张永胜 张松岩

我国是耐多药结核病患者人数最多的国家之一, 全国结核病耐药性基线调查报告显示, 我国结核分枝杆菌的初始耐药率为28.1%, 继发耐药率为41.1%, 耐多药结核病(MDR-TB)为8.32%［1］, 耐多药结核病的情况很严重, WHO已将我国作为全球25个耐多药结核病重点国家之一［2］。目前常规结核分枝杆菌药敏试验不能满足患者和临床需要。以噬菌体法进行结核分枝杆菌检测及药物敏感性试验, 在结核分枝杆菌检测和药敏应用研究备受关注。本研究利用噬菌体法对71株结核分枝杆菌临床分离株分别进行链霉素、利福平、异烟肼药物敏感性进行分析, 观察与比例法的符合率, 并对肺结核患者139份临床痰样本, 直接进行结核分枝杆菌检测应用研究。

1 材料与方法

1.1 样本来源 71株结核分枝杆菌临床分离株来自本所确诊的肺结核患者的痰样本培养物, 并经对硝基苯甲酸(PNB)鉴定为结核分枝杆菌；139份临床痰样本, 来自本所门诊临床确诊的肺结核患者。

1.2 方法

1.2.1 本用NaCl-NaOH去污染, 用15 ml PhageTek MB Medi Plus冲洗, 37℃过夜。(菌液不用去污染, 药敏试验加入相应药物, S、R孵育24 h, H孵育48 h, 药物终浓度分别为S 1 μg/ml、R 2 μg/ml、H 0.2 μg/ml)

1.2.2 感染噬菌体 向标本中加100 μl噬菌体, 37℃孵育1 h。

1.2.3 杀死结核(TB)体外游离的噬菌体 向标本中加100 μl强效病毒剂, 充分震荡, 静置5 min。

1.2.4 中和 向标本中加5 ml Medium plus , 片刻静置。

1.2.5 表达 向标本中加1 ml帮助细胞, 倒入瓶皿中, 加入5 ml融化的琼胶(不易过热50～60℃), 迅速旋转混匀, 静置,37℃过夜。

1.2.6 结果判定 0～19个菌斑 表明阴性结果, 说明标本中无活着的结核杆菌；20或更多菌斑 表明阳性结果, 说明标本中有活着的结核杆菌。……