李媛媛，郭 晶，李旭勇，王金良，范 俊，梁立滨，邓国华，施建忠，陈化兰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒所引起的一种禽源性疾病，根据HA和NA的抗原差异可将禽流感病毒(AIV)分为17个H亚型和10个N亚型[1]。虽然家禽中感染H7N9亚型AIV已有报道，但2013年以前，并未发现其感染人的情况[2]。2013年3月，在上海、安徽两地出现急性呼吸道感染患者，后被证实为新型H7N9 AIV感染[3]，截止10月25日，出现人感染H7N9亚型AIV 137例，死亡45例，死亡率高达33%。这种新型流感病毒的遗传背景十分复杂，是一种多元重组病毒，其HA基因与H7N3具有很高的同源性，NA基因与H4N9、H7N9、H11N9均具有很高的同源性，其内部基因来源于H9N2[4-5]。这种对家禽呈现低致病力的病毒很容易在禽类中存在却因无症状而不被注意，但其对人却具有很高的致病力甚至死亡率[6]，因此建立H7N9亚型AIV反向遗传操作系统对该病毒致病机理和跨宿主传播机制的研究以及研制重组疫苗候选株至关重要。

本研究以H7N9亚型AIV CK/53为亲本病毒株，通过建立反向遗传操作系统，为今后对病毒表型的核酸水平因素的研究提供技术平台。构建的H7N9亚型AIV疫苗候选株CK53/PR8，为进一步的免疫保护试验奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株及主要实验材料 A/chicken/Shanghai/S1053/2013(CK/53)由本实验室分离和保存；PR8反向遗传操作系统由本实验室构建[7]；双向表达载体pBD、293T、MDCK、A549细胞由本实验室保存；10日龄SPF鸡胚由本研究所实验动物中心提供。……