王 岩，黄 丽, 崔尚金，李江南，杨春梅，于会彬，郭东伟，张元峰，夏雪山，翁长江*

(1.昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明 650500；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队，黑龙江哈尔滨 150001）

猪脑心肌炎病毒2B蛋白与RACK1蛋白相互作用的鉴定

王 岩1,2，黄 丽2, 崔尚金2，李江南2，杨春梅2，于会彬2，郭东伟2，张元峰2，夏雪山1*，翁长江2*

(1.昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明 650500；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队，黑龙江哈尔滨 150001）

为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV）2B蛋白相互作用的宿主蛋白，本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合，激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质中。为定位RACK1与2B蛋白相互作用区域，本研究构建了RACK1截短表达重组质粒，并将其与pCAGGS-Flag-2B共转染HEK293细胞，利用免疫共沉淀试验验证其相互作用区域。结果显示2B蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用，并且证明相互作用区域位于RACK1蛋白的N端。

猪脑心肌炎病毒；酵母双杂交；2B蛋白；RACK1蛋白；相互作用

猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV）属于小RNA病毒科，心病毒属，无囊膜单股正链RNA。该病毒主要引起多种哺乳动物发生心肌炎和脑炎等疾病。1958年首次在巴拿马证明EMCV为猪的一种致死性疾病的病原[1]。EMCV基因组长7.8 kb，含有一个大的开放性阅读框(ORF），编码4个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4）和7个非结构蛋白(2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D）[2-3]。……