mg，按照“1.3.2”节方法制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，计算芸香苷平均回收率为100.71%，RSD为203%（n=6）（表1）。endprint

摘要：采用NaNO2-AlCl3-NaOH法测定枇杷叶不同炮制品中总黄酮含量，以精制枇杷叶多糖测得枇杷叶多糖对葡萄糖的换算因子，苯酚-硫酸法测定枇杷叶不同炮制品中多糖的含量，比较枇杷叶生品与不同炮制品中总黄酮和多糖的含量差异。结果表明，枇杷叶生品总黄酮含量3.40%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品总黄酮含量分别为3.77%、4.02%、2.88%、3.98%；枇杷叶生品多糖含量9.16%，蜜炙品、姜汁炒制品、姜汤煮制品、清炒制品多糖含量分别为9.51%、7.95%、10.09%、9.19%。枇杷叶经过炮制后多糖和总黄酮的含量均有变化，其中总黄酮含量以姜汁炒枇杷叶中的为最高，多糖含量以姜汤煮枇杷叶中的为最高。

关键词：枇杷叶；炮制品；总黄酮；多糖

中图分类号： R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0270-03

1材料与方法

1.1仪器

HP8453型紫外-可见分光光度计（惠普公司）；80-2台式低速离心机（上海手术器械厂）；METTLER AL204型分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；FZ102粉粹机（北京市永光明医疗仪器厂）。

1.2试剂与试药

枇杷叶（购于浙江震元医药连锁有限公司，产地为浙江），经鉴定为蔷薇科枇杷属植物枇杷的干燥叶。D-无水葡萄糖 （购自中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904），芸香苷（购自中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707），重蒸苯酚，浓硫酸、乙醇、亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠等试剂为分析纯。

1.3样品的制备

1.3.1枇杷叶及其炮制品的制备生枇杷叶：取枇杷叶 20 g，用纯净水洗后烘干。

蜜炙枇杷叶：取炼蜜冷开水4 ∶1稀释后加入枇杷叶丝拌匀，闷润，置锅内文火加热（炒干），炒至微黄色、不黏手时，取出晾凉。每100 kg枇杷叶，用炼蜜20 kg。

姜汁炒枇杷叶：枇杷叶丝加姜汁拌匀，润透后置锅内文火加热，炒干，取出晾凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

姜汤煮枇杷叶：取干姜片，加水与枇杷叶同煮至水尽，取出枇杷叶，炒干，放凉。每100 kg枇杷叶用干姜3 kg。

清炒枇杷叶：取净枇杷叶，置锅内，用文火加热，炒至微焦，有香气，取出放凉。

1.3.2枇杷叶总黄酮样品溶液及对照品的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制品粉末各1.0 g，用75%乙醇50 mL加热回流提取3次，每次2 h，趁热过滤，滤液在60 ℃下减压浓缩蒸去乙醇后，于分液漏斗中用相同体积的乙醚萃取2～3次，除去叶绿素及蜡质等，最后用75%乙醇定容至50 mL，即得总黄酮样品溶液。

精确称取芸香苷0.019 9 g，60%乙醇定容至50 mL量瓶中，摇匀即得对照品。

1.3.3枇杷叶精制多糖的制备及其溶液的配制称取枇杷叶粉末30 g，加10倍量80%乙醇于90 ℃水浴中回流3次，每次2 h，抽滤。药渣挥尽乙醇后，加入10倍量水，加热回流3次，每次2 h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至60 mL，取出，加乙醇使醇含量达到80%，于4 ℃冰箱中过夜，过滤，干燥，即得枇杷叶粗多糖。

将粗多糖以水复溶，用Servage法[6]除蛋白 （氯仿-正丁醇，体积比4 ∶1），反复操作，用考马斯亮蓝法[7]测定至无蛋白为止。用95%乙醇调至醇浓度达到80%，4 ℃静置过夜，离心，沉淀用热蒸馏水溶解后抽滤，滤液浓缩至60 mL，再加95%乙醇使含醇量达到80%，4 ℃静置过夜，将离心后的沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，于60 ℃烘干至恒重，得精制的枇杷叶多糖。

精确称取枇杷叶精制多糖0.012 0 g，置于50 mL容量瓶中，加水溶解，摇匀定容，得浓度为0.24 mg/mL的枇杷叶精制多糖溶液。

1.3.4枇杷叶多糖样品溶液及对照品溶液的制备精确称取枇杷叶生品及各种炮制粉末各1.0 g，用80%乙醇50 mL加热回流2次，每次2 h，过滤后取滤渣挥尽乙醇后，用50 mL水回流提取3次，每次2 h，趁热抽滤，合并滤液，浓缩后移入50 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。

精确称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.049 9 g，置于 50 mL 容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，得浓度为 0.998 mg/mL 的葡萄糖对照品溶液。

2结果与分析

2.1枇杷叶总黄酮含量测定

2.1.1标准曲线的绘制取芸香苷对照品溶液0.5、1.0、15、2.0、2.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，依次加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加10%氯化铝溶液 0.3 mL，摇匀后放置6 min，再加4%氢氧化钠溶液4 mL，加60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min后，以随行试剂作空白参比在510 nm波长处测定吸光度D。以D为纵坐标，以芸香苷浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=10571x-0.031（r=0.999 8），说明芸香苷在0.019 9～0.099 5 mg/mL 范围内，线性关系良好。

2.1.2稳定性试验取供试品溶液1.0 mL，置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，间隔10 min测定1次，连续测定1 h，结果吸光度值的RSD为1.85%，表明供试品溶液在室温下放置60 min内稳定。

2.1.3精密度试验精确吸取芸香苷对照品溶液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，按“2.1.1”节方法测定吸光度，平行测定6份，RSD为1.39%，表明仪器精密度良好。

2.1.4重复性试验精确称取同一批次粉碎后的枇杷叶生品6份，按“1.3.2”节操作制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，RSD为227%，表明重复性良好。

2.1.5加样回收率试验精确称取枇杷叶生品1.0 g 6份，分别加入芸香苷对照品35 mg，按照“1.3.2”节方法制备供试品溶液，取1.0 mL置于10 mL量瓶中，按照“2.1.1”节方法测定吸光度，计算芸香苷平均回收率为100.71%，RSD为203%（n=6）（表1）。endprint