毕衡，杨立丁，包可，叶国裕，赵文韬，姚哓

（云南省中医医院骨伤科，昆明 650021）

富血小板血浆（PRP）是通过离心自体全血所得到的血小板浓缩物，当血小板聚集激活后，释放出多种与骨再生有关的生长因子，这些生长因子具有促进细胞增殖、分化、趋化和刺激血管化等多方面作用。利用血小板生长因子刺激周围骨再生，修复周围骨缺损是国际医学界研究的热点。PRP因其制备简单、易获取、无免疫原性及疾病传播的风险等优点在骨再生研究中受到越来越多的重视［1，2］。目前报道的PRP制备方法种类繁多，所制得的PRP中血小板浓度也有差别。本实验将采用3种简单的手工离心方式获得PRP液，通过血小板计数、白细胞计数，探讨其相关性，测定活化前后PRP中血小板衍化生长因子（PDGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）水平，评价不同方法所得PRP的活性。

1 材料和方法

1.1 实验动物

实验在昆明医科大学动物实验室完成，15只大耳白兔（许可合格证号：scxk（111）2008-24），体质量2.1～2.6kg。

1.2 实验设备及试剂

XE-2100血液分析仪及配套设备，低速常温离心机（ThermoIEC CL40、美国），倒置显微镜（上海、TS100），酶标仪（北京普朗酶标仪DNM-9602G），移液器，枸橼酸钠，CaCl2，EDTA-K2抗凝管，PDGF、TGF-β1酶联免疫分析试剂盒（上海生物科技有限公司）。

1.3 实验方法

咪达唑仑液0.5mg/kg耳缘静脉缓注，待动物麻醉起效后固定于手术台。使用20mL无菌注射器和装有枸橼酸钠5mL试管，心脏抽取血液至18 mL，将血液分别放入4个5mL离心管，每管4mL，其余2mL做全血对照，室温静置6h。采用一次离心法，即每管4mL对称放置于离心机，用250g×10min离心，离心后吸取全部上清液移至另一EDTA-K2管，将白膜层交界面上下3mm移至另一离心管，即为PRP液。……