白尚星

不同培养基对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

白尚星

目的 观察不同培养基对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)生物学特性的影响, 优化培养方法。方法 采用贴壁法从正常足月胎儿脐带中分离出间充质干细胞, 细胞贴壁后利用DMEM/F12, Mesen PRORSTMMedium这两种培养体系进行体外扩增, 绘制生长曲线, 流式细胞仪检测其表面标志。结果 从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形, 呈平行排列生长或漩涡状生长；细胞表达CD29、CD44, 不表达CD34、CD45和HLA-DR。结论 加入Mesen PRORSTMMedium培养的细胞增殖速度快,更适合于脐带间充质干细胞的体外扩增。

间充质干细胞；脐带；生物学特性

间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)来源于发育早期的中胚层, 是具有高度自我更新能力, 高度增殖能力和多向分化潜能的多能干细胞［1,2］, 广泛存在于骨髓、脂肪、脐血、脐带等多种组织中［3］。脐带为分娩废弃物, MSC含量丰富, 无需有创穿刺即可获得, 且较骨髓来源的MSC扩增能力更强, 成为近年来MSC研究的重要来源之一［4］。本研究采用两种不同培养基培养hUC-MSCs, 并对其进行生物学特性的观察、细胞免疫表型的鉴定, 以期建立一种稳定、高效、快速、经济的hUC-MSCs富集方法, 为临床细胞移植提供实验支持。

1 材料

1.1 脐带 选择足月胎儿的脐带, 产妇身体健康, 肝功能正常, 无传染性疾病, 签署知情同意书。脐带4℃无菌保存, 4 h内完成实验操作。

1.2 主要试剂 DMEM/F12, Mesen PRORSTMMedium和胰蛋白酶购自GibCO；胎牛血清(FBS)购自HyClone；鼠抗人抗体CD45-FITC、CD34-FITC、CD29-FITC、CD44-FITC、HLADR-FITC购自BD。

2 方法

2.1 人脐带MSCs 的分离、培养及扩增 脐带剪成3～5 cm小段取出脐带放入培养皿中, 用0.9%氯化钠注射液冲洗, 洗尽血液。……