高效液相色谱法测定红宝散中葛根素含量

2014-11-08裴明日王苗苗

中国药业 2014年10期

裴明日，王苗苗，姜丽

(吉林省吉林市食品药品检验所，吉林吉林 132001)

红宝散由葛根、红花、紫草等14味中药制成的散剂，具有祛瘀止痛、强筋壮骨之功效[1]。该制剂为成方制剂，无含量测定方法。为有效控制药品质量，提高该制剂的质量标准，笔者采用高效液相色谱法测定葛根素的含量，结果表明，该方法准确、简便、可行，可供该制剂质量控制参考。

1 仪器与试药

LC-2010A型高效液相色谱仪;CLASS-VP色谱工作站;METTLER TOLEDO AG-135型电子天平。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，纯度 96．0%，批号为110752-200912);红宝散(市售样品，吉林市皇城股骨头专科医院，批号分别为120401，120402，120403);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Apollo C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -水(25 ∶75);流速:1．0 mL/min;检测波长:250 nm;柱温:室温。理论板数按葛根素峰计算应不低于4 000。

2．2 溶液制备

精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为0．1001g/L的溶液，即得对照品溶液[2]。取本品适量，研细，取约1．0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定质量，加热回流30 min，放冷，再称定质量，用30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液[2]。因实验室只能做小量的样品，故按处方量将取样量减量，取除葛根以外的处方中其余药材1/10的量，依法制成散剂，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取2．2项下3种溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。可见，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间(葛根素20．292 min)的色谱峰，阴性试验无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 1，2，5，8，10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=6 000 000 X+6 174．1，r=1．0000(n=5)。结果表明，葛根素进样量在 0．1001 ～1．0010μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

稳定性试验:精密吸取葛根素对照品溶液(0．100 1 g/L)，按拟订色谱条件分别在 0，4，8，12，24 h时测定。结果的 RSD为0．8%，表明葛根素对照品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一样品(批号为120403)共5份，依法制备供试品溶液，按拟订方法测定。结果的 RSD为0．7%，表明该方法重现性较好。

精密度试验:精密吸取葛根素对照品溶液(0．100 1 g/L)5 μL，按拟订色谱条件重复进样5次测定，计算葛根素面积的 RSD为0．6%，表明仪器精密度较好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为120403，葛根素含量3．972 mg/g)约1 g，精密称定，共9份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入葛根素对照品，相当于样品含量的80%，100%，120%，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果见表1。

2．4 样品含量测定

精密称取3个批号的样品(每个批号2份)，依法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，测定3批样品中葛根素的峰面积，按外标法计算其含量，结果批号分别为120401，120402，120403的3批样品中葛根素含量分别为 2．983，4．207，3．972 mg/g。