张慧茹，翟晋豫，刘 珍，王雪琴，孟素香

（1.河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001；2.河南省生物工程技术研究中心，河南郑州450001）

细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）是一类存在于肺泡、腺泡、子宫内膜等组织单层上皮细胞中的酸性蛋白质，正常状态下为寡聚体，其分子质量为40ku，pI值为5.2，以非可溶的形式存在于细胞骨架中，当细胞发生癌变后，CK19会随着细胞的降解以可溶性片段的形式释放到血液中。1992年，Bodenmuler H［1］利用细胞融合技术，制备出了2株单克隆抗体，即BM19.21和 KS19.1，经免疫学测定，这两种抗体可特异性地与CK19中的某些片段相结合。随后，将这两种抗体结合的抗原片段命名为CYFRA21－1，即目前所指的细胞角蛋白19片段。

国内外大量研究报道指出，CYFRA21－1可作为口腔鳞状细胞癌、宫颈鳞癌、肺癌、胰腺癌等上皮细胞肿瘤性疾病的标志物［2－3］，通过检测 CYFRA21－1在血清中含量的变化，可用于癌症患者上皮细胞癌的生长状况和患者愈后的分析。目前常用德国Roche、法国CIS等国外试剂盒进行检测。与国外产品相比，国内研发的检测试剂盒存在特异性差、灵敏度低等问题。因此，制备高效价特异性CYFRA21－1单克隆抗体，可为诊断检测试剂盒的研发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

CYFRA21－1抗原为美国Cal Bioreagents公司产品；成年雌性Balb／c小鼠为郑州大学医学院实验动物中心饲养；Quick AntibodyTM免疫佐剂为北京康碧泉生物科技有限公司产品；SP2／0小鼠骨髓瘤细胞由河南工业大学动物生理实验室保存；HAT、PEG4000、RPMI－1640培养基均为 Gibco公司产品；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）为上海尚宝生物科技有限公司产品；HRP－羊抗鼠IgG为Jackson公司产品；……