表达猴免疫缺陷病毒Env蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选
2014-10-27朱羿龙李昌刘存霞杜寿文王茂鹏叶飞谭鹏邢彬刘继朱光泽郭焱金宁一
朱羿龙,李昌,刘存霞,杜寿文 ,王茂鹏,叶飞,谭鹏,邢彬,刘继,朱光泽,郭焱,金宁一
1.军事医学科学院 军事兽医研究所,吉林 长春 130122;2.长春中医药大学,吉林 长春 130117
据世界卫生组织统计,2010年新感染人免疫缺陷病毒(HIV)的患者约270万人,而截至2010年底,约有3400万人携带HIV,所以迫切需要安全、有效的疫苗来应对HIV的蔓延。但是,由于抗原表位的时常突变、免疫原性弱,以及疫苗所诱导的抗原免疫反应时间短等原因,导致疫苗研发屡遭挫败[1-3]。对于其他病毒传染病,如麻疹、腮腺炎和风疹等,这种类似于免疫原性的问题是通过发展减毒疫苗株来解决的[4],但是对于HIV和猴免疫缺陷病毒(SIV)而言,减毒活疫苗虽然很具有吸引力[5-6],但却存在前病毒整合和某些情况下转变为野生毒株的风险[7]。相反,活病毒在作为HIV疫苗载体时具备了相当优秀的免疫原性[8-11],其中以禽痘病毒为载体的HIV疫苗已开始临床应用,如Aventis Pasteur公司开发的重组金丝雀病毒载体ALVAC与gp120亚单位疫苗联合应用,并均可在受试者中检测到CTL反应[12]。
SIV与HIV-1具有一定的同源性,部分SIV毒株接种于亚洲猴子,会使其感染并产生类似艾滋病的症状[13],因此,用SIV感染亚洲猴属作为模型被推荐替代HIV-1感染,使得SIV作为HIV的模式病毒在疫苗领域得到广泛应用。包膜糖蛋白(Env)在病毒进入宿主细胞的过程中起着至关重要的作用,我们以SIV env作为目的基因,以中国鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)疫苗株FPV282E4为载体,以EGFP为标记基因,采用挑斑方法筛选重组FPV,利用PCR、RT-PCR和Western印迹进行鉴定和遗传稳定性分析,最终获得一株稳定表达SIV Env蛋白的重组FPV,通过其所产生的免疫应答反应,可为HIV疫苗研究提供可资借鉴的数据。……
